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文献和实验,冰上放置5min 13.13探针:取出杂交管倒去杂交液,加入15ml杂交液,将探针加入,盖紧,于64℃杂交过夜 14.洗膜,压片:将杂交管中液体倒出,先加少量洗膜液Ⅰ,冷洗5min,倒出,再多加些洗膜液Ⅰ,冷洗10min,将膜取出测信号,根据信号大小决定是否热洗,若信号高,用洗膜液Ⅱ,Ⅲ继续洗,直到信号值达到适宜值为止,即膜上某一区域信号强,而其他区域信号弱代表杂交上了,然后包膜压片,放于-20℃或-80℃3天左右即可洗X片。 15.结果观察与分析
® 膜,再放上一层 Whatman 3MM 纸于 Saran® 膜上,置于凝胶干燥器上干燥。 6. 用增感屏于- 80 ℃,干凝胶 X 光片曝光 6 ~ 15 小时。 蛋白质与 RNA 的交联 l UV 交联反应 1. 在 1.5ml 微量离心管中加入下来反应物( X-RNA 除外): 缓冲液 IVT ( 20 ×)
XAR-5 底片下于 -70 ℃曝光过夜,检测阳性信号。 第二次筛选 19. 将 200 μ l LE392 指示菌加到 13 × 100mm 试管中。加 2.5ml 含 10mM MgSO4 的 48 ℃ LB 上层琼脂,室温下立即倒入 90mm 的 LB 琼脂板上,静止 5 分钟使之凝固,形成细菌苔,在培养皿底划 50 个格子,供第二次噬菌体的生长。 20. 按照膜上放射性墨水标记与 X 光底片对齐,用标记笔将膜上的位置孔标记在底片上,用透射光帮助对齐
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