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- 上海
- P1756
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
Plasmid#45337
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pCU-MET3-GFP念珠菌绿色荧光质粒
别称: Plasmid#45337
质粒属性
质粒简介
pCU-MET3-GFP是一个念珠菌绿色荧光表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7009 bp ds-DNA circular SYN 19-DEC-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7009
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 666..737
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
CDS 738..1598
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
rep_origin 1769..2357
/direction=RIGHT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
misc_feature 2817..3842
/label=MET3 promoter
CDS 3879..4595
/codon_start=1
/product="yeast-enhanced green fluorescent protein"
/label=yeGFP
/note="codons optimized for translation in S. cerevisiae
and C. albicans"
/translation="MSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTLK
FICTTGKLPVPWPTLVTTFGYGVQCFARYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDDG
NYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIKV
NFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLLE
FVTAAGITHGMDELYK"
rep_origin 5211..5666
/direction=RIGHT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
CDS complement(5797..6600)
/codon_start=1
/gene="S. cerevisiae URA3"
/product="orotidine-5'-phosphate decarboxylase, required
for uracil biosynthesis"
/label=URA3
/note="yeast auxotrophic marker, counterselectable with
5-fluoroorotic acid (5-FOA)"
/translation="MSKATYKERAATHPSPVAAKLFNIMHEKQTNLCASLDVRTTKELL
ELVEALGPKICLLKTHVDILTDFSMEGTVKPLKALSAKYNFLLFEDRKFADIGNTVKLQ
YSAGVYRIAEWADITNAHGVVGPGIVSGLKQAAEEVTKEPRGLLMLAELSCKGSLSTGE
YTKGTVDIAKSDKDFVIGFIAQRDMGGRDEGYDWLIMTPGVGLDDKGDALGQQYRTVDD
VVSTGSDIIIVGRGLFAKGRDAKVEGERYRKAGWEAYLRRCGQQN"
promoter complement(6601..6816)
/gene="S. cerevisiae URA3"
/label=URA3 promoter
ORIGIN
1 gacgaaaggg cctcgtgata cgcctatttt tataggttaa tgtcatgata ataatggttt
61 cttagcaggt tagactaaca tgcaaaaagt ttatattcat ttttgtagtt attcttgttt
121 tcattaggat gattacacac tgtggatgtg gattaatcga tcattgttaa tttagtgtag
181 ctactaccat ttcaaacaaa acgtaaattc ttgcagtcgt actggatctg tgaatctatt
241 agtatatatg aattaaagta gcttgtacat attattctgt tgaatcatat cgcagagcat
301 tggttgaaat ccaaaatata aaaatgtaat atcacaaaaa ataatactaa ttctaacatt
361 aatgggtcag atttttagtg aatacttaaa tttataatat cgtctattta agctagcaaa
421 tggaacaaca tttaaagtaa gaacatcata tctacatgaa aatgtatatt tcaatctgac
481 taataacgca gagcacatct ttcagtgatg tctgtcacat gatcaaaaag aattgtattt
541 aaataattca taataaaagc ttaaaaaatt acaataatga aaataaagta aataatgaca
601 tgggtaagag ttccgaaata gaatcttagt gtacaaaaca aaaattgcat cattagagat
