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文献和实验培养细胞的生长过程和形态学变化并拍照。 1.4 免疫细胞化学鉴定:将含细胞盖玻片取出,0.01mol·L-1 PBS冲洗3次×5min;冷丙酮固定10 min;PBS冲洗(3次×5min);30g·L-1过氧化氢室温孵育15min;PBS冲洗3次×5min;滴加正常山羊血清,室温孵育20 min;滴加1:100 GC抗体,阴性对照以PBS代替一抗,37(C孵育60min;PBS冲洗3次×5min;滴加生物素标记羊抗兔IgG,37(C,20min;PBS冲洗3次×5min;滴加辣根酶标记链酶卵白
超过一个月。如果一次无法用完一 瓶,可将40~45 ml 分装于无菌50 ml 离心管中,由于血清结冻时体积会增加约10 %,必须预留此膨胀体积之空间,否则易发生污染或容器冻裂之情形。 2.一般厂商提供之血清为无菌,不需再无菌过滤。若发现血清有许多悬浮物,则可将血清入培养基内一起过滤,勿直接过滤血清。 3.瓶装(500ml) 血清解冻步骤(逐步解冻法): -20℃ 或–70℃ 至4℃冰箱溶解一天,至室 温下全溶后再分装,一般 50 ml 无菌离心管可分装40~45 ml。在溶解过程中须规则
国家尚未批准用于疫苗生产,因此在病毒分离时同时采用鸡胚和MDCK细胞两套系统。流感病毒“O”相毒株不凝集鸡红细胞,故近来在流感病毒鉴定中常用豚鼠或人红细胞来代替。然而,该两种细胞无细胞核,沉积慢,一般在红细胞凝集及凝集抑制测定中需60分钟才能观察结果,同时在“U”型孔板中,很难沉积成像眼泪样的点即当中常有小空洞。(一) MDCK细胞分离1、实验材料MDCK细胞Eagle氏培养液Hank‘s溶液0.25%胰酶和Versene消化液双抗(青、链霉素)或庆大霉素和抗真菌素胎牛或小牛
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