DAB显色试剂盒（20×）,N

免疫组化染色方法及常用抗原修复方法

。6）滴加正常山羊血清封闭液，室温20分钟。甩去多余液体。7）滴加 Ⅰ 抗,室温1小时或者4℃过夜或者37℃1小时（4℃过夜后在37℃复温45分钟）。8）PBS洗三次每次2分钟。9）滴加生物素化二抗,20℃～37℃ 20 分钟。10）PBC 洗 3 次每次 2 分钟。11）滴加试剂SABC，20℃～37℃ 20 分钟。12）PBS 洗 4 次每次 5 分钟。13）DAB 显色：DAB 显色试剂盒或者自配显色剂显色（镜下掌握显色程度）。14）蒸馏水洗。苏木素复染 2 分钟、盐酸酒精分化。15）脱水、透明

Western 实验步骤

梯度（两个孔）取其平均值减去空白后制作标准曲线得到曲线公式。测得的样品的 OD 值（三个孔）取其平均值按标准曲线的公式运算得到蛋白浓度，按 50 μg/上样孔的标准来计算上样量，算法为：上样量= 50/蛋白浓度。注：所有得到的 OD 值必须减去背景（标曲中空白孔的 OD 值）后再计算。 样品处理： 蛋白样品：5×SDS 上样缓冲液按照 4：1 比例混合沸水浴 10 min 左右。浓度过高的样品可用 PBS 稀释后再煮样。样品煮好后 -20 ℃ 保存待用（可保存半年），样品长期保存须置于 -70

HRP 底物分类

，并孵育1~20 min 水洗终止反应； (6) 优化：如果需要可复染； (7) 用 DPX 封片。 氯萘酚 氯萘酚可以形成一种蓝黑色产物。敏感性低于 DAB，且产物可溶于醇中。它适用于当 DAB 反应形成较高背景或要求改变产物的颜色。 1. 需要的溶液和特殊设备 0.03％ 氯萘酚，用无水乙醇溶解(贮存在-20℃)，0.05 mol/L Tris(pH7.6)，过氧化氢，Gelvatol 或者 Mowiol，光学显微镜(通常带有照相机以便于记录结果)。 2. 操作步骤 (1) 氯