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- 2025年07月08日
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- 详细信息
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
Plasmid#46966
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pICH86966::AtU6p::sgRNA_PDS植物编辑质粒
别称: Plasmid#46966
质粒属性
质粒简介
pICH86966::AtU6p::sgRNA_PDS植物编辑质粒
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6550 bp ds-DNA circular SYN 08-JUL-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pICH86966-AtU6p-sgRNA_PDS
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6550)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6550
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
misc_feature 32..56
/note="RB T-DNA repeat"
/note="right border repeat from nopaline C58 T-DNA"
rep_origin complement(179..766)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(938..1732)
/codon_start=1
/gene="aphA-3"
/product="aminoglycoside phosphotransferase"
/note="KanR"
/note="confers resistance to kanamycin"
/translation="MAKMRISPELKKLIEKYRCVKDTEGMSPAKVYKLVGENENLYLKM
TDSRYKGTTYDVEREKDMMLWLEGKLPVPKVLHFERHDGWSNLLMSEADGVLCSEEYED
EQSPEKIIELYAECIRLFHSIDISDCPYTNSLDSRLAELDYLLNNDLADVDCENWEEDT
PFKDPRELYDFLKTEKPEEELVFSHGDLGDSNIFVKDGKVSGFIDLGRSGRADKWYDIA
FCVRSIREDIGEEQYVELFFDLLGIKPDWEKIKYYILLDELF"
promoter complement(1733..1837)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
rep_origin 2120..2314
/note="pVS1 oriV"
/note="origin of replication for the Pseudomonas plasmid
pVS1 (Heeb et al., 2000)"
CDS complement(2380..3447)
/codon_start=1
/product="replication protein from the Pseudomonas plasmid
pVS1 (Heeb et al., 2000)"
/note="pVS1 RepA"
/translation="GRKPSGPVQIGAALGDDLVEKLKAAQAAQRQRIEAEARPGESWQA
AADRIRKESRQPPAAGAPSIRKPPKGDEQPDFFVPMLYDVGTRDSRSIMDVAVFRLSKR
DRRAGEVIRYELPDGHVEVSAGPAGMASVWDYDLVLMAVSHLTESMNRYREGKGDKPGR
VFRPHVADVLKFCRRADGGKQKDDLVETCIRLNTTHVAMQRTKKAKNGRLVTVSEGEAL
ISRYKIVKSETGRPEYIEIELADWMYREITEGKNPDVLTVHPDYFLIDPGIGRFLYRLA
RRAAGKAEARWLFKTIYERSGSAGEFKKFCFTVRKLIGSNDLPEYDLKEEAGQAGPILV
MRYRNLIEGEASAGS"
CDS complement(3881..4510)
/codon_start=1
/product="stability protein from the Pseudomonas plasmid
pVS1 (Heeb et al., 2000)"
/note="pVS1 StaA"
/translation="MKVIAVLNQKGGSGKTTIATHLARALQLAGADVLLVDSDPQGSAR
DWAAVREDQPLTVVGIDRPTIDRDVKAIGRRDFVVIDGAPQAADLAVSAIKAADFVLIP
VQPSPYDIWATADLVELVKQRIEVTDGRLQAAFVVSRAIKGTRIGGEVAEALAGYELPI
LESRITQRVSYPGTAAAGTTVLESEPEGDAAREVQALAAEIKSKLI"
misc_feature 4774..4798
/note="LB T-DNA repeat"
/note="left border repeat from nopaline C58 T-DNA"
promoter 5008..5191
/function="NOS promoter"
/note="NOS promoter"
/note="nopaline synthase promoter"
CDS 5212..6006
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/note="NeoR/KanR"
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
terminator 6032..6284
/note="NOS terminator"
/note="nopaline synthase terminator and poly(A) signal"
