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- Xybio
- 上海
- P0824
- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pYX212
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pYX212酿酒酵母质粒
别称: pYX212
质粒属性
质粒简介
pYX212质粒可以在酿酒酵母中表达，TPI启动子驱动目的基因的表达，C端有HA标签，通过WB实验可以很方便的检测基因是否表达。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 8346 bp ds-DNA circular SYN 05-JUN-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pYX212
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 8346)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..8346
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
misc_feature 1..48
/note="MCS"
CDS 49..75
/codon_start=1
/product="HA (human influenza hemagglutinin) epitope tag"
/note="HA"
/translation="YPYDVPDYA"
rep_origin 394..849
/direction=RIGHT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
CDS complement(980..1783)
/codon_start=1
/gene="S. cerevisiae URA3"
/product="orotidine-5'-phosphate decarboxylase, required
for uracil biosynthesis"
/note="URA3"
/note="yeast auxotrophic marker, counterselectable with
5-fluoroorotic acid (5-FOA)"
/translation="MSKATYKERAATHPSPVAAKLFNIMHEKQTNLCASLDVRTTKELL
ELVEALGPKICLLKTHVDILTDFSMEGTVKPLKALSAKYNFLLFEDRKFADIGNTVKLQ
YSAGVYRIAEWADITNAHGVLGPGIVSGLKQAAEEVTKEPRGLLMLAELSCKGSLSTGE
YTKGTVDIAKSDKDFVIGFIAQRDMGGRDEGYDWLIMTPGVGLDDKGDALGQQYRTVDD
VVSTGSDIIIVGRGLFAKGRDAKVQGERYRKAGWEAYLRRCGQQN"
promoter complement(1784..1999)
/gene="S. cerevisiae URA3"
/note="URA3 promoter"
rep_origin 2853..4195
/note="2u ori"
/note="yeast 2u plasmid origin of replication"
promoter 4484..4588
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
CDS 4589..5449
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLARRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLDNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
rep_origin 5620..6208
/direction=RIGHT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
misc_feature 7436..8345
/note="TPI promoter"
ORIGIN
1 gaattcacca tggatcctag ggcccacaag cttacgcgtc gacccgggta tccgtatgat
61 gtgcctgact acgcatgata tctcgagctc agctagctaa ctgaataagg aacaatgaac
121 gtttttcctt tctcttgttc ctagtattaa tgactgaccg atacatccct tttttttttt
181 gtctttgtct agctccagct tttgttccct ttagtgaggg ttaattcaat tcactggccg
241 tcgttttaca acgtcgtgac tgggaaaacc ctggcgttac ccaacttaat cgccttgcag
301 cacatccccc tttcgccagc tggcgtaata gcgaagaggc ccgcaccgat cgcccttccc
361 aacagttgcg cagcctgaat ggcgaatggc gcgacgcgcc ctgtagcggc gcattaagcg
421 cggcgggtgt ggtggttacg cgcagcgtga ccgctacact tgccagcgcc ctagcgcccg
481 ctcctttcgc tttcttccct tcctttctcg ccacgttcgc cggctttccc cgtcaagctc
541 taaatcgggg gctcccttta gggttccgat ttagtggttt acggcacctc gaccccaaaa
601 aacttgatta gggtgatggt tcacgtagtg ggccatcgcc ctgatagacg gtttttcgcc
661 ctttgacgtt ggagtccacg ttctttaata gtggactctt gttccaaact ggaacaacac
