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- 上海
- P3143
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pMK4
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pMK4枯草杆菌质粒
别称: pMK4
质粒属性
质粒简介
pMK4是一个枯草杆菌质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5585 bp ds-DNA circular SYN 21-SEP-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS pMK4
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 5585)
AUTHORS Triple Threat
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5585
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
CDS 216..518
/codon_start=1
/gene="lacZ fragment"
/product="LacZ-alpha fragment of beta-galactosidase"
/note="lacZ-alpha"
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promoter 759..863
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
CDS 864..1724
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
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ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
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LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
CDS 3965..4615
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/note="Chl"
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/direction=RIGHT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 gcgcccaata cgcaaaccgc ctctccccgc gcgttggccg attcattaat gcagctggca
61 cgacaggttt cccgactgga aagcgggcag tgagcgcaac gcaattaatg tgagttagct
121 cactcattag gcaccccagg ctttacactt tatgcttccg gctcgtatgt tgtgtggaat
181 tgtgagcgga taacaatttc acacaggaaa cagctatgac catgattacg ccaagcttgg
241 ctgcaggtcg acggatcccc gggaattcac tggccgtcgt tttacaacgt cgtgactggg
301 aaaaccctgg cgttacccaa cttaatcgcc ttgcagcaca tccccctttc gccagctggc
361 gtaatagcga agaggcccgc accgatcgcc cttcccaaca gttgcgcagc ctgaatggcg
421 aatggcgcct gatgcggtat tttctcctta cgcatctgtg cggtatttca caccgcatat
481 ggtgcactct cagtacaatc tgctctgatg ccgcatagtt aagccagccc cgacacccgc
541 caacacccgc tgacgcgccc tgacgggctt gtctgctccc ggcatccgct tacagacaag
601 ctgtgaccgt ctccgggagc tgcatgtgtc agaggttttc accgtcatca ccgaaacgcg
661 cgagacgaaa gggcctcgtg atacgcctat ttttataggt taatgtcatg ataataatgg
721 tttcttagac gtcaggtggc acttttcggg gaaatgtgcg cggaacccct atttgtttat
781 ttttctaaat acattcaaat atgtatccgc tcatgagaca ataaccctga taaatgcttc
841 aataatattg aaaaaggaag agtatgagta ttcaacattt ccgtgtcgcc cttattccct
901 tttttgcggc attttgcctt cctgtttttg ctcacccaga aacgctggtg aaagtaaaag
961 atgctgaaga tcagttgggt gcacgagtgg gttacatcga actggatctc aacagcggta
1021 agatccttga gagttttcgc cccgaagaac gttttccaat gatgagcact tttaaagttc
1081 tgctatgtgg cgcggtatta tcccgtattg acgccgggca agagcaactc ggtcgccgca
1141 tacactattc tcagaatgac ttggttgagt actcaccagt cacagaaaag catcttacgg
1201 atggcatgac agtaagagaa ttatgcagtg ctgccataac catgagtgat aacactgcgg
1261 ccaacttact tctgacaacg atcggaggac cgaaggagct aaccgctttt ttgcacaaca
1321 tgggggatca tgtaactcgc cttgatcgtt gggaaccgga gctgaatgaa gccataccaa
1381 acgacgagcg tgacaccacg atgcctgtag caatggcaac aacgttgcgc aaactattaa
1441 ctggcgaact acttactcta gcttcccggc aacaattaat agactggatg gaggcggata
1501 aagttgcagg accacttctg cgctcggccc ttccggctgg ctggtttatt gctgataaat
1561 ctggagccgg tgagcgtggg tctcgcggta tcattgcagc actggggcca gatggtaagc
1621 cctcccgtat cgtagttatc tacacgacgg ggagtcaggc aactatggat gaacgaaata
1681 gacagatcgc tgagataggt gcctcactga ttaagcattg gtaactgtca gaccaagttt
1741 actcatatat actttagatt gatttaaaac ttcattttta atttaaaagg atctaggtga