promoter 6311..6385
/note="AtU6 promoter"
/note="consensus promoter from the three Arabidopsis U6
snRNA genes (Waibel and Filipowicz, 1990; Nekrasov et al.,
2013)"
misc_RNA 6406..6481
/note="gRNA scaffold"
/note="guide RNA scaffold for the Streptococcus pyogenes
CRISPR/Cas9 system"
protein_bind complement(6493..6517)
/gene="mutant version of attB"
/bound_moiety="BP Clonase(TM)"
/note="attB2"
/note="recombination site for the Gateway(R) BP reaction"
ORIGIN
1 gggacacgaa gtggtttaaa ctatcagtgt ttgacaggat atattggcgg gtaaacctaa
61 gagaaaagag cgtttattag aataatcgga tatttaaaag ggcgtgaaaa ggtttatccg
121 ttcgtccatt tgtatgtgcc aaccacagga accgtaaaaa ggccgcgttg ctggcgtttt
181 tccataggct ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg acgctcaagt cagaggtggc
241 gaaacccgac aggactataa agataccagg cgtttccccc tggaagctcc ctcgtgcgct
301 ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc ctttctccct tcgggaagcg
361 tggcgctttc tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc ggtgtaggtc gttcgctcca
421 agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg ctgcgcctta tccggtaact
481 atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc actggcagca gccactggta
541 acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga gttcttgaag tggtggccta
601 actacggcta cactagaagg acagtatttg gtatctgcgc tctgctgaag ccagttacct
661 tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac caccgctggt agcggtggtt
721 tttttgtttg caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg atctcaggaa gatcctttga
781 tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc acgttaaggg attttggtca
841 tgagattatc aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa ttaaaaatga agttttaaat
901 caatctaaag tatatatgag taaacttggt ctgacagcta aaacaattca tccagtaaaa
961 tataatattt tattttctcc caatcaggct tgatccccag taagtcaaaa aatagctcga
1021 catactgttc ttccccgata tcctccctga tcgaccggac gcagaaggca atgtcatacc
1081 acttgtccgc cctgccgctt ctcccaagat caataaagcc acttactttg ccatctttca
1141 caaagatgtt gctgtctccc aggtcgccgt gggaaaagac aagttcctct tcgggctttt
1201 ccgtctttaa aaaatcatac agctcgcgcg gatctttaaa tggagtgtcc tcttcccagt
1261 tttcgcaatc cacatcggcc agatcgttat tcagtaagta atccaattcg gctaagcggc
1321 tgtctaagct attcgtatag ggacaatccg atatgtcgat ggagtgaaag agcctgatgc
1381 actccgcata cagctcgata atcttttcag ggctttgttc atcttcatac tcttccgagc
1441 aaaggacgcc atcggcctca ctcatgagca gattgctcca gccatcatgc cgttcaaagt
1501 gcaggacctt tggaacaggc agctttcctt ccagccatag catcatgtcc ttttcccgtt
1561 ccacatcata ggtggtccct ttataccggc tgtccgtcat ttttaaatat aggttttcat
1621 tttctcccac cagcttatat accttagcag gagacattcc ttccgtatct tttacgcagc
1681 ggtatttttc gatcagtttt ttcaattccg gtgatattct cattttagcc atactcttcc
1741 tttttcaata ttattgaagc atttatcagg gttattgtct catgagcgga tacatatttg
1801 aatgtattta gaaaaataaa caaatagggg ttccgcgcac gaattggcca gcgctgccat
