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无锡云萃生物
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云萃
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文献和实验20 72 二、常用缓冲液 1.分子克隆常用缓冲液 2.磷酸缓冲液 (1)25℃下0.1mol/L磷酸钾缓冲液的配制※ pH 1mol/L K2HPO4(ml) 1mol/L KH2PO4(ml) 5.8 8.5 91.5 6.0 13.2 86.8 6.2 19.2 80.8 6.4 27.8 72.2 6.6 38.1 61.9 6.8 49.7 50.3 7.0 61.5 38
荧光染色大致步骤如下: a、制备活性较好的细胞悬液,调节浓度至107个/ml。 b、在小试管(5×50mm)中加入100ul细胞悬液,再加入100ul待检McAb的样品,混匀,4℃作用30-90分钟。 c、用洗涤液(PBS 900ml,小牛血清50ml,4%NaN3 50ml)洗二次,每次加洗涤液1-5ml,1000r/min离心5分钟,弃上清。加入100ul荧光抗体,4℃作用30-90分钟。 d、同法洗涤,将细胞重新悬于20-30ul含10%甘油和10-100ug苯二胺/ml的溶液中;滴加于载
条件的是用第一种方法,目前发表文章通常是用底物化学发光ECL。只要买现成的试剂盒就行, 操作也比较简单,原理如下(二抗用HRP标记):反应底物为过氧化物+鲁米诺,如遇到HRP,即发光,可使胶片曝光,就可洗出条带。三、主要试剂1、 丙烯酰胺和N,N’-亚甲双丙烯酰胺,应以温热(以利于溶解双丙稀酰胺)的去离子水配制含有29%(w/v)丙稀酰胺和1%(w/v)N,N’-亚甲双丙 烯酰胺储存液丙稀酰胺29g,N,N-亚甲叉双丙稀酰胺1g,加H2O至100ml。)储于棕色瓶,4℃避光保存。严格核实PH不得超过
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