2-溴-5-羟基苯.甲.醛,2-Bromo-5-hydrox

分子生物学实验诊断技术

去离子甲酰胺500μl，甲醛180μl，混匀。约10-30μg/10μl纯化的RNA样品，加二倍（20μl）样品缓冲液（可点样一个凝胶孔lane）。60℃水浴15min，马上置冰浴。加1/10电泳指示剂。点样电泳，75-80V电泳4-5小时（指示剂泳动7～8cm），结束电泳。电泳期间正负极缓冲液要不断交换（可用蠕动泵），以免pH改变。电泳结束，将凝胶放在紫外光下可观察到人rRNA大亚基28S（5.1kb），小亚基18S(2.0kb)，记下大小亚基移动距离（或拍照），可作为被测mRNA分子量分析的参照

双脱氧链终止法测定DNA序列

。预电泳结束后，断电。插入样品梳，梳齿向下插入凝胶中3mm左右。用缓冲液小心冲洗每一加样小槽(齿间空隔)，用记号笔标明A、G、C和T4个小槽，每槽加入变性后的链延伸/终止液1.5-2μl。接通电源，40W恒压，电泳至示踪染料溴酚蓝至底边时切断电源。如待测片段较长而需继续点样，则等示踪染料二甲苯腈蓝称至距下缘4-5cm时切断电源，用缓冲液冲洗另一组4个加样小槽(应与前一组相隔1-2个加样小槽)，重复上样操作，然后继续电泳至第2组示踪染料溴酚蓝移至玻板下缘时断电，停止电泳。 4．放射自显影及结果分

分子生物学常用实验技术（page 2)

至100-200mg/ml。 3、连接反应后，反应液在0℃储存数天，-80℃储存2 个月，但是在-20℃冰冻保存将会降低转化效率。 4、粘性末端形成的氢键在低温下更加稳定，所以尽管T4 DNA 连接酶的最适反应温度为37℃，在连接粘性末端时，反应温度以10-16℃为好，平齐末端则以15-20℃为好。 5、在连接反应中，如不对载体分子进行去5'磷酸基处理，便用过量的外源DNA 片段（2-5 倍），这将有助于减少载体的自身环化，增加外源DNA 和载体连接的机会。 6、麦康凯选择性琼脂组成