1861 ttttggggtg aggccgttcg cggccgaggg gcgcagcccc tggggggatg ggagctcggt
1921 gccttgatgt gggcgccggc ggtcgagtgg cgacggcgcg gcttgtccgc gccctggtag
1981 attgcctggc cgtaggccag ccatttttga gcggccagcg gccgcgatag gccgacgcga
2041 agcggcgggg cgtagggagc gcagcgaccg aagggtaggc gctttttgca gctcttcggc
2101 tgtgcgctgg ccagacagtt atgcacaggc caggcgggtt ttaagagttt taataagttt
2161 taaagagttt taggcggaaa aatcgccttt tttctctttt atatcagtca cttacatgtg
2221 tgaccggttc ccaatgtacg gctttgggtt cccaatgtac gggttccggt tcccaatgta
2281 cggctttggg ttcccaatgt acgtgctatc cacaggaaag aagctttttc gacctttttc
2341 ccctgctagg gcaatttgcc ctagcatctg ctccgtacat taggaaccgg cggatgcttc
2401 gccctcgatc aggttgcggt agcgcatgac taggatcggg ccagcctgcc ccgcctcctc
2461 cttcaaatcg tactccggca ggtcatttga cccgatcagc ttgcgcacgg tgaaacagaa
2521 cttcttgaac tctccggcgc tgccactgcg ttcgtagatc gtcttgaaca accatctggc
2581 ttctgccttg cctgcggcgc ggcgtgccag gcggtagaga aaacggccga tgccgggatc
2641 gatcaaaaag taatcggggt gaaccgtcag cacgtccggg ttcttgcctt ctgtgatctc
2701 gcggtacatc caatcagcta gctcgatctc gatgtactcc ggccgcccgg tttcgctctt
2761 tacgatcttg tagcggctaa tcaaggcttc accctcggat accgtcacca ggcggccgtt
2821 cttggccttc ttcgtacgct gcatggcaac gtgcgtggtg tttaaccgaa tgcaggtttc
2881 taccaggtcg tctttctgct ttccgccatc ggctcgccgg cagaacttga gtacgtccgc
2941 aacgtgtgga cggaacacgc ggccgggctt gtctcccttc ccttcccggt atcggttcat
3001 ggattcggtt agatgggaaa ccgccatcag taccaggtcg taatcccaca cactggccat
3061 gccggccggc cctgcggaaa cctctacgtg cccgtctgga agctcgtagc ggatcacctc
3121 gccagctcgt cggtcacgct tcgacagacg gaaaacggcc acgtccatga tgctgcgact
3181 atcgcgggtg cccacgtcat agagcatcgg aacgaaaaaa tctggttgct cgtcgccctt
3241 gggcggcttc ctaatcgacg gcgcaccggc tgccggcggt tgccgggatt ctttgcggat
3301 tcgatcagcg gccgcttgcc acgattcacc ggggcgtgct tctgcctcga tgcgttgccg
3361 ctgggcggcc tgcgcggcct tcaacttctc caccaggtca tcacccagcg ccgcgccgat
3421 ttgtaccggg ccggatggtt tgcgaccgtc acgccgattc ctcgggcttg ggggttccag
3481 tgccattgca gggccggcag acaacccagc cgcttacgcc tggccaaccg cccgttcctc
3541 cacacatggg gcattccacg gcgtcggtgc ctggttgttc ttgattttcc atgccgcctc
3601 ctttagccgc taaaattcat ctactcattt attcatttgc tcatttactc tggtagctgc
3661 gcgatgtatt cagatagcag ctcggtaatg gtcttgcctt ggcgtaccgc gtacatcttc
3721 agcttggtgt gatcctccgc cggcaactga aagttgaccc gcttcatggc tggcgtgtct
3781 gccaggctgg ccaacgttgc agccttgctg ctgcgtgcgc tcggacggcc ggcacttagc
3841 gtgtttgtgc ttttgctcat tttctcttta cctcattaac tcaaatgagt tttgatttaa
3901 tttcagcggc cagcgcctgg acctcgcggg cagcgtcgcc ctcgggttct gattcaagaa
3961 cggttgtgcc ggcggcggca gtgcctgggt agctcacgcg ctgcgtgata cgggactcaa
4021 gaatgggcag ctcgtacccg gccagcgcct cggcaacctc accgccgatg cgcgtgcctt
4081 tgatcgcccg cgacacgaca aaggccgctt gtagccttcc atccgtgacc tcaatgcgct
4141 gcttaaccag ctccaccagg tcggcggtgg cccatatgtc gtaagggctt ggctgcaccg
