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细胞内pH荧光探针 BCECF
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2',7'-双 - (2-羧乙基)-5-(和-6) - 羧基荧光素(BCECF)
1年
恒斐生物
-20
1mg
适用仪器
操作步骤
1.准备HHBS缓冲液和10%Pluronic®F-127溶液。
2.在高质量无水DMSO中制备2 mM至20 mM BCECF,AM原液。2.1使用的BCECF,AM的量:1毫克2.2所需浓度:2 mM2.3在合适的容器中,将1mg BCECF,AM与618.28μL无水DMSO混合。
3.使用10μMBCECF,AM 3在HHBS中制备2X工作溶液和0.08%Pluronic®F-127。3.1最终孔内浓度为BCECF,AM:5μM3.2Pluronic®F-127的最终孔内浓度:0.04%3.3在合适的容器中混合16μLBCECF,AM和25.6μL10%Pluronic F-127。然后,添加HHBS或您的缓冲区选择直到体积为3.2 mL。注意:对于大多数细胞系,我们建议最终浓度为BCECF,AM为4至5μM。注意:推荐的Pluronic F-127每孔浓度最终为0.02%至0.04%。
4.将100μL染料工作溶液加入已经含有100μL培养基的所需孔中。4.1该步骤将染料工作溶液从2X稀释至1X,并将每种组分的最终浓度调节至以下:5μMBCECF,AM,0.04%Pluronic®F-127
5.孵育染料5.1将染料加载板在细胞培养箱中孵育30-60分钟。5.2将染料加载板在室温下孵育30分钟。
6.准备HHBS缓冲液(或您选择的缓冲液)。6.1在合适的容器中加入HHBS或您选择的缓冲液,直至体积为4 mL。
7.用HHBS缓冲液或您选择的缓冲液替换染料工作溶液,使用1.0 mM Probenecid。7.1首先,从所需孔中除去200μL染料工作溶液和培养基。7.2在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS(或您选择的缓冲液)。
8.运行实验8.1为您的样品添加所需的处理。8.2以Ex / Em = 503/528 nm运行实验。
参考文献
The F0F1 ATP synthase regulates human neutrophil migration through cytoplasmic proton extrusion coupled with ATP generationAuthors: Jun Gao, Tian Zhang, Zhanfang Kang, Weijen Ting, Lingqing Xu, Dazhong YinJournal: Molecular Immunology (2017): 219--226
Oxidative Stress-Activated NHE1 Is Involved in High Glucose-Induced Apoptosis in Renal Tubular Epithelial CellsAuthors: Yiqing Wu, Min Zhang, Rui Liu, Chunjie ZhaoJournal: Yonsei Medical Journal (2016): 1252--1259
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