1801 agatccatat ccttcttttt ctgaaccgac ttctcctttt tcgcttcttt attccaattg
1861 ctttattgac gttgagcctc ggaaccctta acaatcccaa aacttgtcga atggtcggct
1921 taatagctca cgctatgccg acattcgtct gcaagtttag ttaagggttc ttctcaacgc
1981 acaataaatt ttctcggcat aaatgcgtgg tctaattttt atttttaata accttgatag
2041 caaaaaatgc cattccaata caaaaccaca tacctataat cgataaccac ataacagtca
2101 taaaaccact cctttttaac aaactttatc acaagaaata tttaaatttt aaatgccttt
2161 attttgaatt ttaaggggca ttttaaagat ttaggggtaa atcatatagt tttatgccta
2221 aaaacctaca gaagctttta aaaagcaaat atgagccaaa taaatatatt ctaattctac
2281 aaacaaaaat ttgagcaaat tcagtgtcga ttttttaaga cactgcccag ttacatgcaa
2341 attaaaattt tcatgatttt ttatagttcc taacagggtt aaaatttgta taacgaaagt
2401 ataatgttta tataacgtta gtataataaa gcattttaac attatacttt tgataatcgt
2461 ttatcgtcgt catcacaata acttttaaaa tactcgtgca taattcaaca gctgacctcc
2521 caataactac atggtgttat cgggaggtca gctgttagca cttatatttt gttattgttc
2581 ttcctcgatt tcgtctatca ttttgtgatt aatttctctt ttttcttgtt ctgttaagtc
2641 ataaagttca ctagctaaat actctttttg tttccaaata taaaaaattt gatagatata
2701 ttcggttgga tcaatttctt ttaagtaatc taaatcccca ttttttaatt tctttttagc
2761 ctctttaaat aatcctgaat aaactaatac ctgtttacct ttaagtgatt tataaaatgc
2821 atcaaagact ttttgattta ttaaataatc actatcttta ccagaatact tagccatttc
2881 atataattct ttattattat tttgtcttat tttttgaact tgaacttgtg ttatttctga
2941 aatgcccgtt acatcacgcc ataaatctaa ccattcttgt tggctaatat aatatctttt
3001 atctgtgaaa tacgatttat ttactgcaat taacacatga aaatgaggat tataatcatc
3061 tcttttttta ttatatgtaa tctctaactt acgaacatat ccctttataa cactacctac
3121 tttttttctc tttataagtt ttctaaaaga attattataa cgttttattt cattttctaa
3181 ttcatcactc attacattag gtgtagtcaa agttaaaaag ataaactcct ttttctcttg
3241 ctgcttaata tattgcatca tcaaagataa acccaatgca tcttttctag cttttctcca
3301 agcacagaca ggacaaaatc gatttttaca agaattagct ttatataatt tctgtttttc
3361 taaagtttta tcagctacaa aagacagaaa tgtattgcaa tcttcaacta aatccatttg
3421 attctctcca atatgacgtt taataaattt ctgaaatact tgatttcttt gttttttctc
3481 agtatacttt tccatgttat aacacataaa aacaacttag ttttcacaaa ctatgacaat
3541 aaaaaaagtt gctttttccc ctttctatgt atgtttttta ctagtcattt aaaacgatac
3601 attaataggt acgaaaaagc aacttttttt gcgcttaaaa ccagtcatac caataactta
3661 agggtaacta gcctcgccgg caatagttac ccttattatc aagataagaa agaaaaggat
3721 ttttcgctac gctcaaatcc tttaaaaaaa cacaaaagac cacatttttt aatgtggtct
3781 tttattcttc aactaaagca cccattagtt caacaaacga aaattggata aagtgggata
3841 tttttaaaat atatatttat gttacagtaa tattgacttt taaaaaagga ttgattctaa
3901 tgaagaaagc agacaagtaa gcctcctaaa ttcactttag ataaaaattt aggaggcata
3961 tcaaatgaac tttaataaaa ttgatttaga caattggaag agaaaagaga tatttaatca
4021 ttatttgaac caacaaacga cttttagtat aaccacagaa attgatatta gtgttttata
4081 ccgaaacata aaacaagaag gatataaatt ttaccctgca tttattttct tagtgacaag
4141 ggtgataaac tcaaatacag cttttagaac tggttacaat agcgacggag agttaggtta
4201 ttgggataag ttagagccac tttatacaat ttttgatggt gtatctaaaa cattctctgg
4261 tatttggact cctgtaaaga atgacttcaa agagttttat gatttatacc tttctgatgt
4321 agagaaatat aatggttcgg ggaaattgtt tcccaaaaca cctatacctg aaaatgcttt
4381 ttctctttct attattccat ggacttcatt tactgggttt aacttaaata tcaataataa
4441 tagtaattac cttctaccca ttattacagc aggaaaattc attaataaag gtaattcaat
4501 atatttaccg ctatctttac aggtacatca ttctgtttgt gatggttatc atgcaggatt
4561 gtttatgaac tctattcagg aattgtcaga taggcctaat gactggcttt tataatatga
4621 gataatgccg actgtacttt ttacagtcgg ttttctaatg tcactaacct gccccgttag
