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- Xybio
- 上海
- P0429
- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pPD49-26-L754
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pPD49-26-L754线虫表达质粒
别称: pPD49-26-L754
质粒属性
质粒简介
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 3410 bp ds-DNA circular SYN 04-SEP-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pPD49.26-L754
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 3410)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Sunday, September 4, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..3410
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 1289..1393
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
CDS 1394..2254
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
rep_origin 2425..3013
/direction=RIGHT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
protein_bind 3301..3322
/bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
/note="CAP binding site"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
promoter 3337..3367
/note="lac promoter"
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind 3375..3391
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
primer_bind 3399..5
/note="M13 rev"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
ORIGIN
1 atgaccatga ttacgccaag cttgcatgcc tgcaggtcga ctctagagga tccccgggat
61 tggccaaagg acccaaaggt atgtttcgaa tgatactaac ataacataga acattttcag
121 gaggaccctt ggctagcgtc gacggtacca tggtattgat atctgagctc cgcatcggcc
181 gctgtcatca gatcgccatc tcgcgcccgt gcctctgact tctaagtcca attactcttc
241 aacatcccta catgctcttt ctccctgtgc tcccaccccc tatttttgtt attatcaaaa
301 aacttctctt aatttctttg ttttttagct tcttttaagt cacctctaac aatgaaattg
361 tgtagattca aaaatagaat taattcgtaa taaaaagtcg aaaaaaattg tgctccctcc
421 ccccattaat aataattcta tcccaaaatc tacacaatgt tctgtgtaca cttcttatgt
481 tttttacttc tgataaattt ttttgaaaca tcatagaaaa aaccgcacac aaaatacctt
541 atcatatgtt acgtttcagt ttatgaccgc aatttttatt tcttcgcacg tctgggcctc
601 tcatgacgtc aaatcatgct catcgtgaaa aagttttgga gtatttttgg aatttttcaa
661 tcaagtgaaa gtttatgaaa ttaattttcc tgcttttgct ttttggggtt tcccctattg
721 tttgtcaaga tttcgaggac ggcgtttttc ttgctaaaat cacaagtatt gatgagcacg
781 atgcaagaaa gatcggaaga aggtttgggt ttgaggctca gtggaaggtg agtagaagtt
841 gataatttga aagtggagta gtgtctatgg ggtttttgcc ttaaatgaca gaatacattc
901 ccaatatacc aaacataact gtttcctact agtcggccgt acgggccctt tcgtctcgcg
961 cgtttcggtg atgacggtga aaacctctga cacatgcagc tcccggagac ggtcacagct
1021 tgtctgtaag cggatgccgg gagcagacaa gcccgtcagg gcgcgtcagc gggtgttggc
1081 gggtgtcggg gctggcttaa ctatgcggca tcagagcaga ttgtactgag agtgcaccat
1141 atgcggtgtg aaataccgca cagatgcgta aggagaaaat accgcatcag gcggccttaa
1201 gggcctcgtg atacgcctat ttttataggt taatgtcatg ataataatgg tttcttagac
1261 gtcaggtggc acttttcggg gaaatgtgcg cggaacccct atttgtttat ttttctaaat
1321 acattcaaat atgtatccgc tcatgagaca ataaccctga taaatgcttc aataatattg
1381 aaaaaggaag agtatgagta ttcaacattt ccgtgtcgcc cttattccct tttttgcggc
1441 attttgcctt cctgtttttg ctcacccaga aacgctggtg aaagtaaaag atgctgaaga
1501 tcagttgggt gcacgagtgg gttacatcga actggatctc aacagcggta agatccttga
1561 gagttttcgc cccgaagaac gttttccaat gatgagcact tttaaagttc tgctatgtgg
1621 cgcggtatta tcccgtattg acgccgggca agagcaactc ggtcgccgca tacactattc
1681 tcagaatgac ttggttgagt actcaccagt cacagaaaag catcttacgg atggcatgac
1741 agtaagagaa ttatgcagtg ctgccataac catgagtgat aacactgcgg ccaacttact
1801 tctgacaacg atcggaggac cgaaggagct aaccgctttt ttgcacaaca tgggggatca
1861 tgtaactcgc cttgatcgtt gggaaccgga gctgaatgaa gccataccaa acgacgagcg
1921 tgacaccacg atgcctgtag caatggcaac aacgttgcgc aaactattaa ctggcgaact
1981 acttactcta gcttcccggc aacaattaat agactggatg gaggcggata aagttgcagg
2041 accacttctg cgctcggccc ttccggctgg ctggtttatt gctgataaat ctggagccgg
