pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP慢病毒表达质粒

基本信息
名称：pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP慢病毒表达质粒
别称: pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP

启动子:	CMV
复制子:	pUC
终止子:	SV40 poly(A) signal
质粒分类:	病毒系列，慢病毒克隆载体
原核抗性:	Amp
克隆菌株:	Stbl3
培养条件:	37度
表达宿主:	哺乳细胞
诱导方式:	无须诱导
5'测序引物:	CMV-F：CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG
3'测序引物:	根据序列设计引物

质粒属性

载体宿主：	哺乳细胞,慢病毒
载体用途：	蛋白表达
基因种属：	空载体
基因类型：	ORF
原核抗性：	Amp
筛选标记：
荧光蛋白：	绿色

质粒简介
    pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP是一个慢病毒表达质粒。The puromycin-resistance gene (puro) was cloned into pCDH-EF1-MCS-T2A-copGFP (A) and pCDH-MCS-T2A-copGFP-MSCV (B); and the copGFP gene (cG) was cloned into pCDH-EF1-MCS-T2A-Puro (C) and pCDH-MCS-T2A-Puro-MSCV (D). The resulting dual reporter constructs were packaged into pseudoviral particles followed by transduction into HT1080 cells. All constructs were also puromycin resistant (data not shown)。

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                7546 bp ds-DNA     circular SYN 20-SEP-2018
DEFINITION  synthetic circular DNA
KEYWORDS    pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 7546)
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..7546
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     LTR             234..414
                     /note="5' LTR (truncated)"
                     /note="truncated 5' long terminal repeat (LTR) from HIV-1"
     misc_feature    458..583
                     /note="HIV-1 Psi"
                     /note="packaging signal of human immunodeficiency virus 
                     type 1"
     misc_feature    1076..1309
                     /note="RRE"
                     /note="The Rev response element (RRE) of HIV-1 allows for 
                     Rev-dependent mRNA export from the nucleus to the 
                     cytoplasm."
     misc_feature    1798..1915
                     /note="cPPT/CTS"
                     /note="central polypurine tract and central termination 
                     sequence of HIV-1"
     promoter        2005..2208
                     /note="CMV promoter"
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                     promoter"
     promoter        2349..2560
                     /note="EF-1-alpha core promoter"
                     /note="core promoter for human elongation factor 
                     EF-1-alpha"
     LTR             2573..2841
                     /note="5' LTR (truncated)"
                     /note="truncated 5' long terminal repeat (LTR) from human 
                     T-cell leukemia virus (HTLV) type 1"
     regulatory      2870..2879
                     /regulatory_class="other"
                     /note="Kozak sequence"
                     /note="vertebrate consensus sequence for strong initiation 
                     of translation (Kozak, 1987)"
     CDS             2900..3562
                     /codon_start=1
                     /product="green fluorescent protein 2 from Pontellina 
                     plumata, also known as ppluGFP2 (Shagin et al., 2004)"
                     /note="CopGFP"
                     /translation="PAMEIECRITGTLNGVEFELVGGGEGTPKQGRMTNKMKSTKGALT
                     FSPYLLSHVMGYGFYHFGTYPSGYENPFLHAINNGGYTNTRIEKYEDGGVLHVSFSYRY
                     EAGRVIGDFKVVGTGFPEDSVIFTDKIIRSNATVEHLHPMGDNVLVGSFARTFSLRDGG
                     YYSFVVDSHMHFKSAIHPSILQNGGPMFAFRRVEELHSNTELGIVEYQHAFKTPIAFA"
     misc_feature    3641..4229
                     /note="WPRE"