4681 ttgaagaagg tttttatatt acagctccag atctaggtga agatcctttt tgataatctc
4741 atgaccaaaa tcccttaacg tgagttttcg ttccactgag cgtcagaccc cgtagaaaag
4801 atcaaaggat cttcttgaga tccttttttt ctgcgcgtaa tctgctgctt gcaaacaaaa
4861 aaaccaccgc taccagcggt ggtttgtttg ccggatcaag agctaccaac tctttttccg
4921 aaggtaactg gcttcagcag agcgcagata ccaaatactg ttcttctagt gtagccgtag
4981 ttaggccacc acttcaagaa ctctgtagca ccgcctacat acctcgctct gctaatcctg
5041 ttaccagtgg ctgctgccag tggcgataag tcgtgtctta ccgggttgga ctcaagacga
5101 tagttaccgg ataaggcgca gcggtcgggc tgaacggggg gttcgtgcac acagcccagc
5161 ttggagcgaa cgacctacac cgaactgaga tacctacagc gtgagctatg agaaagcgcc
5221 acgcttcccg aagggagaaa ggcggacagg tatccggtaa gcggcagggt cggaacagga
5281 gagcgcacga gggagcttcc agggggaaac gcctggtatc tttatagtcc tgtcgggttt
5341 cgccacctct gacttgagcg tcgatttttg tgatgctcgt caggggggcg gagcctatgg
5401 aaaaacgcca gcaacgcggc ctttttacgg ttcctggcct tttgctggcc ttttgctcac
5461 atgttctttc ctgcgttatc ccctgattct gtggataacc gtattaccgc ctttgagtga
5521 gctgataccg ctcgccgcag ccgaacgacc gagcgcagcg agtcagtgag cgaggaagcg
5581 gaaga
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pMK4枯草杆菌质粒
别称: pMK4
| 原核抗性: | Amp |
|---|---|
| 筛选标记: | Chl |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 枯草杆菌 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 筛选标记： | |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pMK4是一个枯草杆菌质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5585 bp ds-DNA circular SYN 21-SEP-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS pMK4
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 5585)
AUTHORS Triple Threat
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5585
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CDS 216..518
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promoter 759..863
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ORIGIN
1 gcgcccaata cgcaaaccgc ctctccccgc gcgttggccg attcattaat gcagctggca
61 cgacaggttt cccgactgga aagcgggcag tgagcgcaac gcaattaatg tgagttagct
121 cactcattag gcaccccagg ctttacactt tatgcttccg gctcgtatgt tgtgtggaat
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4321 agagaaatat aatggttcgg ggaaattgtt tcccaaaaca cctatacctg aaaatgcttt
4381 ttctctttct attattccat ggacttcatt tactgggttt aacttaaata tcaataataa
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4642/pCMV-SPORT6-TBL2（1-1309bp）人源基因质粒 |
| P4643/pCMV-SPORT6-P-CP4人源基因质粒 |
| P4644/pCMV-SPORT6-ANKRD9人源基因质粒 |
| P4645/pCMV-SPORT6-AK3人源基因质粒 |
| P4646/pCMV-SPORT6-GABPB1人源基因质粒 |
| P4647/pCMV-SPORT6-LASP1（2同义突变）人源基因质粒 |
| P4648/pCMV-SPORT6-CDC23（11-1794bp）人源基因质粒 |
| P4649/pCMV-SPORT6-SHPK人源基因质粒 |
| P4650/pCMV-SPORT6-NUFIP1人源基因质粒 |
| P4651/pCMV-SPORT6-SLC2A6人源基因质粒 |
| P4652/pCMV-SPORT6-ANKRA2人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
又称枯草芽孢杆菌。一种分布普遍的腐生细菌，容易从土壤微生物中分离得到。细胞杆状，大小为0.7～ 0.8× 2～ 3微米。革兰氏阳性反应。细胞周身具多条鞭毛。能产生芽孢，椭圆形到柱状，位于菌体中央或一端。细胞分裂后产生的细胞可以连成丝状。菌落粗糙，不透明，无闪光，扩张，污白色或微黄色。枯草杆菌可用做制取淀粉酶和蛋白酶，如枯草杆菌 Bf7658是生产淀粉酶的主要菌种；枯草杆菌 AS1.398是生产中性蛋白酶的主要菌种。淀粉酶在纺织、食品和发酵工业上应用广泛，蛋白酶在鞣革、轻工和医药工业上有
真细菌目（Eubacteriales）芽孢杆菌属的代表种之一。为革兰氏阳性、好氧性细菌，可形成内生孢子。从很早就被发现了它的转化现象，它广泛存在于自然界，并能在简单的培养基上生长，因此，被广泛应用于分子遗传学等方面的研究。
枯草杆菌 枯草芽孢杆菌，是芽孢杆菌属的一种。单个细胞 0.7～0.8×2～3微米，着色均匀。无荚膜，周生鞭毛，能运动。革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。需氧菌。可利用蛋白质、多种糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚。医学|教育网搜集整理在遗传学研究中应用广泛，对此菌的嘌呤核苷酸的合成途径与其调节机制研究较清楚。广泛分布在土壤及腐败的有机
pMK4枯草杆菌质粒
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