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- 上海
- P1336
- 2026年05月27日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
Plasmid#78898;pAct-dCas9-VPR
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pAct:dCas9-VPR昆虫编辑质粒
别称: Plasmid#78898;pAct-dCas9-VPR
| 启动子: | Ac5 |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | Stbl3 |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 昆虫细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 干扰沉默 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | CRISPR,Cas9 |
| 原核抗性： | Amp |
| 筛选标记： | |
| 荧光蛋白： | 绿色 |
质粒简介
pAct:dCas9-VPR质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3939/pCMV-SPORT6-CHRAC1人源基因质粒 |
| P3940/pCMV-SPORT6-MOCS3（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3941/pCMV-SPORT6-USP18人源基因质粒 |
| P3942/pCMV-SPORT6-RGMA（1同义突变）人源基因质粒 |
| P4884/pCMV-SPORT6-RAB24人源基因质粒 |
| P4885/pCMV-SPORT6-MXI1（1同义突变）人源基因质粒 |
| P4886/pCMV-SPORT6-ACAP1人源基因质粒 |
| P4887/pCMV-SPORT6-GEMIN4（3点突变）人源基因质粒 |
| P4888/pCMV-SPORT6-SFRS14人源基因质粒 |
| P4889/pCMV-SPORT6-SLC26A6人源基因质粒 |
| P4890/pCMV-SPORT6-FKBP10人源基因质粒 |
| P4891/pCMV-SPORT6-NCAPG2人源基因质粒 |
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文献和实验生物界一系列惊人的发现改变了这个学科，也让生物学家们以前所未有的方式对细胞上下其手。当然，这要感谢原核生物们进化出的这一套稀奇古怪的免疫系统。一系列的研究揭示出了细菌这一免疫系统的运作方式，并很快挖出名为 Cas9 蛋白的幕后黑手，一个受 RNA 引导的 DNA 内切酶。疯狂的科学家们很快发现了 Cas9 蛋白编辑基因组的潜在能力，并做出了一系列的探索。 两年前，一些研究表明通过 Cas9 蛋白和向导 RNA 的在真核细胞中共表达，可以实现位点特异性的 DNA 编辑，到如今上千
-of-function）是让基因表达变多或变强，常用三招：直接构建过表达载体、CRISPR-SAM 激活（CRISPRa）、saRNA 上调。功能缺失（loss-of-function）是让基因表达变少或彻底没，常用：RNAi 干扰（shRNA/siRNA）、CRISPR-Cas9 敲除、cas13d 干扰、dCas9-KRAB 转录抑制。优先级一般是 A>B>C>D，以你的实际需求为导向来选，不是越新越好。说白了，一类是"加量"，一类是"减量或撤掉"，方向完全相反。 它们分别在细胞里怎么跑 过表达是把编码序列连到
细胞膜的组件进入细胞，如 DNA 质粒和蛋白质。使用这种方法递送的组件在肝脏中明显富集。此方法在技术上很简单且不需要任何外源传递组件即可成功地将基因编辑组件引入细胞。 研究人员证使用流体动力学递送成功将编码 Cas9 和 sgRNA 的 DNA 质粒递送至肝细胞，从而在体内对遗传性酪氨酸血症小鼠肝细胞中的 Fah 突变进行了校正。尽管此方法取得了一些成功，但目前尚未临床应用，流体动力传递的过程是具有较大创伤性的，可能导致潜在的生理并发症，包括心脏功能障碍、血压升高和肝脏扩张，极易造成意外死亡，而且转染
