pSAT6-nEYFP-N1植物双分子荧光质粒

基本信息
名称：pSAT6-nEYFP-N1植物双分子荧光质粒
别称: pSAT6-nEYFP-N1

启动子:	35S
复制子:	pUC
终止子:	35S terminator
质粒分类:	植物系列质粒；植物报告质粒；双分荧光质粒
质粒大小:	4417bp
质粒标签:	C-n(1-174)EYFP
原核抗性:	Amp
筛选标记:	无
克隆菌株:	DH5a
培养条件:	37度
表达宿主:	植物
诱导方式:	无需诱导，组成型表达
5'测序引物:	35S：GACGCACAATCCCACTATCC
3'测序引物:	35S-ter：CTCAACACATGAGCGAAACCC

质粒属性

载体宿主：	植物
载体用途：	双分子荧光
基因种属：	空载体
基因类型：	BIFC
原核抗性：	Amp
筛选标记：
荧光蛋白：

质粒简介
 pSAT6-nEYFP-N1质粒是一个用于植物双分子荧光实验的载体，2X35S promoter + TL enhancer驱动EYFP的表达。

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                4417 bp ds-DNA     circular SYN 25-AUG-2017
DEFINITION  synthetic circular DNA
KEYWORDS    pSAT6-nEYFP-N1
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 4417)
  AUTHORS   NCBI Entrez
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Exported Aug 25, 2017 from MiaoLingPlasmid
            http://www.miaolingbio.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..4417
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     misc_feature    complement(149..398)
                     /label=ALPHA
                     /note="/vntifkey=21"
     misc_feature    complement(399..428)
                     /label=PI-PspI
                     /note="/vntifkey=21"
     misc_feature    429..1320
                     /label=2X35S promoter + TL enhancer
                     /label=2X35S\promoter\+\TL\enhancer
                     /label=nonstandard type: misc_marker
                     /note="/vntifkey=22"
     primer_bind     1110..1129
                     /label=35S
     misc_feature    1323..1394
                     /label=MCS
                     /note="/vntifkey=21"
     misc_feature    1395..1919
                     /label=n(1-174)EYFP
                     /note="/vntifkey=21"
     misc_feature    1938..2156
                     /label=35S terminator
                     /label=35S\terminator
                     /note="/vntifkey=21"
     primer_bind     complement(2041..2061)
                     /label=35S-ter
     misc_feature    2157..2186
                     /label=PI-PspI
                     /note="/vntifkey=21"
     misc_feature    complement(2598..3186)
                     /label=pUC ori
     misc_feature    complement(3360..4217)
                     /label=Amp
                     /label=AMP\(R)
                     /note="/vntifkey=21"
ORIGIN
        1 tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca
       61 cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg
      121 ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc
      181 accatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcaggcgcc
      241 attcgccatt caggctgcgc aactgttggg aagggcgatc ggtgcgggcc tcttcgctat
      301 tacgccagct ggcgaaaggg ggatgtgctg caaggcgatt aagttgggta acgccagggt
      361 tttcccagtc acgacgttgt aaaacgacgg ccagtgccac ccataatacc cataatagct
      421 gtttgccaac cggtcaacat gtggagcacg acacacttgt ctactccaaa aatatcaaag
      481 atacagtctc agaagaccaa agggcaattg agacttttca acaaagggta atatccggaa
      541 acctcctcgg attccattgc ccagctatct gtcactttat tgtgaagata gtggaaaagg
      601 aaggtggctc ctacaaatgc catcattgcg ataaaggaaa ggccatcgtt gaagatgcct
      661 ctgccgacag tggtcccaaa gatggacccc cacccacgag gagcatcgtg gaaaaagaag
      721 acgttccaac cacgtcttca aagcaagtgg attgatgtga taacatggtg gagcacgaca
      781 cacttgtcta ctccaaaaat atcaaagata cagtctcaga agaccaaagg gcaattgaga
      841 cttttcaaca aagggtaata tccggaaacc tcctcggatt ccattgccca gctatctgtc
      901 actttattgt gaagatagtg gaaaaggaag gtggctccta caaatgccat cattgcgata
      961 aaggaaaggc catcgttgaa gatgcctctg ccgacagtgg tcccaaagat ggacccccac
     1021 ccacgaggag catcgtggaa aaagaagacg ttccaaccac gtcttcaaag caagtggatt
     1081 gatgtgatat ctccactgac gtaagggatg acgcacaatc ccactatcct tcgcaagacc
     1141 cttcctctat ataaggaagt tcatttcatt tggagaggac gtcgagagtt ctcaacacaa
     1201 catatacaaa acaaacgaat ctcaagcaat caagcattct acttctattg cagcaattta
     1261 aatcatttct tttaaagcaa aagcaatttt ctgaaaattt tcaccattta cgaacgatag
     1321 ccatggtccg gactcagatc tcgagctcaa gcttcgaatt ctgcagtcga cggtaccgcg
     1381 ggcccgggat cctgatggtg agcaagggcg aggagctgtt caccggggtg gtgcccatcc