721 tcaaccctat ctcggtctat tcttttgatt tataagggat tttgccgatt tcggcctatt
781 ggttaaaaaa tgagctgatt taacaaaaat ttaacgcgaa ttttaacaaa atattaacgt
841 ttacaatttc ctgatgcggt attttctcct tacgcatctg tgcggtattt cacaccgcat
901 agggtaataa ctgatataat taaattgaag ctctaatttg tgagtttagt atacatgcat
961 ttacttataa tacagttttt tagttttgct ggccgcatct tctcaaatat gcttcccagc
1021 ctgcttttct gtaacgttca ccctgtacct tagcatccct tccctttgca aatagtcctc
1081 ttccaacaat aataatgtca gatcctgtag agaccacatc atccacggtt ctatactgtt
1141 gacccaatgc gtctcccttg tcatctaaac ccacaccggg tgtcataatc aaccaatcgt
1201 aaccttcatc tcttccaccc atgtctcttt gagcaataaa gccgataaca aaatctttgt
1261 cgctcttcgc aatgtcaaca gtacccttag tatattctcc agtagatagg gagcccttgc
1321 atgacaattc tgctaacatc aaaaggcctc taggttcctt tgttacttct tctgccgcct
1381 gcttcaaacc gctaacaata cctggcccca gcacaccgtg tgcattcgta atgtctgccc
1441 attctgctat tctgtataca cccgcagagt actgcaattt gactgtatta ccaatgtcag
1501 caaattttct gtcttcgaag agtaaaaaat tgtacttggc ggataatgcc tttagcggct
1561 taactgtgcc ctccatcgaa aaatcagtca atatatccac atgtgttttt agtaaacaaa
1621 ttttgggacc taatgcttca actaactcca gtaattcctt ggtggtacga acatccaatg
1681 aagcacacaa gtttgtttgc ttttcgtgca tgatattaaa tagcttggca gcaacaggac
1741 taggatgagt agcagcacgt tccttatatg tagctttcga catgatttat cttcgtttcc
1801 tgcaggtttt tgttctgtgc agttgggtta agaatactgg gcaatttcat gtttcttcaa
1861 cactacatat gcgtatatat accaatctaa gtctgtgctc cttccttcgt tcttccttct
1921 gttcggagat taccgaatca aaaaaatttc aaagaaaccg aaatcaaaaa aaagaataaa
1981 aaaaaaatga tgaattgaat tgaaaagctg tggtatggtg cactctcagt acaatctgct
2041 ctgatgccgc atagttaagc cagccccgac acccgccaac acccgctgac gcgccctgac
2101 gggcttgtct gctcccggca tccgcttaca gacaagctgt gaccgtctcc gggagctgca
2161 tgtgtcagag gttttcaccg tcatcaccga aacgcgcgag acgaaagggc ctcgtgatac
2221 gcctattttt ataggttaat gtcatgataa taatggtttc ttagacgtgc ggccgctcta
2281 gaactagtgg atcaattcca cggactatag actatactag tatactccgt ctactgtacg
2341 atacacttcc gctcaggtcc ttgtccttta acgaggcctt accactcttt tgttactcta
2401 ttgatccagc tcagcaaagg cagtgtgatc taagattcta tcttcgcgat gtagtaaaac
2461 tagctagacc gagaaagaga ctagaaatgc aaaaggcact tctacaatgg ctgccatcat
2521 tattatccga tgtgacgctg cagcttctca atgatattcg aatacgcttt gaggagatac
2581 agcctaatat ccgacaaact gttttacaga tttacgatcg tacttgttac ccatcattga
2641 attttgaaca tccgaacctg ggagttttcc ctgaaacaga tagtatattt gaacctgtat
2701 aataatatat agtctagcgc tttacggaag acaatgtatg tatttcggtt cctggagaaa
2761 ctattgcatc tattgcatag gtaatcttgc acgtcgcatc cccggttcat tttctgcgtt
2821 tccatcttgc acttcaatag catatctttg ttaacgaagc atctgtgctt cattttgtag
2881 aacaaaaatg caacgcgaga gcgctaattt ttcaaacaaa gaatctgagc tgcattttta
2941 cagaacagaa atgcaacgcg aaagcgctat tttaccaacg aagaatctgt gcttcatttt
3001 tgtaaaacaa aaatgcaacg cgagagcgct aatttttcaa acaaagaatc tgagctgcat
