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- mlBio/酶联生物
- ml2824
- 国内
- 2025年07月04日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
24
- 英文名：
氧化型谷胱甘肽GSSG含量测试盒
- 保质期：
12个月
- 供应商：
上海酶联生物科技有限公司
- 保存条件：
避光 , 低温保存
- 规格：
100管/96样
氧化型谷胱甘肽GSSG含量测试盒
微量法
注 意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
GSH/GSSG是细胞内重要的氧化还原对之一。因此，测定细胞内GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值，能够很地反映细胞所处的氧化还原状态，也是谷胱甘肽氧化还原循环的主要指标之一。
测定原理：
利用2-VP法测GSSG含量。
自备仪器和用品：
低温离心机、水浴锅、可调节移液器、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸馏水。
试剂组成和配置：
试剂一：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体600μL×1支，4℃保存。
试剂三：液体50mL×1瓶，4℃保存。
试剂四：液体2.5mL×1瓶，4℃保存。
试剂五： 液体15μL×1瓶，-20℃保存。临用前加入0.3mL试剂三稀释，4℃保存。
试剂六：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入20 mL试剂三溶解，现配现用。
粗酶液提取：
1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清液（如上清不清澈，再离心3min）待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；8000g 4℃离心10min，取上清液（如上清不清澈，再离心3min）混匀待测。
3. 血清等液体：直接测定。
氧化型谷胱甘肽GSSG含量测试盒
GSSG含量测定：
1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到412nm，蒸馏水调零。
2. 试剂三置于25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）水浴中保温30min。
3.取1 mL EP管，加入100μ L上清液，5 μ L试剂二，盖紧后混匀，得混合液，置于37℃水浴30min；取21μ L混合液于96孔板，然后依次加入20 μ L试剂四、2 μ L试剂五和140 μ L试剂六，迅速混匀后，测定30 s和150 s光吸收A1和A2，计算ΔA=A2-A1。
GSSG含量计算公式：
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、标准条件下测定的回归方程为y=0.0276x-0.0011；x为标准品浓度（nmol/mL），y为吸光值(ΔA)。
2、 按蛋白浓度计算
GSSG（nmol/mg prot）=(ΔA+0.0011)÷0.0276×V样÷(V样×Cpr)=36.23×(ΔA+0.0011)÷Cpr
3、按样本鲜重计算
GSSG（nmol /g 鲜重）=(ΔA+0.0011)÷0.0276×V样÷(V样÷V样总×W)=36.23×(ΔA+0.0011)÷W
4、按细胞数量计算
GSSG（nmol/104 cell）=(ΔA+0.0011)÷0.0276×V样÷(V样÷V样总×细胞数量)=36.23×(ΔA+0.0011)÷细胞数量
5、按照液体体积计算
GSSG（nmol/mL）=(ΔA+0.0011)÷0.0276×V样÷V样=36.23×(ΔA+0.0011)
V样：反应中加入样本体积，20μL；V样总：加入提取液体积， 1mL；W：样品质量，g，Cpr：样本蛋白浓度（mg/mL）
b.使用96孔板测定的计算公式如下
1、标准条件下测定的回归方程为y=0.0138x-0.0011；x为标准品浓度（nmol/mL），y为吸光值(ΔA)。
2、 按蛋白浓度计算
GSSG（nmol/mg prot）=(ΔA+0.0011)÷0.0138×V样÷(V样×Cpr)=72.46×(ΔA+0.0011)÷Cpr
3、按样本鲜重计算
GSSG（nmol /g 鲜重）=(ΔA+0.0011)÷0.0138×V样÷(V样÷V样总×W)=72.46×(ΔA+0.0011)÷W
4、按细胞数量计算
GSSG（nmol/104 cell）=(ΔA+0.0011)÷0.0138×V样÷(V样÷V样总×细胞数量)=72.46×(ΔA+0.0011)÷细胞数量
5、按照液体体积计算
GSSG（nmol/mL）=(ΔA+0.0011)÷0.0138×V样÷V样=72.46×(ΔA+0.0011)
V样：反应中加入样本体积，20μL；V样总：加入提取液体积， 1mL；W：样品质量，g，Cpr：样本蛋白浓度（mg/mL）
注意事项：
1.提取过程中去掉蛋白质，所以提取液不能用于测定蛋白含量。
2.临用前配制的试剂配后4℃保存，2天内使用完毕。
3.低检出限为0.1μmol/L。
4.反应温度严格来说，为保证重复性，应在25℃下进行反应。
5.反应时间需精确控制，否则会影响反应速率计算，产生较大误差。
6.样品中的GSSG浓度尽可能低一些，否则反应速率太大，没法控制，所以稀释倍数要尽量大些。
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文献和实验GSH和GSSG 参照 Anderson等 （1992）。取0.5 g样品，加入3 mL冰冷的6%的偏磷酸（含1 mmol•L-1 EDTA ， pH 2.8），冰浴研磨，匀浆液以20,000 g，4 ℃离心15 min，取上清液来马上测定GSH和GSSG的含量或储存在-20 ℃下等待测定。总的GSH和GSSG含量测定如下：200 μL提取液加 1.2 mL反应液包含400 μL反应液1（110 mmol•L-1 Na2HPO4•7H20， 40 mmol•L-1 NaH2PO4•H2
「参考值」 高铁血红蛋白还原75%以上。 「临床意义」 红细胞内6-磷酸葡萄糖脱氢酸酶（G-6PD）在磷酸戊糖旁路糖代谢中能使6-磷酸葡萄糖变为6-磷酸葡萄糖酸，同时使三磷酸吡啶核苷（TPN）变成还原型三磷酸吡啶核苷（TPNH），TPNH可使氧化型谷胱甘肽（GSSG）变成还原型谷胱甘肽（GSH）并使高铁血红蛋白（HbFe+++）还原成低铁血红蛋白（HbFe++）。本试验用亚硝酸钠使HbFe++氧化为HbFe+++（暗棕色）以美蓝的递氢作用加强磷酸戊糖旁路的糖
Cell Reports：复旦大学孙宁 / 李晓波团队发现 β-羟基丁酸对铁死亡的表观遗传学调控
代谢组检测。结果发现，GSH 合成的三种重要氨基酸底物显著降低，通过 GSH/GSSG 含量测定以及 4-HNE 染色，作者确定了 ALF 小鼠的胰腺中存在铁死亡的发生。接下来作者发现，在肝脏、血浆、及胰腺组织的代谢物变化中，共同降低的代谢物只有一种，即 β-HB。 那么，β-HB 与铁死亡之间是否存在相关呢？作者首先在体外进行了实验，结果显示，β-HB 能够显著抑制胰腺细胞系以及外分泌类器官的铁死亡。作者随后将 β-HB 以渗透泵的方式持续对 ALF 小鼠进行给药，结果发现，β-HB 能够显著
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