     1441 tggtcgagct ggacggcgac gtaaacggcc acaagttcag cgtgtccggc gagggcgagg
     1501 gcgatgccac ctacggcaag ctgaccctga agttcatctg caccaccggc aagctgcccg
     1561 tgccctggcc caccctcgtg accaccttcg gctacggcct gcagtgcttc gcccgctacc
     1621 ccgaccacat gaagcagcac gacttcttca agtccgccat gcccgaaggc tacgtccagg
     1681 agcgcaccat cttcttcaag gacgacggca actacaagac ccgcgccgag gtgaagttcg
     1741 agggcgacac cctggtgaac cgcatcgagc tgaagggcat cgacttcaag gaggacggca
     1801 acatcctggg gcacaagctg gagtacaact acaacagcca caacgtctat atcatggccg
     1861 acaagcagaa gaacggcatc aaggtgaact tcaagatccg ccacaacatc gaggactgaa
     1921 gatccaccta gtctagagtc cgcaaaaatc accagtctct ctctacaaat ctatctctct
     1981 ctatttttct ccagaataat gtgtgagtag ttcccagata agggaattag ggttcttata
     2041 gggtttcgct catgtgttga gcatataaga aacccttagt atgtatttgt atttgtaaaa
     2101 tacttctatc aataaaattt ctaattccta aaaccaaaat ccagtgacgc ggccgcaccc
     2161 ataataccca taatagctgt ttgccagtaa tcatggtcat agctgtttcc tgtgtgaaat
     2221 tgttatccgc tcacaattcc acacaacata cgagccggaa gcataaagtg taaagcctgg
     2281 ggtgcctaat gagtgagcta actcacatta attgcgttgc gctcactgcc cgctttccag
     2341 tcgggaaacc tgtcgtgcca gctgcattaa tgaatcggcc aacgcgcggg gagaggcggt
     2401 ttgcgtattg ggcgctcttc cgcttcctcg ctcactgact cgctgcgctc ggtcgttcgg
     2461 ctgcggcgag cggtatcagc tcactcaaag gcggtaatac ggttatccac agaatcaggg
     2521 gataacgcag gaaagaacat gtgagcaaaa ggccagcaaa aggccaggaa ccgtaaaaag
     2581 gccgcgttgc tggcgttttt ccataggctc cgcccccctg acgagcatca caaaaatcga
     2641 cgctcaagtc agaggtggcg aaacccgaca ggactataaa gataccaggc gtttccccct
     2701 ggaagctccc tcgtgcgctc tcctgttccg accctgccgc ttaccggata cctgtccgcc
     2761 tttctccctt cgggaagcgt ggcgctttct caatgctcac gctgtaggta tctcagttcg
     2821 gtgtaggtcg ttcgctccaa gctgggctgt gtgcacgaac cccccgttca gcccgaccgc
     2881 tgcgccttat ccggtaacta tcgtcttgag tccaacccgg taagacacga cttatcgcca
     2941 ctggcagcag ccactggtaa caggattagc agagcgaggt atgtaggcgg tgctacagag
     3001 ttcttgaagt ggtggcctaa ctacggctac actagaagga cagtatttgg tatctgcgct
     3061 ctgctgaagc cagttacctt cggaaaaaga gttggtagct cttgatccgg caaacaaacc
     3121 accgctggta gcggtggttt ttttgtttgc aagcagcaga ttacgcgcag aaaaaaagga
     3181 tctcaagaag atcctttgat cttttctacg gggtctgacg ctcagtggaa cgaaaactca
     3241 cgttaaggga ttttggtcat gagattatca aaaaggatct tcacctagat ccttttaaat
     3301 taaaaatgaa gttttaaatc aatctaaagt atatatgagt aaacttggtc tgacagttac
     3361 caatgcttaa tcagtgaggc acctatctca gcgatctgtc tatttcgttc atccatagtt
     3421 gcctgactcc ccgtcgtgta gataactacg atacgggagg gcttaccatc tggccccagt
     3481 gctgcaatga taccgcgaga cccacgctca ccggctccag atttatcagc aataaaccag
     3541 ccagccggaa gggccgagcg cagaagtggt cctgcaactt tatccgcctc catccagtct
     3601 attaattgtt gccgggaagc tagagtaagt agttcgccag ttaatagttt gcgcaacgtt
     3661 gttgccattg ctacaggcat cgtggtgtca cgctcgtcgt ttggtatggc ttcattcagc
     3721 tccggttccc aacgatcaag gcgagttaca tgatccccca tgttgtgcaa aaaagcggtt
     3781 agctccttcg gtcctccgat cgttgtcaga agtaagttgg ccgcagtgtt atcactcatg
     3841 gttatggcag cactgcataa ttctcttact gtcatgccat ccgtaagatg cttttctgtg
     3901 actggtgagt actcaaccaa gtcattctga gaatagtgta tgcggcgacc gagttgctct
     3961 tgcccggcgt caatacggga taataccgcg ccacatagca gaactttaaa agtgctcatc
     4021 attggaaaac gttcttcggg gcgaaaactc tcaaggatct taccgctgtt gagatccagt
     4081 tcgatgtaac ccactcgtgc acccaactga tcttcagcat cttttacttt caccagcgtt
     4141 tctgggtgag caaaaacagg aaggcaaaat gccgcaaaaa agggaataag ggcgacacgg
     4201 aaatgttgaa tactcatact cttccttttt caatattatt gaagcattta tcagggttat
     4261 tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa ataaacaaat aggggttccg
     4321 cgcacatttc cccgaaaagt gccacctgac gtctaagaaa ccattattat catgacatta
     4381 acctataaaa ataggcgtat cacgaggccc tttcgtc
//
 

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P0167/pFLAG-CMV-2哺乳表达质粒

P0819/pFLAG-CMV-4哺乳表达质粒

P0842/pFLAG-CMV-5.1哺乳表达质粒

P1782/pFLAG-CMV-6a哺乳表达质粒

P0438/p3×FLAG-CMV-7.1哺乳表达质粒

P0186/p3×FLAG-CMV-10哺乳表达质粒

P0427/p3×FLAG-CMV-14哺乳表达质粒

P0674/p3×FLAG-CMV-13哺乳表达质粒

P0795/pCMV-3×FLAG-MCS-Myc哺乳表达质粒

P0944/pCMV-3×FLAG-MCS-IRES-puro哺乳表达质粒