661 ccccacattc aaatatgtat ccgctcatga gacaataacc ctgataaatg cttcaataat
721 attgaaaaag gaagagtatg agtattcaac atttccgtgt cgcccttatt cccttttttg
781 cggcattttg ccttcctgtt tttgctcacc cagaaacgct ggtgaaagta aaagatgctg
841 aagatcagtt gggtgcacga gtgggttaca tcgaactgga tctcaacagc ggtaagatcc
901 ttgagagttt tcgccccgaa gaacgttttc caatgatgag cacttttaaa gttctgctat
961 gtggcgcggt attatcccgt attgacgccg ggcaagagca actcggtcgc cgcatacact
1021 attctcagaa tgacttggtt gagtactcac cagtcacaga aaagcatctt acggatggca
1081 tgacagtaag agaattatgc agtgctgcca taaccatgag tgataacact gcggccaact
1141 tacttctgac aacgatcgga ggaccgaagg agctaaccgc ttttttgcac aacatggggg
1201 atcatgtaac tcgccttgat cgttgggaac cggagctgaa tgaagccata ccaaacgacg
1261 agcgtgacac cacgatgcct gtagcaatgg caacaacgtt gcgcaaacta ttaactggcg
1321 aactacttac tctagcttcc cggcaacaat taatagactg gatggaggcg gataaagttg
1381 caggaccact tctgcgctcg gcccttccgg ctggctggtt tattgctgat aaatctggag
1441 ccggtgagcg tgggtctcgc ggtatcattg cagcactggg gccagatggt aagccctccc
1501 gtatcgtagt tatctacacg acggggagtc aggcaactat ggatgaacga aatagacaga
1561 tcgctgagat aggtgcctca ctgattaagc attggtaact gtcagaccaa gtttactcat
1621 atatacttta gattgattta aaacttcatt tttaatttaa aaggatctag gtgaagatcc
1681 tttttgataa tctcatgacc aaaatccctt aacgtgagtt ttcgttccac tgagcgtcag
1741 accccgtaga aaagatcaaa ggatcttctt gagatccttt ttttctgcgc gtaatctgct
1801 gcttgcaaac aaaaaaacca ccgctaccag cggtggtttg tttgccggat caagagctac
1861 caactctttt tccgaaggta actggcttca gcagagcgca gataccaaat actgttcttc
1921 tagtgtagcc gtagttaggc caccacttca agaactctgt agcaccgcct acatacctcg
1981 ctctgctaat cctgttacca gtggctgctg ccagtggcga taagtcgtgt cttaccgggt
2041 tggactcaag acgatagtta ccggataagg cgcagcggtc gggctgaacg gggggttcgt
2101 gcacacagcc cagcttggag cgaacgacct acaccgaact gagataccta cagcgtgagc
2161 tatgagaaag cgccacgctt cccgaaggga gaaaggcgga caggtatccg gtaagcggca
2221 gggtcggaac aggagagcgc acgagggagc ttccaggggg aaacgcctgg tatctttata
2281 gtcctgtcgg gtttcgccac ctctgacttg agcgtcgatt tttgtgatgc tcgtcagggg
2341 ggcggagcct atggaaaaac gccagcaacg cggccttttt acggttcctg gccttttgct
2401 ggccttttgc tcacatgttc tttcctgcgt tatcccctga ttctgtggat aaccgtatta
2461 ccgcctttga gtgagctgat accgctcgcc gcagccgaac gaccgagcgc agcgagtcag
2521 tgagcgagga agcggaagag cgcccaatac gcaaaccgcc tctccccgcg cgttggccga
2581 ttcattaatg cagctggcac gacaggtttc ccgactggaa agcgggcagt gagcgcaacg
2641 caattaatgt gagttagctc actcattagg caccccaggc tttacacttt atgcttccgg
2701 ctcgtatgtt gtgtggaatt gtgagcggat aacaatttca cacaggaaac agctatgacc
2761 atgattacgc caagcgcgca attaaccctc actaaaggga acaaaagctg gagctcatac
2821 cagttacaat tagtattaca atggtttacc aagtacaaat tatgtaatat ggttataatt