4201 gaatcagcac gaagtcggct gccttgatcg cggacacagc caagtccgcc gcctggggcg
4261 ctccgtcgat cactacgaag tcgcgccggc cgatggcctt cacgtcgcgg tcaatcgtcg
4321 ggcggtcgat gccgacaacg gttagcggtt gatcttcccg cacggccgcc caatcgcggg
4381 cactgccctg gggatcggaa tcgactaaca gaacatcggc cccggcgagt tgcagggcgc
4441 gggctagatg ggttgcgatg gtcgtcttgc ctgacccgcc tttctggtta agtacagcga
4501 taaccttcat gcgttcccct tgcgtatttg tttatttact catcgcatca tatacgcagc
4561 gaccgcatga cgcaagctgt tttactcaaa tacacatcac ctttttagac ggcggcgctc
4621 ggtttcttca gcggccaagc tggccggcca ggccgccagc ttggcatcag acaaaccggc
4681 caggatttca tgcagccgca cggctgatgg gctgcctgta tcgagtggtg attttgtgcc
4741 gagctgccgg tcggggagct gttggctggc tggtggcagg atatattgtg gtgtaaacaa
4801 attgacgctt agacaactta ataacacatt gcggacgttt ttaatgtact ggggtggatg
4861 cagtgggccc cactctgtgt gccgaattcg gatccggaga gcggagaatt aagggagtca
4921 cgttatgacc cccgccgatg acgcgggaca agccgtttta cgtttggaac tgacagaacc
4981 gcaacgttga aggagccact cagccgcggg tttctggagt ttaatgagct aagcacatac
5041 gtcagaaacc attattgcgc gttcaaaagt cgcctaaggt cactatcagc tagcaaatat
5101 ttcttgtcaa aaatgctcca ctgacgttcc ataaattccc ctcggtatcc aattagagtc
5161 tcatattcac tctcaatcca aataatctgc accggatctg gatcgtttcg catgattgaa
5221 caagatggat tgcacgcagg ttctccggcc gcttgggtgg agaggctatt cggctatgac
5281 tgggcacaac agacaatcgg ctgctctgat gccgccgtgt tccggctgtc agcgcagggg
5341 cgcccggttc tttttgtcaa gaccgacctg tccggtgccc tgaatgaact ccaggacgag
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5461 gtcactgaag cgggaaggga ctggctgcta ttgggcgaag tgccggggca ggatctcctg
5521 tcatctcacc ttgctcctgc cgagaaagta tccatcatgg ctgatgcaat gcggcggctg
5581 catacgcttg atccggctac ctgcccattc gaccaccaag cgaaacatcg catcgagcga
5641 gcacgtactc ggatggaagc cggtcttgtc gatcaggatg atctggacga agagcatcag
5701 gggctcgcgc cagccgaact gttcgccagg ctcaaggcgc gtatgcccga cggcgaggat
5761 ctcgtcgtga ctcatggcga tgcctgcttg ccgaatatca tggtggaaaa tggccgcttt
5821 tctggattca tcgactgtgg ccggctgggt gtggcggacc gctatcagga catagcgttg
5881 gctacccgtg atattgctga agagcttggc ggcgaatggg ctgaccgctt cctcgtgctt
5941 tacggtatcg ccgctcccga ttcgcagcgc atcgccttct atcgccttct tgacgagttc
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6061 cttaagattg aatcctgttg ccggtcttgc gatgattatc atataatttc tgttgaatta
6121 cgttaagcat gtaataatta acatgtaatg catgacgtta tttatgagat gggtttttat
6181 gattagagtc ccgcaattat acatttaata cgcgatagaa aacaaaatat agcgcgcaaa
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6301 aagcttggag tgatcaaaag tcccacatcg atcaggtgat atatagcagc ttagtttata
6361 taatgataga gtcgacatag cgattgccgt taatttgaga gtccagtttt agagctagaa
6421 atagcaagtt aaaataaggc tagtccgtta tcaacttgaa aaagtggcac cgagtcggtg
6481 ctttttttct agacccagct ttcttgtaca aagttggcat tacgctacta gaggatgcac
6541 atgtgaccga
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pICH86966::AtU6p::sgRNA_PDS植物编辑质粒
别称: Plasmid#46966
