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2-Methyl-5-nitropyridine
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云萃
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文献和实验利用DHPLC 基因扫描技术进行深入彻底的突变与SNP 筛查 Stan L Lilleberg 变性高效液相色谱（DHPLC）是一种新型遗传变异筛查技术，可用于单碱 基替换（或单核苷酸多态性），小片段缺失或插入等多种基因突变的检测。 DHPLC 基因扫描技术可在生殖细胞系和体细胞系中筛查遗传变异。而像特定位 点DNA甲基化状态的改变等遗传现象也可用在DHPLC基础上建立的方法来检 测。遗传变异的生物学效应是由突变基因的位置和特点决定的，而功能相关基 因突变的发现对相关药物的研发
为初涉PCR的新手们准备了一道好菜，希望能使你们快速入门:)
；温度高特异性强，但过高则引物不能与模板牢固结合，DNA扩增效率下降；温度低产量高，但过低可造成引物与模板错配，非特异性产物增加。一般先由37℃反应条件开始，设置一系列对照反应，以确定某一特定反应的最适退火温度。也可根据引物的（G+C）%含量进行推测，把握试验的起始点，一般试验中退火温度Ta(annealing temperature)比扩增引物的融解温度TTm(melting temperature)低5℃，可按公式进行计算：Ta = Tm - 5℃= 4(G+C)+ 2(A+T) -5℃
) -5℃ 其中A，T，G，C分别表示相应碱基的个数。例如，20个碱基的引物，如果（G+C）%含量为50%时，则Ta的起点可设在55℃。在典型的引物浓度时（如0.2μmol/L）,退火反应数秒即可完成，长时间退火没有必要。 3．引物延伸温度温度的选择取决于Taq DNA聚合酶的最适温度。一般取70～75℃，在72℃时酶催化核苷酸的标准速率可达35～100个核苷酸/秒。每分钟可延伸1kb的长度，其速度取决于缓冲溶液的组成、pH值、盐浓度与DNA模板的性质。扩增片段如短于150bp，则可省略延伸这一步
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