2881 ggcttatatg tatggaggta gggaactgca ggttattgtt ctgttaaact accagtaatg
2941 caagacggct aagtcatatg actgccactt tgtcaatcct gaagaaaatg acaatagaaa
3001 gtgatataat acacgtgata tgcgtaggat gggacccaaa gatagccaca tcacatgatc
3061 ttcaaaaacc ccgtcaaaaa ggaataaatc gaaggaaaaa aaatgccacg tgactttgat
3121 agtcaaaatc aggttatatt actatacgat cccccacaca taacctttac cacacaccgc
3181 acgggctgga cttatcctat tagaaagcgg tgcagccagg gccaagaaaa cgcgaacgac
3241 gcagaaaaaa cgtcaagcaa aaaaactgtg gtgttattta aagcatacaa tttcctgcct
3301 ccctttaatg ctacggggga tctagcaaat gggaaaatat cacatgactt tggctagaag
3361 gggtgggaaa acagatattt tagtcacatt gtttgatttc acgtactaca cgatacacta
3421 cactacacaa tacactgcaa tacactacac tgtatggttc cctccggccc tggatatgct
3481 agcgaaggat cccaagccca tcgaggaaat cattcaagag catctgcagg tctcaaatac
3541 actaagtcca aacacaaaca gcactgagct aatccaagac accaattgca tgccttctca
3601 attagaacag tttattacac agcttataac tgtgcatctt gccattcttt tcgagatagc
3661 catttgcatt tgattaacat gcttagctcg ttctcaagcc acagtaaaat ggattgcctt
3721 ttgagtttcc atcgttgtat aaataggcac tcattcctat agccttgctc tttggtcttg
3781 tctctgtaat ggtaatagct gtaagtcagg atataacact ccagaaaaga aacacctaac
3841 aatctagaac tagtggatcc cccgggctgc aggaattcat gtctaaaggt gaagaattat
3901 tcactggtgt tgtcccaatt ttggttgaat tagatggtga tgttaatggt cacaaatttt
3961 ctgtctccgg tgaaggtgaa ggtgatgcta cttacggtaa attgacctta aaatttattt
4021 gtactactgg taaattgccg gttccatggc caaccttagt cactactttc ggttatggtg
4081 ttcaatgttt tgctagatac ccagatcata tgaaacaaca tgactttttc aagtctgcca
4141 tgccagaagg ttatgttcaa gaaagaacta tttttttcaa agatgacggt aactacaaga
4201 ccagagctga agtcaagttt gaaggtgata ccttagttaa tagaatcgaa ttaaaaggta
4261 ttgattttaa agaagatggt aacattttag gtcacaaatt ggaatacaac tataactctc
4321 acaatgttta catcatggct gacaaacaaa agaatggtat caaagttaac ttcaaaatta
4381 gacacaacat tgaagatggt tctgttcaat tagctgacca ttatcaacaa aatactccaa
4441 ttggtgatgg tccagtcttg ttaccagaca accattactt atccactcaa tctgccttat
4501 ccaaagatcc aaacgaaaag agagaccaca tggtcttgtt agaatttgtt actgctgctg
4561 gtattaccca tggtatggat gaattgtaca aataactgca ggtcgacctc gagaacacaa
4621 cccacagcta ccaccatcaa caatatttat atatataacg tacacataga aatcacacaa
4681 acagagtatt tattcttaac tacatgaact accatcagac cgtctgggcc actatataat
4741 gtgccattca taaacgtgat cactttacgt agcaggcaac cccaggtgaa aatttttcag
4801 cgagctgcca gattgtcagg tgaaaaactg aaaaaaactt ctgggcgatg agcttgtggc
4861 gggaaattaa gtatataaag cagttagttt cttctgcttc ttgtggttct gggtattctt
4921 gtaatatttg gaagaataga aaatcaagac tactgccttt cttttcatat tatagaggaa
4981 gaaatacgca cgaacacgat atagaggtaa aggtacccaa ttcgccctat agtgagtcgt
5041 attacgcgcg ctcactggcc gtcgttttac aacgtcgtga ctgggaaaac cctggcgtta