| 原核抗性: | Kan |
|---|---|
| 筛选标记: | G418 |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 植物 |
|---|---|
| 载体用途： | 基因敲除 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | |
| 原核抗性： | Kan |
| 筛选标记： | Neo/G418 |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pICH86966::AtU6p::sgRNA_PDS植物编辑质粒
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6550 bp ds-DNA circular SYN 08-JUL-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pICH86966-AtU6p-sgRNA_PDS
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6550)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6550
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
misc_feature 32..56
/note="RB T-DNA repeat"
/note="right border repeat from nopaline C58 T-DNA"
rep_origin complement(179..766)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(938..1732)
/codon_start=1
/gene="aphA-3"
/product="aminoglycoside phosphotransferase"
/note="KanR"
/note="confers resistance to kanamycin"
/translation="MAKMRISPELKKLIEKYRCVKDTEGMSPAKVYKLVGENENLYLKM
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PFKDPRELYDFLKTEKPEEELVFSHGDLGDSNIFVKDGKVSGFIDLGRSGRADKWYDIA
FCVRSIREDIGEEQYVELFFDLLGIKPDWEKIKYYILLDELF"
promoter complement(1733..1837)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
rep_origin 2120..2314
/note="pVS1 oriV"
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pVS1 (Heeb et al., 2000)"
CDS complement(2380..3447)
/codon_start=1
/product="replication protein from the Pseudomonas plasmid
pVS1 (Heeb et al., 2000)"
/note="pVS1 RepA"
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DRRAGEVIRYELPDGHVEVSAGPAGMASVWDYDLVLMAVSHLTESMNRYREGKGDKPGR
VFRPHVADVLKFCRRADGGKQKDDLVETCIRLNTTHVAMQRTKKAKNGRLVTVSEGEAL
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pVS1 (Heeb et al., 2000)"
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DWAAVREDQPLTVVGIDRPTIDRDVKAIGRRDFVVIDGAPQAADLAVSAIKAADFVLIP
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promoter 5008..5191
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/note="NOS promoter"
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CDS 5212..6006
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/note="NeoR/KanR"
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
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VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
terminator 6032..6284
/note="NOS terminator"
/note="nopaline synthase terminator and poly(A) signal"
promoter 6311..6385
/note="AtU6 promoter"
/note="consensus promoter from the three Arabidopsis U6
snRNA genes (Waibel and Filipowicz, 1990; Nekrasov et al.,
2013)"
misc_RNA 6406..6481
/note="gRNA scaffold"
/note="guide RNA scaffold for the Streptococcus pyogenes
CRISPR/Cas9 system"
protein_bind complement(6493..6517)
/gene="mutant version of attB"
/bound_moiety="BP Clonase(TM)"