3061 ttttacagaa cagaaatgca acgcgagagc gctattttac caacaaagaa tctatacttc
3121 ttttttgttc tacaaaaatg catcccgaga gcgctatttt tctaacaaag catcttagat
3181 tacttttttt ctcctttgtg cgctctataa tgcagtctct tgataacttt ttgcactgta
3241 ggtccgttaa ggttagaaga aggctacttt ggtgtctatt ttctcttcca taaaaaaagc
3301 ctgactccac ttcccgcgtt tactgattac tagcgaagct gcgggtgcat tttttcaaga
3361 taaaggcatc cccgattata ttctataccg atgtggattc cgcatacttt gtgaacagaa
3421 agtgatagcg ttgatgattc ttcattggtc agaaaattat gaacggtttc ttctattttg
3481 tctctatata ctacgtatag gaaatgttta cattttcgta ttgttttcga ttcactctat
3541 gaatagttct tactacaatt tttttgtcta aagagtaata ctagagataa acataaaaaa
3601 tgtagaggtc gagtttagat gcaagttcaa ggagcgaaag gtggatgggt aggttatata
3661 gggatatagc acagagatat atagcaaaga gatacttttc agcaatgttt gtggaagcgg
3721 tattcgcaat attttagtag ctcgttacag tccggtgcgt ttttggtttt ttgaaagtgc
3781 gtcttcagag cgcttttggt tttcaaaagc gctctgaagt tcctatactt tctagagaat
3841 aggaacttcg gaataggaac ttcaaagcgt ttccgaaaac gagcgcttcc gaaaatgcaa
3901 cgcgagctgc gcacatacag ctcactgttc acgtcgcacc tatatctgcg tgttgcctgt
3961 atatatatat acatgagaag aacggcatag tgcgtgttta tgcttaaatg cgtacttata
4021 tgcgtctatt tatgtaggat gaaaggtagt ctagtacctc ctgtgatatt atcccattcc
4081 atgcggggta tcgtatgctt ccttcagcac taccctttag ctgttctata tgctgccact
4141 cctcaattgg attagtctca tccttcaatg ctatcatttc ctttgatatt ggatcatatg
4201 catagtaccg agaaactagt gcgaagtagt gatcaggtat tgctgttatc tgatgagtat
4261 acgttgtcct ggccacggca gaagcaccct tatcgctcca atttcccaca acattagtca
4321 actccgttag gcccttcatt gaaagaaatg aggtcatcaa atgtcttcca atgtgagatt
4381 ttgggccatt ttttatagca aagattgaat aaggcgcatt tttcttcaaa gctgcggccg
4441 cactctcact agtacgtcag gtggcacttt tcggggaaat gtgcgcggaa cccctatttg
4501 tttatttttc taaatacatt caaatatgta tccgctcatg agacaataac cgtgataaat
4561 gcttcaataa tattgaaaaa ggaagagtat gagtattcaa catttccgtg tcgcccttat
4621 tccctttttt gcggcatttt gccttcctgt ttttgctcac ccagaaacgc tggtgaaagt
4681 aaaagatgct gaagatcagt tgggtgcacg agtgggttac atcgaactgg atctcaacag
4741 cggtaagatc cttgagagtt ttcgccccga agaacgtttt ccaatgatga gcacttttaa
4801 agttctgcta tgtggcgcgg tattatcccg tattgacgcc gggcaagagc aactcgctcg
4861 ccgcatacac tattctcaga atgacttggt tgagtactca ccagtcacag aaaagcatct
4921 tacggatggc atgacagtaa gagaattatg cagtgctgcc ataaccatga gtgataacac
4981 tgcggccaac ttacttctga caacgatcgg aggaccgaag gagctaaccg cttttttgga
5041 caacatgggg gatcatgtaa ctcgccttga tcgttgggaa ccggagctga atgaagccat
5101 accaaacgac gagcgtgaca ccacgatgcc tgtagcaatg gcaacaacgt tgcgcaaact
5161 attaactggc gaactactta ctctagcttc ccggcaacaa ttaatagact ggatggaggc
5221 ggataaagtt gcaggaccac ttctgcgctc ggcccttccg gctggctggt ttattgctga
5281 taaatctgga gccggtgagc gtgggtctcg cggtatcatt gcagcactgg ggccagatgg
5341 taagccctcc cgtatcgtag ttatctacac gacggggagt caggcaacta tggatgaacg