5101 cccaacttaa tcgccttgca gcacatcccc ctttcgccag ctggcgtaat agcgaagagg
5161 cccgcaccga tcgcccttcc caacagttgc gcagcctgaa tggcgaatgg acgcgccctg
5221 tagcggcgca ttaagcgcgg cgggtgtggt ggttacgcgc agcgtgaccg ctacacttgc
5281 cagcgcccta gcgcccgctc ctttcgcttt cttcccttcc tttctcgcca cgttcgccgg
5341 ctttccccgt caagctctaa atcgggggct ccctttaggg ttccgattta gtgctttacg
5401 gcacctcgac cccaaaaaac ttgattaggg tgatggttca cgtagtgggc catcgccctg
5461 atagacggtt tttcgccctt tgacgttgga gtccacgttc tttaatagtg gactcttgtt
5521 ccaaactgga acaacactca accctatctc ggtctattct tttgatttat aagggatttt
5581 gccgatttcg gcctattggt taaaaaatga gctgatttaa caaaaattta acgcgaattt
5641 taacaaaata ttaacgctta caatttcctg atgcggtatt ttctccttac gcatctgtgc
5701 ggtatttcac accgcatagg gtaataactg atataattaa attgaagctc taatttgtga
5761 gtttagtata catgcattta cttataatac agttttttag ttttgctggc cgcatcttct
5821 caaatatgct tcccagcctg cttttctgta acgttcaccc tctaccttag catcccttcc
5881 ctttgcaaat agtcctcttc caacaataat aatgtcagat cctgtagaga ccacatcatc
5941 cacggttcta tactgttgac ccaatgcgtc tcccttgtca tctaaaccca caccgggtgt
6001 cataatcaac caatcgtaac cttcatctct tccacccatg tctctttgag caataaagcc
6061 gataacaaaa tctttgtcgc tcttcgcaat gtcaacagta cccttagtat attctccagt
6121 agatagggag cccttgcatg acaattctgc taacatcaaa aggcctctag gttcctttgt
6181 tacttcttct gccgcctgct tcaaaccgct aacaatacct gggcccacca caccgtgtgc
6241 attcgtaatg tctgcccatt ctgctattct gtatacaccc gcagagtact gcaatttgac
6301 tgtattacca atgtcagcaa attttctgtc ttcgaagagt aaaaaattgt acttggcgga
6361 taatgccttt agcggcttaa ctgtgccctc catggaaaaa tcagtcaaga tatccacatg
6421 tgtttttagt aaacaaattt tgggacctaa tgcttcaact aactccagta attccttggt
6481 ggtacgaaca tccaatgaag cacacaagtt tgtttgcttt tcgtgcatga tattaaatag
6541 cttggcagca acaggactag gatgagtagc agcacgttcc ttatatgtag ctttcgacat
6601 gatttatctt cgtttcctgc aggtttttgt tctgtgcagt tgggttaaga atactgggca
6661 atttcatgtt tcttcaacac tacatatgcg tatatatacc aatctaagtc tgtgctcctt
6721 ccttcgttct tccttctgtt cggagattac cgaatcaaaa aaatttcaag gaaaccgaaa
6781 tcaaaaaaaa gaataaaaaa aaaatgatga attgaaaagg tggtatggtg cactctcagt
6841 acaatctgct ctgatgccgc atagttaagc cagccccgac acccgccaac acccgctgac
6901 gcgccctgac gggcttgtct gctcccggca tccgcttaca gacaagctgt gaccgtctcc
6961 gggagctgca tgtgtcagag gttttcaccg tcatcaccga aacgcgcga
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pCU-MET3-GFP念珠菌绿色荧光质粒
别称: Plasmid#45337
| 启动子: | MET3 |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | URA3 |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 丝状真菌 |
|---|---|
| 载体用途： | 信号报告 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | |
| 原核抗性： | Amp |