/note="attB2"
/note="recombination site for the Gateway(R) BP reaction"
ORIGIN
1 gggacacgaa gtggtttaaa ctatcagtgt ttgacaggat atattggcgg gtaaacctaa
61 gagaaaagag cgtttattag aataatcgga tatttaaaag ggcgtgaaaa ggtttatccg
121 ttcgtccatt tgtatgtgcc aaccacagga accgtaaaaa ggccgcgttg ctggcgtttt
181 tccataggct ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg acgctcaagt cagaggtggc
241 gaaacccgac aggactataa agataccagg cgtttccccc tggaagctcc ctcgtgcgct
301 ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc ctttctccct tcgggaagcg
361 tggcgctttc tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc ggtgtaggtc gttcgctcca
421 agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg ctgcgcctta tccggtaact
481 atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc actggcagca gccactggta
541 acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga gttcttgaag tggtggccta
601 actacggcta cactagaagg acagtatttg gtatctgcgc tctgctgaag ccagttacct
661 tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac caccgctggt agcggtggtt
721 tttttgtttg caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg atctcaggaa gatcctttga
781 tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc acgttaaggg attttggtca
841 tgagattatc aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa ttaaaaatga agttttaaat
901 caatctaaag tatatatgag taaacttggt ctgacagcta aaacaattca tccagtaaaa
961 tataatattt tattttctcc caatcaggct tgatccccag taagtcaaaa aatagctcga
1021 catactgttc ttccccgata tcctccctga tcgaccggac gcagaaggca atgtcatacc
1081 acttgtccgc cctgccgctt ctcccaagat caataaagcc acttactttg ccatctttca
1141 caaagatgtt gctgtctccc aggtcgccgt gggaaaagac aagttcctct tcgggctttt
1201 ccgtctttaa aaaatcatac agctcgcgcg gatctttaaa tggagtgtcc tcttcccagt
1261 tttcgcaatc cacatcggcc agatcgttat tcagtaagta atccaattcg gctaagcggc
1321 tgtctaagct attcgtatag ggacaatccg atatgtcgat ggagtgaaag agcctgatgc
1381 actccgcata cagctcgata atcttttcag ggctttgttc atcttcatac tcttccgagc
1441 aaaggacgcc atcggcctca ctcatgagca gattgctcca gccatcatgc cgttcaaagt
1501 gcaggacctt tggaacaggc agctttcctt ccagccatag catcatgtcc ttttcccgtt
1561 ccacatcata ggtggtccct ttataccggc tgtccgtcat ttttaaatat aggttttcat
1621 tttctcccac cagcttatat accttagcag gagacattcc ttccgtatct tttacgcagc
1681 ggtatttttc gatcagtttt ttcaattccg gtgatattct cattttagcc atactcttcc
1741 tttttcaata ttattgaagc atttatcagg gttattgtct catgagcgga tacatatttg
1801 aatgtattta gaaaaataaa caaatagggg ttccgcgcac gaattggcca gcgctgccat
1861 ttttggggtg aggccgttcg cggccgaggg gcgcagcccc tggggggatg ggagctcggt
1921 gccttgatgt gggcgccggc ggtcgagtgg cgacggcgcg gcttgtccgc gccctggtag
1981 attgcctggc cgtaggccag ccatttttga gcggccagcg gccgcgatag gccgacgcga
2041 agcggcgggg cgtagggagc gcagcgaccg aagggtaggc gctttttgca gctcttcggc
2101 tgtgcgctgg ccagacagtt atgcacaggc caggcgggtt ttaagagttt taataagttt
