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无锡云萃生物
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| 规格: | 5mg | 产品价格: | ¥100.0 |
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云萃
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文献和实验免疫印迹(Western blot)简介和原理 免疫印迹用于鉴定能够与特异性抗体相互作用的大分子抗原(一般为蛋白质)并测定抗原的大小。蛋白质首先通过 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,再通过电泳转移到固相支持物上,固相支持物包括硝酸纤维素膜,聚偏乙烯二氟(PVDF)膜和阳离子尼龙膜等。首先把膜上未反应的位点封闭起来以抑制抗体的非特异性吸附,这样固定的蛋白即可与特异性的多克隆或单克隆抗体相互作用。最后通过放射,生色或化学发光的方法进行定位。 实验常规试剂 1.0 mol/L Tris•HCl
蛋白质印迹分析(Western Blot Analysis)
分离;通过电流将凝胶中的蛋白质转移到聚偏二氟乙烯膜上;利用抗体(一抗)与抗原发生特异性结合的原理,以抗体作为探针钓取目的蛋白。值得注意的是在加入一抗前应首先加入非特异性蛋白,如牛血清白蛋白对膜进行“封阻”而防止抗体与膜的非特异性结合。 经电泳分离后的蛋白往往需再利用电泳方法将蛋白质转移到固相载体上,我们把这个过程称为电泳印迹。常用的两种电转移方法分别为: 1.半干法: 凝胶和固相载体被夹在用缓冲溶液浸湿的滤纸之间,通电时间为10分钟~30分钟。 2.湿法:凝胶和固相载体夹心浸放在转移
管柱,把毛细管柱两端封住,然后加热一段时间,2-氯-1,1,2-三氟乙基甲基醚或二氟化铵放出氟化氢,使玻璃表面产生高密度须状物。晶须的粗细及长度取决于试剂的浓度、温度和反应时间。刻蚀温度低于 250℃ 不会形成晶须。刻蚀温度在 400℃,试剂浓度在 2%~10%,24 h 后晶须生成完全。 二、表面沉积惰性微粒物质法: 1、石墨化碳黑沉积法: 把石墨化碳黑制成胶体溶液涂渍在毛细管中,石墨化碳黑就牢固地粘附在毛细管内壁上,各种溶剂都冲洗不掉。 可适应各种类型的固定液,但是不能涂渍厚
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