| 筛选标记： | URA3 |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pCU-MET3-GFP是一个念珠菌绿色荧光表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7009 bp ds-DNA circular SYN 19-DEC-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7009
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 666..737
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
CDS 738..1598
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
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PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
rep_origin 1769..2357
/direction=RIGHT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
misc_feature 2817..3842
/label=MET3 promoter
CDS 3879..4595
/codon_start=1
/product="yeast-enhanced green fluorescent protein"
/label=yeGFP
/note="codons optimized for translation in S. cerevisiae
and C. albicans"
/translation="MSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTLK
FICTTGKLPVPWPTLVTTFGYGVQCFARYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDDG
NYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIKV
NFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLLE
FVTAAGITHGMDELYK"
rep_origin 5211..5666
/direction=RIGHT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
CDS complement(5797..6600)
/codon_start=1
/gene="S. cerevisiae URA3"
/product="orotidine-5'-phosphate decarboxylase, required
for uracil biosynthesis"
/label=URA3
/note="yeast auxotrophic marker, counterselectable with
5-fluoroorotic acid (5-FOA)"
/translation="MSKATYKERAATHPSPVAAKLFNIMHEKQTNLCASLDVRTTKELL
ELVEALGPKICLLKTHVDILTDFSMEGTVKPLKALSAKYNFLLFEDRKFADIGNTVKLQ
YSAGVYRIAEWADITNAHGVVGPGIVSGLKQAAEEVTKEPRGLLMLAELSCKGSLSTGE
YTKGTVDIAKSDKDFVIGFIAQRDMGGRDEGYDWLIMTPGVGLDDKGDALGQQYRTVDD
VVSTGSDIIIVGRGLFAKGRDAKVEGERYRKAGWEAYLRRCGQQN"
promoter complement(6601..6816)
/gene="S. cerevisiae URA3"
/label=URA3 promoter
ORIGIN
1 gacgaaaggg cctcgtgata cgcctatttt tataggttaa tgtcatgata ataatggttt
61 cttagcaggt tagactaaca tgcaaaaagt ttatattcat ttttgtagtt attcttgttt
121 tcattaggat gattacacac tgtggatgtg gattaatcga tcattgttaa tttagtgtag
181 ctactaccat ttcaaacaaa acgtaaattc ttgcagtcgt actggatctg tgaatctatt
241 agtatatatg aattaaagta gcttgtacat attattctgt tgaatcatat cgcagagcat
301 tggttgaaat ccaaaatata aaaatgtaat atcacaaaaa ataatactaa ttctaacatt
361 aatgggtcag atttttagtg aatacttaaa tttataatat cgtctattta agctagcaaa
421 tggaacaaca tttaaagtaa gaacatcata tctacatgaa aatgtatatt tcaatctgac
481 taataacgca gagcacatct ttcagtgatg tctgtcacat gatcaaaaag aattgtattt
541 aaataattca taataaaagc ttaaaaaatt acaataatga aaataaagta aataatgaca
601 tgggtaagag ttccgaaata gaatcttagt gtacaaaaca aaaattgcat cattagagat
661 ccccacattc aaatatgtat ccgctcatga gacaataacc ctgataaatg cttcaataat
721 attgaaaaag gaagagtatg agtattcaac atttccgtgt cgcccttatt cccttttttg