5401 aaatagacag atcgctgaga taggtgcctc actgattaag cattggtaac tgtcagacca
5461 agtttactca tatatacttt agattgattt aaaacttcat ttttaattta aaaggatcta
5521 ggtgaagatc ctttttgata atctcatgac caaaatccct taacgtgagt tttcgttcca
5581 ctgagcgtca gaccccgtag aaaagatcaa aggatcttct tgagatcctt tttttctgcg
5641 cgtaatctgc tgcttgcaaa caaaaaaacc accgctacca gcggtggttt gtttgccgga
5701 tcaagagcta ccaactcttt ttccgaaggt aactggcttc agcagagcgc agataccaaa
5761 tactgtcctt ctagtgtagc cgtagttagg ccaccacttc aagaactctg tagcaccgcc
5821 tacatacctc gctctgctaa tcctgttacc agtggctgct gccagtggcg ataagtcgtg
5881 tcttaccggg ttggactcaa gacgatagtt accggataag gcgcagcggt cgggctgaac
5941 ggggggttcg tgcacacagc ccagcttgga gcgaacgacc tacaccgaac tgagatacct
6001 acagcgtgag ctatgagaaa gcgccacgct tcccgaaggg agaaaggcgg acaggtatcc
6061 ggtaagcggc agggtcggaa caggagagcg cacgagggag cttccagggg gaaacgcctg
6121 gtatctttat agtcctgtcg ggtttcgcca cctctgactt gagcgtcgat ttttgtgatg
6181 ctcgtcaggg gggcggagcc tatggaaaaa cgccagcaac gcggcctttt tacggttcct
6241 ggccttttgc tggccttttg ctcacatgtt ctttcctgcg ttatcccctg attctgtgga
6301 taaccgtatt accgcctttg agtgagctga taccggtcgc cgcagccgaa cgaccgagcg
6361 cagcgagtca gtgagcgagg aagcggaaga gcgcccaata cgcaaaccgc ctctccccgc
6421 gcgttggccg attcattaat gcagctggca cgacaggttt cccgactgga aagcgggcag
6481 tgagcgcaac gcaattaatg tgagttacct cactcattag gcaccccagg ctttacactt
6541 tatgcttccg gctcctatgt tgtgtggaat tgtgagcgga taacaatttc acacaggaaa
6601 cagctatgac catgattacg ccaagctcga aatacgactc actatagggc gaattgggta
6661 ccgggccggc cgtcgagctt gatggcatcg tggtgtcacg ctcgtcgttt ggtatggctt
6721 cattcagctc cggttcccaa cgatcaaggc gagttacatg atcccccatg ttgtgaaaaa
6781 aagcggttag ctcttcggtc ctccgatcgt tgtcagaagt aagttggccg cagtgttatc
6841 actcatggtt atggcaggaa ctgcataatt ctcttactgt catgccatcc gtaagatgct
6901 tttctgtgac tggtgtactc aaccaagtca ttctgagaat agtgtatgcg gcgaccgagt
6961 tgctcttgcc cggcgtcaac acgggataat accgcgccac atagcagaac tttaaaagtg
7021 ctcatcattg gaaaacgttc ttcggggcga aaactctcaa ggatcttacc gctgttgaga
7081 tccagttcga tgtaacccac tcgtgcaccc aactgatctt cagcatcttt tactttcacc
7141 agcgtttctg ggtgagcaaa aacaggaagg caaaatgccg caaaaaaggg aataagggcg
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7381 cattaaccta taaaaatagg cgtatcacga ggccctttcg tcttcaagaa ttggggatct
7441 acgtatggtc attcttcttc agattccctc atggagaagt gcggcagatg tatatgacag
7501 agtcgccagt ttccaagaga ctttattcag gcacttccat gataggcaag agagaagacc
7561 cagagatgtt gttgtcctag ttacacatgg tatttattcc agagtattcc tgatgaaatg
7621 gtttagatgg acatacgaag agtttgaatc gtttaccaat gttcctaacg ggagcgtaat
7681 ggtgatggaa ctggacgaat ccatcaatag atacgtcctg aggaccgtgc tacccaaatg
7741 gactgattgt gagggagacc taactacata gtgtttaaag attacggata tttaacttac
7801 ttagaataat gccatttttt tgagttataa taatcctacg ttagtgtgag cgggatttaa
