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文献和实验Labeling Tubulin with Tetramethylrhodamine Succinimidyl Ester
Materials 1.Drop frozen 2x cycled tubulin in a polymerization-promoting buffer.Stored at -80℃ 2.GTP,100 mM stock,titrate to pH ~7.Need 2 ml. 3.Waterbath,set at 37℃ 4.SS34 rotor,5 ml and 15 ml tubes and adaptors.Bring the rotor,adaptors,and tubes
Labeling Tubulin and Quantifying Labeling Stoichiometry
(warm = 37¡C) TLA100.4 or TLA100.3 and TLA100.2 rotors Small Dounce (2 ml) Note : 1M HEPES, pH to 8.6 with NaOH and store at -20¡C 2M K-Glutamate - dissolve glutamic acid to 2M, carefully pH with KOH such that 50 mM has a pH
一、原理荧光染料CFSE， 也可称为CFDA SE（5，6- carboxyfluorescein diacetate，succinimidyl ester） 即羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂，是一种可穿透细胞膜的荧光染料，具有与细胞特异性结合的琥珀酰亚胺脂基团和具有非酶促水解作用的羟基荧光素二醋酸盐基团，这使得CFSE成为一种良好的细胞标记物。当CFSE以含有两个乙酸基团和一个succinimidyl ester功能基团的形式存在时，不具有荧光性质，而具有细胞膜通透性，能够自由进入
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