781 cggcattttg ccttcctgtt tttgctcacc cagaaacgct ggtgaaagta aaagatgctg
841 aagatcagtt gggtgcacga gtgggttaca tcgaactgga tctcaacagc ggtaagatcc
901 ttgagagttt tcgccccgaa gaacgttttc caatgatgag cacttttaaa gttctgctat
961 gtggcgcggt attatcccgt attgacgccg ggcaagagca actcggtcgc cgcatacact
1021 attctcagaa tgacttggtt gagtactcac cagtcacaga aaagcatctt acggatggca
1081 tgacagtaag agaattatgc agtgctgcca taaccatgag tgataacact gcggccaact
1141 tacttctgac aacgatcgga ggaccgaagg agctaaccgc ttttttgcac aacatggggg
1201 atcatgtaac tcgccttgat cgttgggaac cggagctgaa tgaagccata ccaaacgacg
1261 agcgtgacac cacgatgcct gtagcaatgg caacaacgtt gcgcaaacta ttaactggcg
1321 aactacttac tctagcttcc cggcaacaat taatagactg gatggaggcg gataaagttg
1381 caggaccact tctgcgctcg gcccttccgg ctggctggtt tattgctgat aaatctggag
1441 ccggtgagcg tgggtctcgc ggtatcattg cagcactggg gccagatggt aagccctccc
1501 gtatcgtagt tatctacacg acggggagtc aggcaactat ggatgaacga aatagacaga
1561 tcgctgagat aggtgcctca ctgattaagc attggtaact gtcagaccaa gtttactcat
1621 atatacttta gattgattta aaacttcatt tttaatttaa aaggatctag gtgaagatcc
1681 tttttgataa tctcatgacc aaaatccctt aacgtgagtt ttcgttccac tgagcgtcag
1741 accccgtaga aaagatcaaa ggatcttctt gagatccttt ttttctgcgc gtaatctgct
1801 gcttgcaaac aaaaaaacca ccgctaccag cggtggtttg tttgccggat caagagctac
1861 caactctttt tccgaaggta actggcttca gcagagcgca gataccaaat actgttcttc
1921 tagtgtagcc gtagttaggc caccacttca agaactctgt agcaccgcct acatacctcg
1981 ctctgctaat cctgttacca gtggctgctg ccagtggcga taagtcgtgt cttaccgggt
2041 tggactcaag acgatagtta ccggataagg cgcagcggtc gggctgaacg gggggttcgt
2101 gcacacagcc cagcttggag cgaacgacct acaccgaact gagataccta cagcgtgagc
2161 tatgagaaag cgccacgctt cccgaaggga gaaaggcgga caggtatccg gtaagcggca
2221 gggtcggaac aggagagcgc acgagggagc ttccaggggg aaacgcctgg tatctttata
2281 gtcctgtcgg gtttcgccac ctctgacttg agcgtcgatt tttgtgatgc tcgtcagggg
2341 ggcggagcct atggaaaaac gccagcaacg cggccttttt acggttcctg gccttttgct
2401 ggccttttgc tcacatgttc tttcctgcgt tatcccctga ttctgtggat aaccgtatta
2461 ccgcctttga gtgagctgat accgctcgcc gcagccgaac gaccgagcgc agcgagtcag
2521 tgagcgagga agcggaagag cgcccaatac gcaaaccgcc tctccccgcg cgttggccga
2581 ttcattaatg cagctggcac gacaggtttc ccgactggaa agcgggcagt gagcgcaacg
2641 caattaatgt gagttagctc actcattagg caccccaggc tttacacttt atgcttccgg
2701 ctcgtatgtt gtgtggaatt gtgagcggat aacaatttca cacaggaaac agctatgacc
2761 atgattacgc caagcgcgca attaaccctc actaaaggga acaaaagctg gagctcatac
2821 cagttacaat tagtattaca atggtttacc aagtacaaat tatgtaatat ggttataatt
2881 ggcttatatg tatggaggta gggaactgca ggttattgtt ctgttaaact accagtaatg
2941 caagacggct aagtcatatg actgccactt tgtcaatcct gaagaaaatg acaatagaaa