7861 actgtgagga cctcaataca ttcagacact tctgacggta tcaccctact tattcccttc
7921 gagattatat ctaggaaccc atcaggttgg tggaagatta cccgttctaa gacttttcag
7981 cttcctctat tgatgttaca ctcggacacc ccttttctgg catccagttt ttaatcttca
8041 gtggcatgtg agattctccg aaattaatta aagcaatcac acaattctct cggataccac
8101 ctcggttgaa actgacaggt ggtttgttac gcatgctaat gcaaaggagc ctatatacct
8161 ttggctcggc tgctgtaaca gggaatataa agggcagcat aatttaggag tttagtgaac
8221 ttgcaacatt tactattttc ccttcttacg taaatatttt tctttttaat tctaaatcaa
8281 tctttttcaa ttttttgttt gtattctttt cttgcttaaa tctataacta caaaaaacac
8341 atacag
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pYX212酿酒酵母质粒
别称: pYX212
| 启动子: | TPI |
|---|---|
| 复制子: | 2U |
| 质粒分类: | 酵母系列载体；酿酒酵母表达质粒 |
| 质粒大小: | 8346bp |
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | URA3 |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 酵母菌 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 筛选标记： | URA3 |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pYX212质粒可以在酿酒酵母中表达，TPI启动子驱动目的基因的表达，C端有HA标签，通过WB实验可以很方便的检测基因是否表达。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 8346 bp ds-DNA circular SYN 05-JUN-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pYX212
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 8346)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..8346
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
misc_feature 1..48
/note="MCS"
CDS 49..75
/codon_start=1
/product="HA (human influenza hemagglutinin) epitope tag"
/note="HA"
/translation="YPYDVPDYA"
rep_origin 394..849
/direction=RIGHT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
CDS complement(980..1783)
/codon_start=1
/gene="S. cerevisiae URA3"
/product="orotidine-5'-phosphate decarboxylase, required
for uracil biosynthesis"
/note="URA3"
/note="yeast auxotrophic marker, counterselectable with
5-fluoroorotic acid (5-FOA)"
/translation="MSKATYKERAATHPSPVAAKLFNIMHEKQTNLCASLDVRTTKELL
ELVEALGPKICLLKTHVDILTDFSMEGTVKPLKALSAKYNFLLFEDRKFADIGNTVKLQ
YSAGVYRIAEWADITNAHGVLGPGIVSGLKQAAEEVTKEPRGLLMLAELSCKGSLSTGE
YTKGTVDIAKSDKDFVIGFIAQRDMGGRDEGYDWLIMTPGVGLDDKGDALGQQYRTVDD
VVSTGSDIIIVGRGLFAKGRDAKVQGERYRKAGWEAYLRRCGQQN"
promoter complement(1784..1999)
/gene="S. cerevisiae URA3"
/note="URA3 promoter"
rep_origin 2853..4195
/note="2u ori"
/note="yeast 2u plasmid origin of replication"
promoter 4484..4588
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
CDS 4589..5449
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLARRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLDNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
rep_origin 5620..6208
/direction=RIGHT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
misc_feature 7436..8345
/note="TPI promoter"
ORIGIN
1 gaattcacca tggatcctag ggcccacaag cttacgcgtc gacccgggta tccgtatgat