2101 tgagcgtggg tctcgcggta tcattgcagc actggggcca gatggtaagc cctcccgtat
2161 cgtagttatc tacacgacgg ggagtcaggc aactatggat gaacgaaata gacagatcgc
2221 tgagataggt gcctcactga ttaagcattg gtaactgtca gaccaagttt actcatatat
2281 actttagatt gatttaaaac ttcattttta atttaaaagg atctaggtga agatcctttt
2341 tgataatctc atgaccaaaa tcccttaacg tgagttttcg ttccactgag cgtcagaccc
2401 cgtagaaaag atcaaaggat cttcttgaga tccttttttt ctgcgcgtaa tctgctgctt
2461 gcaaacaaaa aaaccaccgc taccagcggt ggtttgtttg ccggatcaag agctaccaac
2521 tctttttccg aaggtaactg gcttcagcag agcgcagata ccaaatactg tccttctagt
2581 gtagccgtag ttaggccacc acttcaagaa ctctgtagca ccgcctacat acctcgctct
2641 gctaatcctg ttaccagtgg ctgctgccag tggcgataag tcgtgtctta ccgggttgga
2701 ctcaagacga tagttaccgg ataaggcgca gcggtcgggc tgaacggggg gttcgtgcac
2761 acagcccagc ttggagcgaa cgacctacac cgaactgaga tacctacagc gtgagcattg
2821 agaaagcgcc acgcttcccg aagggagaaa ggcggacagg tatccggtaa gcggcagggt
2881 cggaacagga gagcgcacga gggagcttcc agggggaaac gcctggtatc tttatagtcc
2941 tgtcgggttt cgccacctct gacttgagcg tcgatttttg tgatgctcgt caggggggcg
3001 gagcctatgg aaaaacgcca gcaacgcggc ctttttacgg ttcctggcct tttgctggcc
3061 ttttgctcac atgttctttc ctgcgttatc ccctgattct gtggataacc gtattaccgc
3121 ctttgagtga gctgataccg ctcgccgcag ccgaacgacc gagcgcagcg agtcagtgag
3181 cgaggaagcg gaagagcgcc caatacgcaa accgcctctc cccgcgcgtt ggccgattca
3241 ttaatgcagc tggcacgaca ggtttcccga ctggaaagcg ggcagtgagc gcaacgcaat
3301 taatgtgagt tagctcactc attaggcacc ccaggcttta cactttatgc ttccggctcg
3361 tatgttgtgt ggaattgtga gcggataaca atttcacaca ggaaacagct
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pPD49-26-L754线虫表达质粒
别称: pPD49-26-L754
| 启动子: | Lac/lac |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 质粒大小: | 3410bp |
| 质粒标签: | IVSA, rf2128 |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 线虫 |
| 培养条件: | 参考相关文献 |
| 诱导方式: | 参考相关文献 |
| 5'测序引物: | M13R:CAGGAAACAGCTATGACC |
| 3'测序引物: | 根据全序列设计 |
质粒属性
| 载体宿主： | 昆虫细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | |
| 原核抗性： | Amp |
| 筛选标记： | |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 3410 bp ds-DNA circular SYN 04-SEP-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pPD49.26-L754
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 3410)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Sunday, September 4, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..3410
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 1289..1393
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
CDS 1394..2254
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
rep_origin 2425..3013
/direction=RIGHT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
protein_bind 3301..3322
/bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
/note="CAP binding site"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
promoter 3337..3367
/note="lac promoter"
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind 3375..3391
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
primer_bind 3399..5
/note="M13 rev"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
ORIGIN
1 atgaccatga ttacgccaag cttgcatgcc tgcaggtcga ctctagagga tccccgggat
61 tggccaaagg acccaaaggt atgtttcgaa tgatactaac ataacataga acattttcag
121 gaggaccctt ggctagcgtc gacggtacca tggtattgat atctgagctc cgcatcggcc
181 gctgtcatca gatcgccatc tcgcgcccgt gcctctgact tctaagtcca attactcttc
241 aacatcccta catgctcttt ctccctgtgc tcccaccccc tatttttgtt attatcaaaa
301 aacttctctt aatttctttg ttttttagct tcttttaagt cacctctaac aatgaaattg
361 tgtagattca aaaatagaat taattcgtaa taaaaagtcg aaaaaaattg tgctccctcc
421 ccccattaat aataattcta tcccaaaatc tacacaatgt tctgtgtaca cttcttatgt
481 tttttacttc tgataaattt ttttgaaaca tcatagaaaa aaccgcacac aaaatacctt
541 atcatatgtt acgtttcagt ttatgaccgc aatttttatt tcttcgcacg tctgggcctc
