快速内切酶DpnII

DNA甲基化研究方法的回顾与评价（下）

了一种新技术COMPARE-MS，该法将MBD柱层析法与MS-RE联用，互补了各自单用的弊处，能够快速、敏感的检测DNA甲基化情况，可用于临床标本检测，作为早期诊断和肿瘤分级的依据[56]。其过程是：用非待测区的内切酶和甲基化敏感的限制性内切酶同时消化DNA片段，随后通过MBD柱捕获，保留了含有甲基化区的片段，最后通过实时PCR扩增定量分析（见图9）。 图9：联合甲基化敏感性限制性内切酶的MBD（COMPARE-MS）示意图。用甲基化以外的位点的内切酶（A酶）与甲基化敏感的内切酶（B酶）联用

基因表达快速分析新技术

的量多100 倍以上,为此Brenner 等设计了1167×107 个片段长32mer 的寡核苷酸,这样足可以保证生物体所有不同的cDNA 模板都能与不同的寡核苷酸相连接,而且每一个的微球体上也可承载104 ～105 个相同的cDNA 拷贝。 2. 用DpnII 酶切处理微球体上的cDNA 模板,形成粘性末端。 3. 用含有II 型限制性内切酶Bbv1 识别位点的不同寡核苷酸接头与连接在微球体上的cDNA 模板相连接,另外每一种接头的3’端还带有一个荧光标记,可与荧光探针杂交,产生

四步致胜奇招 高效克隆你值得拥有（上篇）

本领。 经典分子克隆技术vs无缝组装克隆技术 技术总是随着时间向前发展的，由难到易，化繁为简，将不能变为可能。分子克隆技术的发展完美体现了这一点。 以构建表达载体为例，经典分子克隆中，要将目标片段插入载体，全靠内切酶的拆分和连接酶的拼接。关键是选择合适的酶切位点，使得酶切“拆”得的目标片段末端和相应载体末端正好能互补“拼”在一起，连接酶才能连起来。选择酶时首先不能破坏目标基因完整性（包含从起始密码到终止密码）及载体完整性；其次，尽量避免选两个酶切生成粘端一样的（粘端互补）——两边粘端一样的载体“偏爱