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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃
- 保质期:
1年
- 英文名:
Endonuclease SfiI
- 库存:
999
- 供应商:
百生跃
- 规格:
4000U/2000U
| 规格: | 4000U | 产品价格: | ¥540 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 2000U | 产品价格: | ¥280 |
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文献和实验):5’―GCATGCGCGCGGCCGGGGAGGCC 含Sac∏,SphI,NotI和SfiI位点。 (5) 电泳鉴定扩增产物; (6) 特异限制性内切酶消化,克隆,转化宿主细胞,序列分析,表达研究等。 PCR第一循环中DNA合成是由anchor-poly(dC)引物(ANpolyC) 和5’端引物引导合成。Anchor的加入有两个作用:一是限定3’末端,防止PCR过程中3’末端可能沿同聚物尾不断的延伸;再则增加酶切位点或其他序列信息,利于基因克隆等操作。锚定-PCR对于分析免疫球蛋白、TCR甚至未知序列基因
了一种新技术COMPARE-MS,该法将MBD柱层析法与MS-RE联用,互补了各自单用的弊处,能够快速、敏感的检测DNA甲基化情况,可用于临床标本检测,作为早期诊断和肿瘤分级的依据[56]。其过程是:用非待测区的内切酶和甲基化敏感的限制性内切酶同时消化DNA片段,随后通过MBD柱捕获,保留了含有甲基化区的片段,最后通过实时PCR扩增定量分析(见图9)。 图9:联合甲基化敏感性限制性内切酶的MBD(COMPARE-MS)示意图。用甲基化以外的位点的内切酶(A酶)与甲基化敏感的内切酶(B酶)联用
本领。 经典分子克隆技术vs无缝组装克隆技术 技术总是随着时间向前发展的,由难到易,化繁为简,将不能变为可能。分子克隆技术的发展完美体现了这一点。 以构建表达载体为例,经典分子克隆中,要将目标片段插入载体,全靠内切酶的拆分和连接酶的拼接。关键是选择合适的酶切位点,使得酶切“拆”得的目标片段末端和相应载体末端正好能互补“拼”在一起,连接酶才能连起来。选择酶时首先不能破坏目标基因完整性(包含从起始密码到终止密码)及载体完整性;其次,尽量避免选两个酶切生成粘端一样的(粘端互补)——两边粘端一样的载体“偏爱
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