稳定表达EBNA1的人胚肾细胞

293T细胞的使用全攻略，助您避开培养“雷区”

在分子生物学、基因功能研究、蛋白表达纯化以及病毒载体包装领域，293T [HEK-293T]（人胚肾细胞） 堪称“劳模级”工具细胞。它源自经典HEK-293细胞，因稳定整合了SV40大T抗原温度敏感基因，而获得了强的外源基因表达能力和高转染效率，是重组蛋白生产、慢病毒/逆转录病毒包装、CRISPR基因编辑等实验的shou选宿主细胞。 本文将从细胞档案、培养核心技巧、常见问题、高影响力文献案例及实验图解析等维度，为您系统梳理293T细胞的使用全攻略，助您避开培养“雷区”，产出高质

嵌合(杂合)病毒载体介导的基因转移

起始序列和病毒包装信号序列，并插入了腺相关病毒的rep基因和两端的ITR序列，目的基因则插在腺相关病毒的两个ITR之间。这样的载体既具有单纯疱疹病毒能够进入并定位于细胞核的特点，又具有腺相关病毒能够扩增外源基因并将其整合在人类非分裂细胞染色体特定位置的特点；同时，也克服了前者不兼容外源启动子的弱点，避免了后者包装容量低的不足。离体实验证明，受单纯疱疹病毒/腺相关病毒嵌合载体感染的分裂细胞经过一定时间的选择后，可以形成稳定表达目的基因的细胞克隆，且对细胞的毒性很小。       (2)腺病

动物细胞培养及外源基因导入的原理和方法

的应用，其中对于分子生物学家及细胞生物学家而言，应用细胞培养对感兴趣的基因产物进行定位、运动及功能研究变得越来越重要。在克隆一个基因后的下一步，往往是将其导入不同类型细胞，以分析其表达，测定表达对细胞生长的影响，或将高表达的基因产物纯化。将外源DNA导入哺乳动物细胞有两种途径：稳定（永久）或暂时性转染。稳定转染的目的是将转移基因整合到细胞染色体DNA上，形成稳定表达转移基因的细胞系。一般需要共转染一个选择标记，用于追踪转染成功的细胞或转染效率。暂时性转染的目的是为了分析转移基因的暂时转录或表达