3001 gtgatataat acacgtgata tgcgtaggat gggacccaaa gatagccaca tcacatgatc
3061 ttcaaaaacc ccgtcaaaaa ggaataaatc gaaggaaaaa aaatgccacg tgactttgat
3121 agtcaaaatc aggttatatt actatacgat cccccacaca taacctttac cacacaccgc
3181 acgggctgga cttatcctat tagaaagcgg tgcagccagg gccaagaaaa cgcgaacgac
3241 gcagaaaaaa cgtcaagcaa aaaaactgtg gtgttattta aagcatacaa tttcctgcct
3301 ccctttaatg ctacggggga tctagcaaat gggaaaatat cacatgactt tggctagaag
3361 gggtgggaaa acagatattt tagtcacatt gtttgatttc acgtactaca cgatacacta
3421 cactacacaa tacactgcaa tacactacac tgtatggttc cctccggccc tggatatgct
3481 agcgaaggat cccaagccca tcgaggaaat cattcaagag catctgcagg tctcaaatac
3541 actaagtcca aacacaaaca gcactgagct aatccaagac accaattgca tgccttctca
3601 attagaacag tttattacac agcttataac tgtgcatctt gccattcttt tcgagatagc
3661 catttgcatt tgattaacat gcttagctcg ttctcaagcc acagtaaaat ggattgcctt
3721 ttgagtttcc atcgttgtat aaataggcac tcattcctat agccttgctc tttggtcttg
3781 tctctgtaat ggtaatagct gtaagtcagg atataacact ccagaaaaga aacacctaac
3841 aatctagaac tagtggatcc cccgggctgc aggaattcat gtctaaaggt gaagaattat
3901 tcactggtgt tgtcccaatt ttggttgaat tagatggtga tgttaatggt cacaaatttt
3961 ctgtctccgg tgaaggtgaa ggtgatgcta cttacggtaa attgacctta aaatttattt
4021 gtactactgg taaattgccg gttccatggc caaccttagt cactactttc ggttatggtg
4081 ttcaatgttt tgctagatac ccagatcata tgaaacaaca tgactttttc aagtctgcca
4141 tgccagaagg ttatgttcaa gaaagaacta tttttttcaa agatgacggt aactacaaga
4201 ccagagctga agtcaagttt gaaggtgata ccttagttaa tagaatcgaa ttaaaaggta
4261 ttgattttaa agaagatggt aacattttag gtcacaaatt ggaatacaac tataactctc
4321 acaatgttta catcatggct gacaaacaaa agaatggtat caaagttaac ttcaaaatta
4381 gacacaacat tgaagatggt tctgttcaat tagctgacca ttatcaacaa aatactccaa
4441 ttggtgatgg tccagtcttg ttaccagaca accattactt atccactcaa tctgccttat
4501 ccaaagatcc aaacgaaaag agagaccaca tggtcttgtt agaatttgtt actgctgctg
4561 gtattaccca tggtatggat gaattgtaca aataactgca ggtcgacctc gagaacacaa
4621 cccacagcta ccaccatcaa caatatttat atatataacg tacacataga aatcacacaa
4681 acagagtatt tattcttaac tacatgaact accatcagac cgtctgggcc actatataat
4741 gtgccattca taaacgtgat cactttacgt agcaggcaac cccaggtgaa aatttttcag
4801 cgagctgcca gattgtcagg tgaaaaactg aaaaaaactt ctgggcgatg agcttgtggc
4861 gggaaattaa gtatataaag cagttagttt cttctgcttc ttgtggttct gggtattctt
4921 gtaatatttg gaagaataga aaatcaagac tactgccttt cttttcatat tatagaggaa
4981 gaaatacgca cgaacacgat atagaggtaa aggtacccaa ttcgccctat agtgagtcgt
5041 attacgcgcg ctcactggcc gtcgttttac aacgtcgtga ctgggaaaac cctggcgtta
5101 cccaacttaa tcgccttgca gcacatcccc ctttcgccag ctggcgtaat agcgaagagg
5161 cccgcaccga tcgcccttcc caacagttgc gcagcctgaa tggcgaatgg acgcgccctg
