1,2-二甲基-1,4,5,6-四氢嘧啶,4271-96-9

最全面的MTT大汇总

免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。7.同时设置调零孔（培养基、MTT、二甲基亚砜），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜）悬浮细胞：1）收集对数期细胞，调节细胞悬液浓度1×106/ml，按次序将①补足的1640（无血清）培养基40ul ；②加Actinomycin D（有毒性）10ul用培养液稀释 lg/ml，需预试寻找最佳稀释度，1:10-1:20)；③需检测物10ul；④细胞悬液50ul（即5×104cell/孔），共100ul加入到96孔板（边缘孔用无菌水填充

MTT 的操作方法（三）

的培养液。6. 终止培养，准备溶解结晶。溶解结晶的方法有两种，第一种，用 DMSO 溶解1)MTT 加入培养 4 h 后，结晶可充分形成。将上清去掉，该过程要注意不能把 Formazan 结晶移走。有人直接用移液器将上清移走，也有人建议先铺几张滤纸在桌面，然后将 96 孔板轻轻倒置，这样上清便被滤纸吸走，以减少结果的损失。个人认为，这两种方法都有可能导致结晶的损失，从而引起结果的不准确。采用哪种方法，可以自己摸索一下再决定。2) 每孔加入 150ul 二甲基亚砜，置摇床上低速振荡 10 min

MTT（四唑盐比色实验）大汇总

一、实验前应明确的问题 1. 选择适当的细胞接种浓度。 一般情况下，96孔培养板的一内贴壁细胞长满时约有105个细胞。但由于不同细胞贴壁后面积差异很大，因此，在进行MTT试验前，要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间，以保证培养终止致细胞过满。这样，才能保证MTT结晶形成酌量与细胞数呈的线性关系。否则细胞数太多敏感性降低，太少观察不到差异。 2. 药物浓度的设定。 一定要多看文献，参考别人的结果再定