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841 gataatttga aagtggagta gtgtctatgg ggtttttgcc ttaaatgaca gaatacattc
901 ccaatatacc aaacataact gtttcctact agtcggccgt acgggccctt tcgtctcgcg
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1321 acattcaaat atgtatccgc tcatgagaca ataaccctga taaatgcttc aataatattg
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1501 tcagttgggt gcacgagtgg gttacatcga actggatctc aacagcggta agatccttga
1561 gagttttcgc cccgaagaac gttttccaat gatgagcact tttaaagttc tgctatgtgg
1621 cgcggtatta tcccgtattg acgccgggca agagcaactc ggtcgccgca tacactattc
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1741 agtaagagaa ttatgcagtg ctgccataac catgagtgat aacactgcgg ccaacttact
1801 tctgacaacg atcggaggac cgaaggagct aaccgctttt ttgcacaaca tgggggatca
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2041 accacttctg cgctcggccc ttccggctgg ctggtttatt gctgataaat ctggagccgg
2101 tgagcgtggg tctcgcggta tcattgcagc actggggcca gatggtaagc cctcccgtat
2161 cgtagttatc tacacgacgg ggagtcaggc aactatggat gaacgaaata gacagatcgc
2221 tgagataggt gcctcactga ttaagcattg gtaactgtca gaccaagttt actcatatat
2281 actttagatt gatttaaaac ttcattttta atttaaaagg atctaggtga agatcctttt
2341 tgataatctc atgaccaaaa tcccttaacg tgagttttcg ttccactgag cgtcagaccc
2401 cgtagaaaag atcaaaggat cttcttgaga tccttttttt ctgcgcgtaa tctgctgctt
2461 gcaaacaaaa aaaccaccgc taccagcggt ggtttgtttg ccggatcaag agctaccaac
2521 tctttttccg aaggtaactg gcttcagcag agcgcagata ccaaatactg tccttctagt
2581 gtagccgtag ttaggccacc acttcaagaa ctctgtagca ccgcctacat acctcgctct
2641 gctaatcctg ttaccagtgg ctgctgccag tggcgataag tcgtgtctta ccgggttgga
2701 ctcaagacga tagttaccgg ataaggcgca gcggtcgggc tgaacggggg gttcgtgcac
2761 acagcccagc ttggagcgaa cgacctacac cgaactgaga tacctacagc gtgagcattg
2821 agaaagcgcc acgcttcccg aagggagaaa ggcggacagg tatccggtaa gcggcagggt
2881 cggaacagga gagcgcacga gggagcttcc agggggaaac gcctggtatc tttatagtcc
2941 tgtcgggttt cgccacctct gacttgagcg tcgatttttg tgatgctcgt caggggggcg
3001 gagcctatgg aaaaacgcca gcaacgcggc ctttttacgg ttcctggcct tttgctggcc
3061 ttttgctcac atgttctttc ctgcgttatc ccctgattct gtggataacc gtattaccgc
3121 ctttgagtga gctgataccg ctcgccgcag ccgaacgacc gagcgcagcg agtcagtgag
3181 cgaggaagcg gaagagcgcc caatacgcaa accgcctctc cccgcgcgtt ggccgattca
3241 ttaatgcagc tggcacgaca ggtttcccga ctggaaagcg ggcagtgagc gcaacgcaat
3301 taatgtgagt tagctcactc attaggcacc ccaggcttta cactttatgc ttccggctcg
3361 tatgttgtgt ggaattgtga gcggataaca atttcacaca ggaaacagct
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3981/pCMV-SPORT6-FLCN人源基因质粒 |
| P3982/pCMV-SPORT6-CTTNBP2NL人源基因质粒 |
| P3983/pCMV-SPORT6-MUT（2点突变1同义突变）人源基因质粒 |
| P3984/pCMV-SPORT6-UBC（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3985/pCMV-SPORT6-NCKAP1人源基因质粒 |
| P3986/pCMV-SPORT6-OIP5人源基因质粒 |
| P3987/pCMV-SPORT6-HYLS1（1点突变）人源基因质粒 |
| P3988/pCMV-SPORT6-TBPL1人源基因质粒 |
| P3989/pCMV-SPORT6-RPL3人源基因质粒 |
| P3990/pCMV-SPORT6-UBE2Z（1同义突变）人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
.Microcolumn,1998,10(2):167～173［49］Wu Y,Huang S.Anal.Chem.,1999,71(2):310～316［50］Rivasseau C,Caude M.Chromatographia,1995,41:462～470［51］Jinno K,Maramats T,Saito Y,Kiso Y,Magdic S,Pawliszyn J.J.Chromatogr.,1996,754:137～144［52］Gora-Maslak G,Mani V.Supelco Rep
(顺-2-戊烯) 36.94 S,R3,R4,R5 24 8.275 2-Methyl-2-butene(2-甲基-2-丁烯) 39.57 R3,R4,R5 25 8.415 trons-1,3-Pentasiene(反-1,3-戊二烯) 42.03 S,R3,R4,R5 26 8.680 1-Pentene-3-yne(1-戊烯-3-炔) 49.5 27 8.786 3-Methyl-1,2-butasiene(3-甲基-1,2-丁二烯) 40.5 R5 28 8.920
关于论坛中所有Native PAGE/非变性电泳及蛋白回收的经典总结
/L H2SO4终止反应, 并用酶标仪在450 nm测定吸光度值。 实验中直接取蛋白质的LiBr溶液进行ELISA分析。2 结果(Results)2.1 融合蛋白质表达质粒的构本组保存的质粒pAB600中装有仿蜘蛛牵丝基因片段600 bp, 由BglII/SacI双酶切切出, 装入pGEX-KG BamHI/SacI中, 构建成仿蜘蛛牵丝基因s600与GST的融合蛋白质表达质粒pKG-s600 。 测序证明质粒装配无误。 仿蜘蛛牵丝基因表达产物氨基酸序列。Fig.1 Map
pPD49-26-L754线虫表达质粒
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