                     /note="woodchuck hepatitis virus posttranscriptional 
                     regulatory element"
     LTR             4303..4536
                     /note="3' LTR (Delta-U3)"
                     /note="self-inactivating 3' long terminal repeat (LTR) from
                     HIV-1"
     polyA_signal    4608..4729
                     /note="SV40 poly(A) signal"
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     rep_origin      4748..4883
                     /note="SV40 ori"
                     /note="SV40 origin of replication"
     rep_origin      complement(5323..5911)
                     /direction=LEFT
                     /note="ori"
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(6082..6942)
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /note="AmpR"
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     promoter        complement(6943..7047)
                     /gene="bla"
                     /note="AmpR promoter"
ORIGIN
        1 acgcgtgtag tcttatgcaa tactcttgta gtcttgcaac atggtaacga tgagttagca
       61 acatgcctta caaggagaga aaaagcaccg tgcatgccga ttggtggaag taaggtggta
      121 cgatcgtgcc ttattaggaa ggcaacagac gggtctgaca tggattggac gaaccactga
      181 attgccgcat tgcagagata ttgtatttaa gtgcctagct cgatacaata aacgggtctc
      241 tctggttaga ccagatctga gcctgggagc tctctggcta actagggaac ccactgctta
      301 agcctcaata aagcttgcct tgagtgcttc aagtagtgtg tgcccgtctg ttgtgtgact
      361 ctggtaacta gagatccctc agaccctttt agtcagtgtg gaaaatctct agcagtggcg
      421 cccgaacagg gacctgaaag cgaaagggaa accagagctc tctcgacgca ggactcggct
      481 tgctgaagcg cgcacggcaa gaggcgaggg gcggcgactg gtgagtacgc caaaaatttt
      541 gactagcgga ggctagaagg agagagatgg gtgcgagagc gtcagtatta agcgggggag
      601 aattagatcg cgatgggaaa aaattcggtt aaggccaggg ggaaagaaaa aatataaatt
      661 aaaacatata gtatgggcaa gcagggagct agaacgattc gcagttaatc ctggcctgtt
      721 agaaacatca gaaggctgta gacaaatact gggacagcta caaccatccc ttcagacagg
      781 atcagaagaa cttagatcat tatataatac agtagcaacc ctctattgtg tgcatcaaag
      841 gatagagata aaagacacca aggaagcttt agacaagata gaggaagagc aaaacaaaag
      901 taagaccacc gcacagcaag cggccactga tcttcagacc tggaggagga gatatgaggg
      961 acaattggag aagtgaatta tataaatata aagtagtaaa aattgaacca ttaggagtag
     1021 cacccaccaa ggcaaagaga agagtggtgc agagagaaaa aagagcagtg ggaataggag
     1081 ctttgttcct tgggttcttg ggagcagcag gaagcactat gggcgcagcc tcaatgacgc
     1141 tgacggtaca ggccagacaa ttattgtctg gtatagtgca gcagcagaac aatttgctga
     1201 gggctattga ggcgcaacag catctgttgc aactcacagt ctggggcatc aagcagctcc
     1261 aggcaagaat cctggctgtg gaaagatacc taaaggatca acagctcctg gggatttggg
     1321 gttgctctgg aaaactcatt tgcaccactg ctgtgccttg gaatgctagt tggagtaata
     1381 aatctctgga acagattgga atcacacgac ctggatggag tgggacagag aaattaacaa
     1441 ttacacaagc ttaatacact ccttaattga agaatcgcaa aaccagcaag aaaagaatga
     1501 acaagaatta ttggaattag ataaatgggc aagtttgtgg aattggttta acataacaaa
     1561 ttggctgtgg tatataaaat tattcataat gatagtagga ggcttggtag gtttaagaat
     1621 agtttttgct gtactttcta tagtgaatag agttaggcag ggatattcac cattatcgtt
     1681 tcagacccac ctcccaaccc cgaggggacc cgacaggccc gaaggaatag aagaagaagg
     1741 tggagagaga gacagagaca gatccattcg attagtgaac ggatctcgac ggttaacttt
     1801 taaaagaaaa ggggggattg gggggtacag tgcaggggaa agaatagtag acataatagc
     1861 aacagacata caaactaaag aattacaaaa acaaattaca aaaattcaaa attttatcga
     1921 tactagtatt atgcccagta catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac
