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- 2025年08月22日
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- 技术资料
- 保存条件：
零下80℃
- 保质期：
一年
- 库存：
1000
- 供应商：
智立中特(武汉)生物科技有限公司
保存类型：甘油管，-80℃
运输方式：冰袋泡沫盒快递
质粒菌株产品操作说明书
扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必先转化提质粒后使用）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μlddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另外不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，保质期90天，请务必先转化提质粒后使用）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
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文献和实验胞菌 ATCC27853 用于铜绿假单胞菌和不动杆菌K-B法药敏;铜绿假单胞菌和其他非肠杆菌科稀释法药敏质控；测试M-H平板中二价阳离子对氨基糖甙类和四环素针对铜绿假单胞的抑菌效果 大肠艾希
，采集标本时要求患者漱口后用力自肺部咳出晨痰，1小时内送检。 质控菌株：大肠埃希菌ATCC25922、金黄色葡萄球菌ATCC25923、铜绿假单胞菌ATCC27853。 涂片检查：对痰标本进行涂片检查，低倍镜下白细胞数25个者重留痰标本，直至合格后方做痰培养。 细菌鉴定：针对涂片染色时所见细菌形态和染色特点选择不同的培养基，将纯培养后的细菌按《全国临床检验操作规程》第3版的要求进行鉴定。
梅里埃全自动微生物鉴定仪VITEK 2鉴定，菌株以250mL/L的甘油肉汤-20℃保存备用。质控菌株：大肠埃希菌ATCC25922和铜绿假单胞菌ATCC27853购自卫生部临床检验中心；金属酶阳性质控菌株为产IMP-1型金属酶的铜绿假单胞菌。 1.1.2 药敏纸片 所有药敏纸片均为英国OXID产品。包括：阿米卡星(Amikacin，30μg)、头孢噻肟(Cefotaxime，30μg)、头孢他啶(Ceftazidime
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