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- Xybio
- 上海
- P2847
- 2025年07月13日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
Plasmid#51295
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pK7WGF2::hCas9植物编辑质粒
别称: Plasmid#51295
| 启动子: | Ubi,Osu3 |
|---|---|
| 复制子: | pVS1 |
| 原核抗性: | Kan |
| 筛选标记: | Hyg |
| 克隆菌株: | Stbl3 |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 植物 |
|---|---|
| 载体用途： | 基因敲除 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | CRISPR |
| 原核抗性： | Kan |
| 筛选标记： | Hyg |
| 荧光蛋白： |
pK7WGF2::hCas9质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P0198/pmirGLO哺乳报告质粒 |
| P1744/p2Luc哺乳报告质粒 |
| P0680/pBiFC-VC155双分荧光质粒 |
| P0681/pBiFC-VN173双分荧光质粒 |
| P0876/pBIFC-CrN173双分荧光质粒 |
| P0877/pBIFC-CC155双分荧光质粒 |
| P0878/pBiFC-VN155(I152L)双分荧光质粒 |
| P0879/pBiFC-bJunVN155(I152L)双分荧光质粒 |
| P1072/pBiFC-bJunVN173双分荧光质粒 |
| P0720/pBIFC-bFosVC155双分荧光质粒 |
| P0721/pBiFC-bFOSDelataZip-VC155双分荧光质粒 |
| P1225/mito-PAGFP线粒体定位质粒 |
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文献和实验诺奖得主 Science 发文：基因编辑诞生 10 年，未来将如何改变世界？
前言 簇状规则间隔短回文重复（CRISPR）基因组编辑的出现，以及计算和成像能力的进步，使得编辑细胞和生物体中的 DNA 片段或特定的碱基对成为可能。从遗传病到农业实践和产品，CRISPR 工具箱及其应用深刻地影响了生物学研究。 通过 CRISPR-Cas9，我们不仅可以诊断人类疾病，甚至可以根据个人遗传学预测个体易感性，还可以根据这些信息设计治疗策略。同样，我们既可以识别并快速改变负责植物性状的基因，又可以优化农业研究和植物育种。 2012 年 6 月，Jennifer
-guidedengineerednuclease) 核糖核蛋白 (RGENribonucleoproteins，RGENRNPs) 编辑系统。瞬时表达 CRISPR/Cas9 编辑系统的操作流程和原理是:将 CRISPR/Cas9 质粒 DNA(TECCDNA) 或其转录的 RNA(TECCRNA) 通过基因枪法直接转入植物愈伤组织，因是环状质粒或 RNA，故不易被整合进植物基因组中;在完成切割使命后，质粒 DNA 或 RNA 会被细胞内源核酸酶分解，从而实现全程 DNA-free 的基因组编辑。研究人员对该系统在小麦基因组中的定向修饰特性
，从而诱导 CRISPR 结构通过这些空隙进入细胞中。在电脉冲撤离后，细胞恢复原有状态，这种物理学的方式并不影响细胞内部任何代谢及生理变化。BTX 电转和 CRISPR外源物质如何高效的进入目的细胞是进行表达修饰实验（CRISPR、基因编辑、基因工程）成功的关键。BTX 电穿孔系统由于它的易用性、重复性、高效率和低毒性，已经成为将 CRISPR 结构导入细胞（如哺乳动物细胞、细菌、酵母、植物、寄生虫等）的重要手段。使用 BTX 系统可进行多种类型转染；体外培养--贴壁细胞、悬浮细胞及原代细胞·在体·在卵
