土壤硝酸还原酶Solid-Nitrate Reductase

土壤硝酸还原酶Solid-Nitrate Reductase，S-NR试剂盒
分光光度法 
注    意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：
S-NR催化土壤中硝酸盐还原为亚硝酸盐，是土壤硝态氮还原的关键酶。研究S-NR的活性对合理施肥，降低氮素的损失具有重要意义。

测定原理：
S-NR催化硝酸盐还原为亚硝酸盐，NO3ˉ +NADH+H＋→ NO2ˉ +NAD＋ +H 2 O；产生的亚硝酸盐能够在酸性条件下，与对–氨ji苯磺酸及 α - 萘胺定量生成红色偶氮化合物；生成的红色偶氮化合物在 540 nm 有大吸收峰，可用分光光度法测定。

需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。



试剂的组成和配制：
试剂一：液体10mL×1瓶，-20℃保存。
试剂二：液体8mL×1瓶，-20℃保存。
试剂三：液体15mL×1瓶，4℃保存（如出现结晶析出，60℃-90℃水浴溶解后使用）。
试剂四：液体15mL×1瓶，4℃保存。    
试剂五：标准品储备液1mL，-20℃保存。
0.1μmol/mL标准液的配制：用时将试剂五稀释100倍，即取 0.1ml 加蒸馏水定容至 10ml。

样品处理：
新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，过30~50目筛。

测定操作表：

试剂名称	1mL带盖离心管
	测定管	对照管	标准管	空白管
风干土样（g）	0.1	0.1
0.1μmol/mL标准液（μL）			100
蒸馏水（μL）		375		475
试剂一（μL）	375		375
试剂二（μL）	125	125	125	125

      混匀后，盖盖后37℃水浴24h，8000g25℃离心10min，取上清液

上清液（μL）	400	400	400	400
试剂三（μL）	250	250	250	250
试剂四（μL）	250	250	250	250

混匀，25℃显色20min后，4000g，25℃离心10min，用蒸馏水调零，540nm下读取各管吸光值。标准管和空白管只需测一次。每个测定管设一个对照管。
注意点：
务必先做2个样本的预测定，少部分土壤由于样本特殊性可能出现测定管小于对照管，请及时与我司技术支持联系，以获得针对样本特殊性的调整测定方法。

土壤硝酸还原酶Solid-Nitrate Reductase，S-NR试剂盒
S-NR活性计算：
单位的定义：每天每g土样中产生1μmol NO2ˉ的量为一个 S-NR活力单位。
S-NR（μmol /d/g土样）=C标准×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）×V反总÷W÷T =0.5×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）
C标准管：标准管浓度，0.1μmol/mL；V反总：反应体系总体积，0.5mL；T：反应时间，24h； W：样本质量，0.1g。