哌嗪-N,N'-双(2-羟基丙烷磺酸),3,3'-(Pipe

完整蛋白质从 SDS-PAGE 胶中的电洗脱及其 MALDI-TOF MS 分析

) 为标准 样品，发现这种方法比被动洗脱的效果好。当凝胶上样量为5jug 时，回收效率分别为： BSA   8 9 % 和 PhosB 5 8 % ^ 被 动 洗 脱 （ 将捻碎的蛋白质条带浸泡在I X 电泳缓冲液过夜） 无法回收到磷酸酶B ，并且只能回收加样的 B S A 的 39 %   ( 表 27-1)。在 进 行 MALDITOF  M S 之前，将浓缩蛋白质与基质共结晶，进一步去除残留杂质。混合蛋白质溶液 和基质溶液[芥子酸，l 〇 mg/m L 溶于乙腈/水 （3  :  7)]，置

基因插入位点和模式

H13N ) 溶于 2 ml DMSO ( 二甲基亚砜），用 10 mmol/L EDTA 定容到 200 ml，0.1% Triton X-100，100 mmol/L Na3PO4，pH 7.0 ( 6 ) 植物组织 DNA 提取试剂盒（Qiagen，#69104 ) ( 7 ) Taq DNA 聚合酶（如 GE Healthcare  UK Ltd，27-0799-06) 和 10x 反应缓冲液 ( 8 ) dNTP 储存液（2 mmol/L) ( 9 ) 引物（10 μ

环肽的合成方法

反应。几乎所有可用于偶联反应的活泼酯都可用于合成环肽，主要有对硝基酚酯、N-羟基琥珀酰亚胺酯、五氟苯酯和2，4，5-三氯苯酚酯。线性多肽的C端羧基与对硝基酚、N-羟基琥珀酰亚胺、五氟苯酚或2，4，5-三氯苯酚，在DCC或其他缩合剂存在下，于低温反应，很容易得到相应的活泼酯。这种N端通常带有BOC或Z保护的活泼酯在酸性条件下脱去保护基，形成活泼酯的氢卤酸盐，在弱碱性稀溶液中，如在吡啶，DMF或二氧六环一类介电常数较大的溶剂中，保持pH8～9，加热（60～100℃）或室温搅拌数小时至数日，最终可得到环肽