4-氨基-6-羟基嘧啶,4-Amino-6-hydroxyp

基于极性与非极性氨基酸的“二元组图” 进行蛋白质设计

)。在 β 片层库中，转角区域的设计则基于已知结构的天然蛋白质中氨基酸残基组合的 “转角可能性”（见注 2’；参考文献 [22])。 ( 2 ) 转角区域的序列中可引入限制性位点。这在基因扩增中常常很有用（见 9.2.3；参考文献 [8])。 ( 3 ) 固定区域的长度应满足序列特异性退火的需要。重叠 10~15 个碱基的寡核苷酸对通常用于退火反应。亦可通过固定转角区域前后密码子中的 1 或 2 个碱基来帮助退火。例如，合成寡核苷酸链 (5， - N AN - N TN - N TN - N

应用末端截切、进化、再延长技术提高酶稳定性的方法

酶 A [19 ]、RNA 酶 HI[ 20 ] 、金黄色葡萄球菌核酸酶 R(staphylococcal  nuclease  R)[17] 、硫氛酸酶 [21，22]、Tag DNA 聚合酶的 Stoffel 片段 [23] 以及氯霉素乙酰转移酶 [18] 中得到证实。尽管部分蛋白质不能缺失其末端的甚至一个氨基酸，对于绝大多数蛋白质来说，其末端氨基酸的缺失会显著影响其表达水平、原始构 象和稳定性，然而在一定范围内仍然有功能（如较低的反应温度）。不过，一旦超越这一范围，末端截切便会导致不可

蛋白质库的设计和筛选---概率计算

同源蛋白，这些蛋白质可以是高度多样性的。当前用来产生这些合成库的技术包括饱和突变（saturation  metagenesis)；利用 PCR 的随机突变；“基因混编”，即将类似来源的 DNA 片段组合在一起；“定向”突变，即改变特定区域的 DNA 编码；以及序列的非同源、随机重组策略等（非同源重组可参见文献 [1]、[2] 及 [9])。对于设计合意的合成库的大小，下列考虑是必需的。 对于小的多肽库（如 10 个氨基酸长的十肽），有 2010 ( ≈ 1.02X1013，原文错误——译者注）种可能的氨基