5221 tagcggcgca ttaagcgcgg cgggtgtggt ggttacgcgc agcgtgaccg ctacacttgc
5281 cagcgcccta gcgcccgctc ctttcgcttt cttcccttcc tttctcgcca cgttcgccgg
5341 ctttccccgt caagctctaa atcgggggct ccctttaggg ttccgattta gtgctttacg
5401 gcacctcgac cccaaaaaac ttgattaggg tgatggttca cgtagtgggc catcgccctg
5461 atagacggtt tttcgccctt tgacgttgga gtccacgttc tttaatagtg gactcttgtt
5521 ccaaactgga acaacactca accctatctc ggtctattct tttgatttat aagggatttt
5581 gccgatttcg gcctattggt taaaaaatga gctgatttaa caaaaattta acgcgaattt
5641 taacaaaata ttaacgctta caatttcctg atgcggtatt ttctccttac gcatctgtgc
5701 ggtatttcac accgcatagg gtaataactg atataattaa attgaagctc taatttgtga
5761 gtttagtata catgcattta cttataatac agttttttag ttttgctggc cgcatcttct
5821 caaatatgct tcccagcctg cttttctgta acgttcaccc tctaccttag catcccttcc
5881 ctttgcaaat agtcctcttc caacaataat aatgtcagat cctgtagaga ccacatcatc
5941 cacggttcta tactgttgac ccaatgcgtc tcccttgtca tctaaaccca caccgggtgt
6001 cataatcaac caatcgtaac cttcatctct tccacccatg tctctttgag caataaagcc
6061 gataacaaaa tctttgtcgc tcttcgcaat gtcaacagta cccttagtat attctccagt
6121 agatagggag cccttgcatg acaattctgc taacatcaaa aggcctctag gttcctttgt
6181 tacttcttct gccgcctgct tcaaaccgct aacaatacct gggcccacca caccgtgtgc
6241 attcgtaatg tctgcccatt ctgctattct gtatacaccc gcagagtact gcaatttgac
6301 tgtattacca atgtcagcaa attttctgtc ttcgaagagt aaaaaattgt acttggcgga
6361 taatgccttt agcggcttaa ctgtgccctc catggaaaaa tcagtcaaga tatccacatg
6421 tgtttttagt aaacaaattt tgggacctaa tgcttcaact aactccagta attccttggt
6481 ggtacgaaca tccaatgaag cacacaagtt tgtttgcttt tcgtgcatga tattaaatag
6541 cttggcagca acaggactag gatgagtagc agcacgttcc ttatatgtag ctttcgacat
6601 gatttatctt cgtttcctgc aggtttttgt tctgtgcagt tgggttaaga atactgggca
6661 atttcatgtt tcttcaacac tacatatgcg tatatatacc aatctaagtc tgtgctcctt
6721 ccttcgttct tccttctgtt cggagattac cgaatcaaaa aaatttcaag gaaaccgaaa
6781 tcaaaaaaaa gaataaaaaa aaaatgatga attgaaaagg tggtatggtg cactctcagt
6841 acaatctgct ctgatgccgc atagttaagc cagccccgac acccgccaac acccgctgac
6901 gcgccctgac gggcttgtct gctcccggca tccgcttaca gacaagctgt gaccgtctcc
6961 gggagctgca tgtgtcagag gttttcaccg tcatcaccga aacgcgcga
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4175/pECMV-3×FLAG-PFKM人源基因质粒 |
| P4176/pECMV-3×FLAG-PIAS3人源基因质粒 |
| P4177/pECMV-3×FLAG-MRPL4（2同义突变）人源基因质粒 |
| P4178/pECMV-3×FLAG-KLF6（1同义突变）人源基因质粒 |
| P4179/pECMV-3×FLAG-UBXN1人源基因质粒 |
| P4339/pECMV-3×FLAG-RSU1人源基因质粒 |
| P4340/pECMV-3×FLAG-PCM1人源基因质粒 |
| P4341/pECMV-3×FLAG-HSP90AB1人源基因质粒 |
| P4342/pECMV-3×FLAG-RPLP0（1同义突变）人源基因质粒 |
| P4343/pECMV-3×FLAG-SLC43A1人源基因质粒 |
| P4344/pECMV-3×FLAG-GPM6A人源基因质粒 |
| P4345/pECMV-3×FLAG-STAT5A（1同义突变）人源基因质粒 |
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