61 gtgcctgact acgcatgata tctcgagctc agctagctaa ctgaataagg aacaatgaac
121 gtttttcctt tctcttgttc ctagtattaa tgactgaccg atacatccct tttttttttt
181 gtctttgtct agctccagct tttgttccct ttagtgaggg ttaattcaat tcactggccg
241 tcgttttaca acgtcgtgac tgggaaaacc ctggcgttac ccaacttaat cgccttgcag
301 cacatccccc tttcgccagc tggcgtaata gcgaagaggc ccgcaccgat cgcccttccc
361 aacagttgcg cagcctgaat ggcgaatggc gcgacgcgcc ctgtagcggc gcattaagcg
421 cggcgggtgt ggtggttacg cgcagcgtga ccgctacact tgccagcgcc ctagcgcccg
481 ctcctttcgc tttcttccct tcctttctcg ccacgttcgc cggctttccc cgtcaagctc
541 taaatcgggg gctcccttta gggttccgat ttagtggttt acggcacctc gaccccaaaa
601 aacttgatta gggtgatggt tcacgtagtg ggccatcgcc ctgatagacg gtttttcgcc
661 ctttgacgtt ggagtccacg ttctttaata gtggactctt gttccaaact ggaacaacac
721 tcaaccctat ctcggtctat tcttttgatt tataagggat tttgccgatt tcggcctatt
781 ggttaaaaaa tgagctgatt taacaaaaat ttaacgcgaa ttttaacaaa atattaacgt
841 ttacaatttc ctgatgcggt attttctcct tacgcatctg tgcggtattt cacaccgcat
901 agggtaataa ctgatataat taaattgaag ctctaatttg tgagtttagt atacatgcat
961 ttacttataa tacagttttt tagttttgct ggccgcatct tctcaaatat gcttcccagc
1021 ctgcttttct gtaacgttca ccctgtacct tagcatccct tccctttgca aatagtcctc
1081 ttccaacaat aataatgtca gatcctgtag agaccacatc atccacggtt ctatactgtt
1141 gacccaatgc gtctcccttg tcatctaaac ccacaccggg tgtcataatc aaccaatcgt
1201 aaccttcatc tcttccaccc atgtctcttt gagcaataaa gccgataaca aaatctttgt
1261 cgctcttcgc aatgtcaaca gtacccttag tatattctcc agtagatagg gagcccttgc
1321 atgacaattc tgctaacatc aaaaggcctc taggttcctt tgttacttct tctgccgcct
1381 gcttcaaacc gctaacaata cctggcccca gcacaccgtg tgcattcgta atgtctgccc
1441 attctgctat tctgtataca cccgcagagt actgcaattt gactgtatta ccaatgtcag
1501 caaattttct gtcttcgaag agtaaaaaat tgtacttggc ggataatgcc tttagcggct
1561 taactgtgcc ctccatcgaa aaatcagtca atatatccac atgtgttttt agtaaacaaa
1621 ttttgggacc taatgcttca actaactcca gtaattcctt ggtggtacga acatccaatg
1681 aagcacacaa gtttgtttgc ttttcgtgca tgatattaaa tagcttggca gcaacaggac
1741 taggatgagt agcagcacgt tccttatatg tagctttcga catgatttat cttcgtttcc
1801 tgcaggtttt tgttctgtgc agttgggtta agaatactgg gcaatttcat gtttcttcaa
1861 cactacatat gcgtatatat accaatctaa gtctgtgctc cttccttcgt tcttccttct
1921 gttcggagat taccgaatca aaaaaatttc aaagaaaccg aaatcaaaaa aaagaataaa
1981 aaaaaaatga tgaattgaat tgaaaagctg tggtatggtg cactctcagt acaatctgct
2041 ctgatgccgc atagttaagc cagccccgac acccgccaac acccgctgac gcgccctgac
2101 gggcttgtct gctcccggca tccgcttaca gacaagctgt gaccgtctcc gggagctgca
2161 tgtgtcagag gttttcaccg tcatcaccga aacgcgcgag acgaaagggc ctcgtgatac
2221 gcctattttt ataggttaat gtcatgataa taatggtttc ttagacgtgc ggccgctcta
2281 gaactagtgg atcaattcca cggactatag actatactag tatactccgt ctactgtacg
2341 atacacttcc gctcaggtcc ttgtccttta acgaggcctt accactcttt tgttactcta
