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文献和实验粘膜层后,助手以一眼科镊将该组织一端固定,眼科镊与该组织垂直,并夹持整个横截面,术者同法夹持于附近,助手持第3把眼科镊提起肌组织,术者以手术刀锐性分离肌层;如此,向另一端推进,锐性分离肌条。 7.在超净台,取相当于0.5为X0.5 CM2肌块,室温下将其剪碎成1~2mm碎组织块8.转移入离心管 9.加入D-hanks液(操作成功) OR Dulbecco 10.离心1000转/min,10分钟 离心半径13cm,弃上清 11.加入I型胶原酶(2mg/ml) 5mg,(II型胶原
、250ml、100ml生理盐水瓶或血浆瓶代替。 (2)培养瓶:根据培养细胞种类要求不同培养瓶的形态各异,用于细胞传代培养的细胞要求瓶壁厚簿均匀,便于细胞贴壁生长和观察,瓶口要大小一致,口径一般不小于1cm,允许吸管伸入瓶内任何部位,规格有200ml、100ml、50ml、25ml、10ml等几种。用于外周血培养的常用10ml普通圆瓶。两种培养瓶均要求选用优质玻璃制成。 (3)培养皿:用于开放式培养及其它用途。分直径30mm、60mm、120mm等几种。 (4)吸管:常用的有长吸管和短吸管两类
X100(30% Triton X100+0. 01 MPBS 100 Ml)30 Min. 以增加细胞的通透性. 0. 01 MPBS清洗5 Min×3; 3. 5%小牛血清封闭1 h0. 01 MPBS清洗5 Min×3; 3. 加入用血清稀释液(牛血清白蛋白 1. 00 g+0. 01 MPBS 100 Ml)稀释的一抗. 4 ℃存放24-48 h;吸去抗体. 0. 01 MPBS洗5 Min×3; 4. 加入配好
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