Alpha Synuclein 寡聚体(动态学稳定的)

动态学稳定(kinetically stable) 的α-突触核蛋白寡聚体(SPR-484) 电镜图。该寡聚体没有使用任何诱导剂或抑制剂来锁定寡聚体状态，并且寡聚体含量能达到90%。SPR-484 的负染色透射电子显微镜图像在 80 Kv 下使用磷钨酸和醋酸铀染色在碳涂层的 400 目铜网格上获得。可以清晰的看到寡聚体结构，并且具有很高的均匀性。

动态学稳定的α突触核蛋白寡聚体(SPR-484) 可在冻融后37℃下孵育两周仍然稳定。(A)冻融一次后的动力学稳定寡聚体的Native PAGE，(B)和(C)分别是冻融一次后的和37℃孵育两周后的尺寸排阻色谱(SEC)。在峰值处，90%SPR-484在冻融后37℃下孵育两周仍然稳定于寡聚体状态。SEC使用Superdex 200 10/300 GL Increase色谱柱于磷酸缓冲液pH 7.4。注意：60kDa处出现条带是因为SPR-484中含有的少量单体，α突触核蛋白单体是一个内在无序的14kDa的蛋白，由于它在溶液中的伸展结构，游离的α突触核蛋白单体在活性电泳和SEC中的迁移和球状的60kDa寡聚体类似。

相比于原纤维，α突触核蛋白寡聚体有独特的二级结构。UV-CD 数据显示StressMarq的α突触核蛋白寡聚体有不同于单体和原纤维的独特二级结构。更具体的说, StressMarq的动态学稳定的α突触核蛋白寡聚体 (SPR-484) 显示出比1型α突触核蛋白PFFs (Type 1) (SPR-322) 多很多的α螺旋但是β折叠相对较少。 StressMarq的α突触核蛋白单体 (SPR-316) 在200nm处显示出强烈的负信号，暗示着无序的蛋白状态 (缺乏二级结构)。

动态学稳定的α突触核蛋白寡聚体(SPR-484) 对多巴胺能神经元有毒性并且可以诱发帕金森病理现象(pSer129)。(A) 经寡聚体处理后 11 天，大鼠原代多巴胺能神经元的存活率由抗 MAP2 抗体量化并表示为对照的百分比(B) 经寡聚体处理后 11 天，大鼠原代多巴胺能神经元中存在的 α-突触核蛋白 pSer129 水平通过抗 α-突触核蛋白 pSer129 抗体与抗 MAP2 抗体的比率量化，表示为对照的百分比。注：所有数据经过统计学验证，而非偶然性结果。

动态学稳定的α突触核蛋白寡聚体(SPR-484) 在大鼠原代多巴胺能神经元中诱导帕金森相关的pSer129病理现象。(A)用对照PBS缓冲液处理后11天的大鼠原代多巴胺能神经元，(B) 用10 µg/mL SPR-484处理后11天的大鼠原代多巴胺能神经元。细胞核染色蓝色(Hoechst)，多巴胺能神经元显示红色(MAP2)，病理现象为绿色(α-syn pSer129)。两个培养基都使用鸡抗-MAP-2 多克隆抗体, 小鼠抗-αsyn pSer129-特异的单克隆抗体, Alexa Fluor 488 羊抗小鼠IgG, Alexa Fluor 647 羊抗鸡IgG, 和应该标记物Hoechst 于相同的溶液. 白色箭头指出了几个 pSer129 病理现象较强的区域. 比例尺代表100 μm。注：SPR-484为E.coli 表达的，在加入神经元之前没有磷酸化。