2401 ttgatccagc tcagcaaagg cagtgtgatc taagattcta tcttcgcgat gtagtaaaac
2461 tagctagacc gagaaagaga ctagaaatgc aaaaggcact tctacaatgg ctgccatcat
2521 tattatccga tgtgacgctg cagcttctca atgatattcg aatacgcttt gaggagatac
2581 agcctaatat ccgacaaact gttttacaga tttacgatcg tacttgttac ccatcattga
2641 attttgaaca tccgaacctg ggagttttcc ctgaaacaga tagtatattt gaacctgtat
2701 aataatatat agtctagcgc tttacggaag acaatgtatg tatttcggtt cctggagaaa
2761 ctattgcatc tattgcatag gtaatcttgc acgtcgcatc cccggttcat tttctgcgtt
2821 tccatcttgc acttcaatag catatctttg ttaacgaagc atctgtgctt cattttgtag
2881 aacaaaaatg caacgcgaga gcgctaattt ttcaaacaaa gaatctgagc tgcattttta
2941 cagaacagaa atgcaacgcg aaagcgctat tttaccaacg aagaatctgt gcttcatttt
3001 tgtaaaacaa aaatgcaacg cgagagcgct aatttttcaa acaaagaatc tgagctgcat
3061 ttttacagaa cagaaatgca acgcgagagc gctattttac caacaaagaa tctatacttc
3121 ttttttgttc tacaaaaatg catcccgaga gcgctatttt tctaacaaag catcttagat
3181 tacttttttt ctcctttgtg cgctctataa tgcagtctct tgataacttt ttgcactgta
3241 ggtccgttaa ggttagaaga aggctacttt ggtgtctatt ttctcttcca taaaaaaagc
3301 ctgactccac ttcccgcgtt tactgattac tagcgaagct gcgggtgcat tttttcaaga
3361 taaaggcatc cccgattata ttctataccg atgtggattc cgcatacttt gtgaacagaa
3421 agtgatagcg ttgatgattc ttcattggtc agaaaattat gaacggtttc ttctattttg
3481 tctctatata ctacgtatag gaaatgttta cattttcgta ttgttttcga ttcactctat
3541 gaatagttct tactacaatt tttttgtcta aagagtaata ctagagataa acataaaaaa
3601 tgtagaggtc gagtttagat gcaagttcaa ggagcgaaag gtggatgggt aggttatata
3661 gggatatagc acagagatat atagcaaaga gatacttttc agcaatgttt gtggaagcgg
3721 tattcgcaat attttagtag ctcgttacag tccggtgcgt ttttggtttt ttgaaagtgc
3781 gtcttcagag cgcttttggt tttcaaaagc gctctgaagt tcctatactt tctagagaat
3841 aggaacttcg gaataggaac ttcaaagcgt ttccgaaaac gagcgcttcc gaaaatgcaa
3901 cgcgagctgc gcacatacag ctcactgttc acgtcgcacc tatatctgcg tgttgcctgt
3961 atatatatat acatgagaag aacggcatag tgcgtgttta tgcttaaatg cgtacttata
4021 tgcgtctatt tatgtaggat gaaaggtagt ctagtacctc ctgtgatatt atcccattcc
4081 atgcggggta tcgtatgctt ccttcagcac taccctttag ctgttctata tgctgccact
4141 cctcaattgg attagtctca tccttcaatg ctatcatttc ctttgatatt ggatcatatg
4201 catagtaccg agaaactagt gcgaagtagt gatcaggtat tgctgttatc tgatgagtat
4261 acgttgtcct ggccacggca gaagcaccct tatcgctcca atttcccaca acattagtca
4321 actccgttag gcccttcatt gaaagaaatg aggtcatcaa atgtcttcca atgtgagatt
4381 ttgggccatt ttttatagca aagattgaat aaggcgcatt tttcttcaaa gctgcggccg
4441 cactctcact agtacgtcag gtggcacttt tcggggaaat gtgcgcggaa cccctatttg
4501 tttatttttc taaatacatt caaatatgta tccgctcatg agacaataac cgtgataaat
4561 gcttcaataa tattgaaaaa ggaagagtat gagtattcaa catttccgtg tcgcccttat
4621 tccctttttt gcggcatttt gccttcctgt ttttgctcac ccagaaacgc tggtgaaagt
4681 aaaagatgct gaagatcagt tgggtgcacg agtgggttac atcgaactgg atctcaacag
