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- 2025年12月21日
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- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商：
优利科（上海）生命科学有限公司
- 库存：
100
- 样本：
血清、血浆、组织液等液体样本
- 标记物：
hrp辣根过氧化物酶
- 适应物种：
牛
- 应用：
科研
- 检测方法：
酶联免疫法
- 检测范围：
详询
- 规格：
96T/48T
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断
检测原理
试剂盒采用双抗一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被多杀性巴氏杆菌抗体（PM-Ab）抗原的包被微孔中，依次加入标本、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中猪多杀性巴氏杆菌抗体（PM-Ab）的存在与否。
相关图片（一）
样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
- 酶标仪（450nm）
- 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
- 37℃恒温箱
操作注意事项
- 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
- 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
- 预处理后的样本请按照操作步骤用样本稀释液适当稀释以达到试剂盒的的最佳检测效果。
- 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
- 所有液体组分使用前充分摇匀。
相关图片（二）
| 名称 | 96孔配置 | 48孔配置 | 备注 |
| 微孔酶标板 | 12孔×8条 | 12孔×4条 | 无 |
| 阴性对照 | 0.5mL | 0.5mL | 无 |
| 阳性对照 | 0.5mL | 0.5mL | 无 |
| 检测抗体-HRP | 10mL | 5mL | 无 |
| 20×洗涤缓冲液 | 25mL | 15mL | 按说明书进行稀释 |
| 样本稀释液 | 6mL | 3mL | 无 |
| 底物A | 6mL | 3mL | 无 |
| 底物B | 6mL | 3mL | 无 |
| 终止液 | 6mL | 3mL | 无 |
| 封板膜 | 2张 | 2张 | 无 |
| 说明书 | 1份 | 1份 | 无 |
| 自封袋 | 1个 | 1个 | 无 |
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法
- 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。
- 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。
- 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
- 设置阴、阳性对照孔和样本孔，阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照各50μL；
- 待测样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；
- 随后阴、阳性对照孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
- 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
- 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
- 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
相关图片（三）
1. 试验有效性：阳性对照孔OD值平均值≥1.00；
阴性对照孔OD值平均值≤0.15。
2. 临界值（Cut off）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15
3. 阴性判断：样品OD值＜临界值（Cut off），样品为阴性
4. 阳性判断：样品OD值＞临界值（Cut off），样品为阳性
牛（Bovine）多杀性巴氏杆菌抗体（PM-Ab）ELISA检测试剂盒试剂盒性能
- 准确性：阳性对照孔OD值平均值≥1.00；阴性对照孔OD值平均值≤0.15，说明试验结果有效。
- 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
- 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。
- 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。
- 有效期：6个月
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文献和实验感染时，血循环中特异的IgM抗体滴度通常很高，而RF滴度通常相对要低得多。因此，在测定前对标本进行稀释，特异的IgM因高滴度存在仍可检出，而非特异的RF则会因为稀释变成非常低的滴度，从而对测定几乎不产生干扰。现在，有些特异IgM检测ELISA试剂 盒不要求稀释标本，直接检测，这样虽然方便了实验室技术人员的操作，但容易出现假阳性结果，并且由于某些慢性感染，如HBV的感染，血循环中抗HBelgM可持续以一定的滴度存在，标本不做稀释即进行检测，即可出现阳性结果，从而失去抗HBclgM用于HBV急性
个复合物(Ab1-Au-Ag-Ab2)而富集在检测区。由于胶体金自身显色而形成红色的质控线。该方法由于简便、快速、特异性、敏感性好，结果直观等优点，得到了空前广泛的发展和应用。 与其他检测技术比较，应用免疫胶体金快速检测技术时，样品不需要特殊处理，试剂和样本用量极小，样本量可低至1 μL～2 μL；既可用于抗原检测，也可用于抗体检测，检测时间大大缩短，也不需荧光显微镜、酶标检测仪等贵重仪器，试验结果可长期保存。但该技术一般作为定性，不易定量，大批量的集约性的操作，不如ELISA快而方便[6]。 二
、吗啡、藻类毒素，苯并（ a ）芘，抗生素，激素类以及一些营养物质和食品添加剂如麸蛋白（ Gliaclin ），酱油蛋白（ Soy protein ），花生蛋白（ Peanut protein ），牛乳清蛋白（ Borine Whey Protein ）等。 随着食品工业的发展，对分析检测的要求越来越高，从而也使 ELISA 方法将更趋完善。一方面为提高 ELISA 方法的灵敏度和特异性，制备单克隆抗体的技术的发展，将和 ELISA 法互相结合，从而使食品卫生分析达到 DNA 分子结构水平，促使