2161 taaagagttt taggcggaaa aatcgccttt tttctctttt atatcagtca cttacatgtg
2221 tgaccggttc ccaatgtacg gctttgggtt cccaatgtac gggttccggt tcccaatgta
2281 cggctttggg ttcccaatgt acgtgctatc cacaggaaag aagctttttc gacctttttc
2341 ccctgctagg gcaatttgcc ctagcatctg ctccgtacat taggaaccgg cggatgcttc
2401 gccctcgatc aggttgcggt agcgcatgac taggatcggg ccagcctgcc ccgcctcctc
2461 cttcaaatcg tactccggca ggtcatttga cccgatcagc ttgcgcacgg tgaaacagaa
2521 cttcttgaac tctccggcgc tgccactgcg ttcgtagatc gtcttgaaca accatctggc
2581 ttctgccttg cctgcggcgc ggcgtgccag gcggtagaga aaacggccga tgccgggatc
2641 gatcaaaaag taatcggggt gaaccgtcag cacgtccggg ttcttgcctt ctgtgatctc
2701 gcggtacatc caatcagcta gctcgatctc gatgtactcc ggccgcccgg tttcgctctt
2761 tacgatcttg tagcggctaa tcaaggcttc accctcggat accgtcacca ggcggccgtt
2821 cttggccttc ttcgtacgct gcatggcaac gtgcgtggtg tttaaccgaa tgcaggtttc
2881 taccaggtcg tctttctgct ttccgccatc ggctcgccgg cagaacttga gtacgtccgc
2941 aacgtgtgga cggaacacgc ggccgggctt gtctcccttc ccttcccggt atcggttcat
3001 ggattcggtt agatgggaaa ccgccatcag taccaggtcg taatcccaca cactggccat
3061 gccggccggc cctgcggaaa cctctacgtg cccgtctgga agctcgtagc ggatcacctc
3121 gccagctcgt cggtcacgct tcgacagacg gaaaacggcc acgtccatga tgctgcgact
3181 atcgcgggtg cccacgtcat agagcatcgg aacgaaaaaa tctggttgct cgtcgccctt
3241 gggcggcttc ctaatcgacg gcgcaccggc tgccggcggt tgccgggatt ctttgcggat
3301 tcgatcagcg gccgcttgcc acgattcacc ggggcgtgct tctgcctcga tgcgttgccg
3361 ctgggcggcc tgcgcggcct tcaacttctc caccaggtca tcacccagcg ccgcgccgat
3421 ttgtaccggg ccggatggtt tgcgaccgtc acgccgattc ctcgggcttg ggggttccag
3481 tgccattgca gggccggcag acaacccagc cgcttacgcc tggccaaccg cccgttcctc
3541 cacacatggg gcattccacg gcgtcggtgc ctggttgttc ttgattttcc atgccgcctc
3601 ctttagccgc taaaattcat ctactcattt attcatttgc tcatttactc tggtagctgc
3661 gcgatgtatt cagatagcag ctcggtaatg gtcttgcctt ggcgtaccgc gtacatcttc
3721 agcttggtgt gatcctccgc cggcaactga aagttgaccc gcttcatggc tggcgtgtct
3781 gccaggctgg ccaacgttgc agccttgctg ctgcgtgcgc tcggacggcc ggcacttagc
3841 gtgtttgtgc ttttgctcat tttctcttta cctcattaac tcaaatgagt tttgatttaa
3901 tttcagcggc cagcgcctgg acctcgcggg cagcgtcgcc ctcgggttct gattcaagaa
3961 cggttgtgcc ggcggcggca gtgcctgggt agctcacgcg ctgcgtgata cgggactcaa
4021 gaatgggcag ctcgtacccg gccagcgcct cggcaacctc accgccgatg cgcgtgcctt
4081 tgatcgcccg cgacacgaca aaggccgctt gtagccttcc atccgtgacc tcaatgcgct
4141 gcttaaccag ctccaccagg tcggcggtgg cccatatgtc gtaagggctt ggctgcaccg
4201 gaatcagcac gaagtcggct gccttgatcg cggacacagc caagtccgcc gcctggggcg
4261 ctccgtcgat cactacgaag tcgcgccggc cgatggcctt cacgtcgcgg tcaatcgtcg
4321 ggcggtcgat gccgacaacg gttagcggtt gatcttcccg cacggccgcc caatcgcggg
4381 cactgccctg gggatcggaa tcgactaaca gaacatcggc cccggcgagt tgcagggcgc
4441 gggctagatg ggttgcgatg gtcgtcttgc ctgacccgcc tttctggtta agtacagcga
4501 taaccttcat gcgttcccct tgcgtatttg tttatttact catcgcatca tatacgcagc