4741 cggtaagatc cttgagagtt ttcgccccga agaacgtttt ccaatgatga gcacttttaa
4801 agttctgcta tgtggcgcgg tattatcccg tattgacgcc gggcaagagc aactcgctcg
4861 ccgcatacac tattctcaga atgacttggt tgagtactca ccagtcacag aaaagcatct
4921 tacggatggc atgacagtaa gagaattatg cagtgctgcc ataaccatga gtgataacac
4981 tgcggccaac ttacttctga caacgatcgg aggaccgaag gagctaaccg cttttttgga
5041 caacatgggg gatcatgtaa ctcgccttga tcgttgggaa ccggagctga atgaagccat
5101 accaaacgac gagcgtgaca ccacgatgcc tgtagcaatg gcaacaacgt tgcgcaaact
5161 attaactggc gaactactta ctctagcttc ccggcaacaa ttaatagact ggatggaggc
5221 ggataaagtt gcaggaccac ttctgcgctc ggcccttccg gctggctggt ttattgctga
5281 taaatctgga gccggtgagc gtgggtctcg cggtatcatt gcagcactgg ggccagatgg
5341 taagccctcc cgtatcgtag ttatctacac gacggggagt caggcaacta tggatgaacg
5401 aaatagacag atcgctgaga taggtgcctc actgattaag cattggtaac tgtcagacca
5461 agtttactca tatatacttt agattgattt aaaacttcat ttttaattta aaaggatcta
5521 ggtgaagatc ctttttgata atctcatgac caaaatccct taacgtgagt tttcgttcca
5581 ctgagcgtca gaccccgtag aaaagatcaa aggatcttct tgagatcctt tttttctgcg
5641 cgtaatctgc tgcttgcaaa caaaaaaacc accgctacca gcggtggttt gtttgccgga
5701 tcaagagcta ccaactcttt ttccgaaggt aactggcttc agcagagcgc agataccaaa
5761 tactgtcctt ctagtgtagc cgtagttagg ccaccacttc aagaactctg tagcaccgcc
5821 tacatacctc gctctgctaa tcctgttacc agtggctgct gccagtggcg ataagtcgtg
5881 tcttaccggg ttggactcaa gacgatagtt accggataag gcgcagcggt cgggctgaac
5941 ggggggttcg tgcacacagc ccagcttgga gcgaacgacc tacaccgaac tgagatacct
6001 acagcgtgag ctatgagaaa gcgccacgct tcccgaaggg agaaaggcgg acaggtatcc
6061 ggtaagcggc agggtcggaa caggagagcg cacgagggag cttccagggg gaaacgcctg
6121 gtatctttat agtcctgtcg ggtttcgcca cctctgactt gagcgtcgat ttttgtgatg
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6241 ggccttttgc tggccttttg ctcacatgtt ctttcctgcg ttatcccctg attctgtgga
6301 taaccgtatt accgcctttg agtgagctga taccggtcgc cgcagccgaa cgaccgagcg
6361 cagcgagtca gtgagcgagg aagcggaaga gcgcccaata cgcaaaccgc ctctccccgc
6421 gcgttggccg attcattaat gcagctggca cgacaggttt cccgactgga aagcgggcag
6481 tgagcgcaac gcaattaatg tgagttacct cactcattag gcaccccagg ctttacactt
6541 tatgcttccg gctcctatgt tgtgtggaat tgtgagcgga taacaatttc acacaggaaa
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6661 ccgggccggc cgtcgagctt gatggcatcg tggtgtcacg ctcgtcgttt ggtatggctt
6721 cattcagctc cggttcccaa cgatcaaggc gagttacatg atcccccatg ttgtgaaaaa
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8221 ttgcaacatt tactattttc ccttcttacg taaatatttt tctttttaat tctaaatcaa
8281 tctttttcaa ttttttgttt gtattctttt cttgcttaaa tctataacta caaaaaacac
8341 atacag
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
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文献和实验相关实验
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pYX212酿酒酵母质粒
￥100 - 1000
