pHBT-pcoCas9-FLAG-NLS植物编辑质粒

基本信息
名称：pHBT-pcoCas9-FLAG-NLS植物编辑质粒
别称: Plasmid#52254

原核抗性:	Amp
克隆菌株:	DH5a
培养条件:	37度

质粒属性

载体宿主：	植物
载体用途：	基因敲除
基因种属：
基因类型：
原核抗性：	Amp
筛选标记：
荧光蛋白：

质粒简介
 pHBT-pcoCas9-FLAG-NLS质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供

质粒图谱


质粒序列：详询


质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P3067/NLS-mCherry-NES reporter (pDN160)哺乳荧光质粒

P4930/pTurboRFP-N1哺乳红色荧光质粒

P4936/pTurboRFP-C1哺乳红色荧光质粒

P3017/mApple-N1哺乳荧光质粒

P0145/pEYFP-N1哺乳荧光质粒

P1579/pCDNA3.1 EYFP H148Q-I152L哺乳荧光质粒

P1196/pECMV-3×FLAG-VENUS哺乳荧光质粒

P1402/mAmetrine-N1哺乳荧光质粒

P1871/pZsYellow-N1哺乳荧光质粒

P1872/pmCitrine-C1哺乳荧光质粒

P1912/pmVenus-C1哺乳荧光质粒

P0474/pEBFP-N1哺乳荧光质粒