4561 gaccgcatga cgcaagctgt tttactcaaa tacacatcac ctttttagac ggcggcgctc
4621 ggtttcttca gcggccaagc tggccggcca ggccgccagc ttggcatcag acaaaccggc
4681 caggatttca tgcagccgca cggctgatgg gctgcctgta tcgagtggtg attttgtgcc
4741 gagctgccgg tcggggagct gttggctggc tggtggcagg atatattgtg gtgtaaacaa
4801 attgacgctt agacaactta ataacacatt gcggacgttt ttaatgtact ggggtggatg
4861 cagtgggccc cactctgtgt gccgaattcg gatccggaga gcggagaatt aagggagtca
4921 cgttatgacc cccgccgatg acgcgggaca agccgtttta cgtttggaac tgacagaacc
4981 gcaacgttga aggagccact cagccgcggg tttctggagt ttaatgagct aagcacatac
5041 gtcagaaacc attattgcgc gttcaaaagt cgcctaaggt cactatcagc tagcaaatat
5101 ttcttgtcaa aaatgctcca ctgacgttcc ataaattccc ctcggtatcc aattagagtc
5161 tcatattcac tctcaatcca aataatctgc accggatctg gatcgtttcg catgattgaa
5221 caagatggat tgcacgcagg ttctccggcc gcttgggtgg agaggctatt cggctatgac
5281 tgggcacaac agacaatcgg ctgctctgat gccgccgtgt tccggctgtc agcgcagggg
5341 cgcccggttc tttttgtcaa gaccgacctg tccggtgccc tgaatgaact ccaggacgag
5401 gcagcgcggc tatcgtggct ggccacgacg ggcgttcctt gcgcagctgt gctcgacgtt
5461 gtcactgaag cgggaaggga ctggctgcta ttgggcgaag tgccggggca ggatctcctg
5521 tcatctcacc ttgctcctgc cgagaaagta tccatcatgg ctgatgcaat gcggcggctg
5581 catacgcttg atccggctac ctgcccattc gaccaccaag cgaaacatcg catcgagcga
5641 gcacgtactc ggatggaagc cggtcttgtc gatcaggatg atctggacga agagcatcag
5701 gggctcgcgc cagccgaact gttcgccagg ctcaaggcgc gtatgcccga cggcgaggat
5761 ctcgtcgtga ctcatggcga tgcctgcttg ccgaatatca tggtggaaaa tggccgcttt
5821 tctggattca tcgactgtgg ccggctgggt gtggcggacc gctatcagga catagcgttg
5881 gctacccgtg atattgctga agagcttggc ggcgaatggg ctgaccgctt cctcgtgctt
5941 tacggtatcg ccgctcccga ttcgcagcgc atcgccttct atcgccttct tgacgagttc
6001 ttctgagcgg gtctggatct agagtcaagc agatcgttca aacatttggc aataaagttt
6061 cttaagattg aatcctgttg ccggtcttgc gatgattatc atataatttc tgttgaatta
6121 cgttaagcat gtaataatta acatgtaatg catgacgtta tttatgagat gggtttttat
6181 gattagagtc ccgcaattat acatttaata cgcgatagaa aacaaaatat agcgcgcaaa
6241 ctaggataaa ttatcgcgcg cggtgtcatc tatgttacta gatcgacgct gcaagaattc
6301 aagcttggag tgatcaaaag tcccacatcg atcaggtgat atatagcagc ttagtttata
6361 taatgataga gtcgacatag cgattgccgt taatttgaga gtccagtttt agagctagaa
6421 atagcaagtt aaaataaggc tagtccgtta tcaacttgaa aaagtggcac cgagtcggtg
6481 ctttttttct agacccagct ttcttgtaca aagttggcat tacgctacta gaggatgcac
6541 atgtgaccga
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P2016/pCHAC-mt-mKeima线粒体酸碱敏感性定位质粒 |
| P0142/pDsRed2-Mito线粒体定位质粒 |
| P1226/mKeima-Red-Mito-7线粒体定位质粒 |
| P2127/Matrix-roGFP线粒体定位质粒 |
| P4954/pEGFP-Mito-DsRed2线粒体定位质粒 |
| P0141/pDsRed2-ER内质网定位质粒 |
| P0154/pDsRed2-Peroxi过氧化物酶体定位质粒 |
| P0148/pEYFP-Golgi高尔基体定位质粒 |
| P0770/pDsRed-Monomer-Golgi高尔基体定位质粒 |
| P2164/pmCherry-GAP43细胞膜定位质粒 |
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