     1981 gtattagtca tcgctattac catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga
     2041 tagcggtttg actcacgggg atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg
     2101 ttttggcacc aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg
     2161 caaatgggcg gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa gcagagctcg tttagtgaac
     2221 cgtcagatcg cctggagacg ccatccacgc tgttttgacc tccatagaag attctagagc
     2281 tagcgaattc gaatttaaat cggatccgcg gccgcgaagg atctgcgatc gctccggtgc
     2341 ccgtcagtgg gcagagcgca catcgcccac agtccccgag aagttggggg gaggggtcgg
     2401 caattgaacg ggtgcctaga gaaggtggcg cggggtaaac tgggaaagtg atgtcgtgta
     2461 ctggctccgc ctttttcccg agggtggggg agaaccgtat ataagtgcag tagtcgccgt
     2521 gaacgttctt tttcgcaacg ggtttgccgc cagaacacag ctgaagcttc gaggggctcg
     2581 catctctcct tcacgcgccc gccgccctac ctgaggccgc catccacgcc ggttgagtcg
     2641 cgttctgccg cctcccgcct gtggtgcctc ctgaactgcg tccgccgtct aggtaagttt
     2701 aaagctcagg tcgagaccgg gcctttgtcc ggcgctccct tggagcctac ctagactcag
     2761 ccggctctcc acgctttgcc tgaccctgct tgctcaactc tacgtctttg tttcgttttc
     2821 tgttctgcgc cgttacagat ccaagctgtg accggcgcct acgctagacg ccaccatgga
     2881 gagcgacgag agcggcctgc ccgccatgga gatcgagtgc cgcatcaccg gcaccctgaa
     2941 cggcgtggag ttcgagctgg tgggcggcgg agagggcacc cccaagcagg gccgcatgac
     3001 caacaagatg aagagcacca aaggcgccct gaccttcagc ccctacctgc tgagccacgt
     3061 gatgggctac ggcttctacc acttcggcac ctaccccagc ggctacgaga accccttcct
     3121 gcacgccatc aacaacggcg gctacaccaa cacccgcatc gagaagtacg aggacggcgg
     3181 cgtgctgcac gtgagcttca gctaccgcta cgaggccggc cgcgtgatcg gcgacttcaa
     3241 ggtggtgggc accggcttcc ccgaggacag cgtgatcttc accgacaaga tcatccgcag
     3301 caacgccacc gtggagcacc tgcaccccat gggcgataac gtgctggtgg gcagcttcgc
     3361 ccgcaccttc agcctgcgcg acggcggcta ctacagcttc gtggtggaca gccacatgca
     3421 cttcaagagc gccatccacc ccagcatcct gcagaacggg ggccccatgt tcgccttccg
     3481 ccgcgtggag gagctgcaca gcaacaccga gctgggcatc gtggagtacc agcacgcctt
     3541 caagaccccc atcgccttcg ccagatcccg cgctcagtcg tccaattctg ccgtggacgg
     3601 caccgccgga cccggctcca ccggatctcg ctaagtcgac aatcaacctc tggattacaa
     3661 aatttgtgaa agattgactg gtattcttaa ctatgttgct ccttttacgc tatgtggata
     3721 cgctgcttta atgcctttgt atcatgctat tgcttcccgt atggctttca ttttctcctc
     3781 cttgtataaa tcctggttgc tgtctcttta tgaggagttg tggcccgttg tcaggcaacg
     3841 tggcgtggtg tgcactgtgt ttgctgacgc aacccccact ggttggggca ttgccaccac
     3901 ctgtcagctc ctttccggga ctttcgcttt ccccctccct attgccacgg cggaactcat
     3961 cgccgcctgc cttgcccgct gctggacagg ggctcggctg ttgggcactg acaattccgt
     4021 ggtgttgtcg gggaaatcat cgtcctttcc ttggctgctc gcctgtgttg ccacctggat
     4081 tctgcgcggg acgtccttct gctacgtccc ttcggccctc aatccagcgg accttccttc
     4141 ccgcggcctg ctgccggctc tgcggcctct tccgcgtctt cgccttcgcc ctcagacgag
     4201 tcggatctcc ctttgggccg cctccccgcc tggtaccttt aagaccaatg acttacaagg
     4261 cagctgtaga tcttagccac tttttaaaag aaaagggggg actggaaggg ctaattcact
     4321 cccaacgaaa ataagatctg ctttttgctt gtactgggtc tctctggtta gaccagatct
     4381 gagcctggga gctctctggc taactaggga acccactgct taagcctcaa taaagcttgc
     4441 cttgagtgct tcaagtagtg tgtgcccgtc tgttgtgtga ctctggtaac tagagatccc
     4501 tcagaccctt ttagtcagtg tggaaaatct ctagcagtag tagttcatgt catcttatta
     4561 ttcagtattt ataacttgca aagaaatgaa tatcagagag tgagaggaac ttgtttattg
     4621 cagcttataa tggttacaaa taaagcaata gcatcacaaa tttcacaaat aaagcatttt
     4681 tttcactgca ttctagttgt ggtttgtcca aactcatcaa tgtatcttat catgtctggc
     4741 tctagctatc ccgcccctaa ctccgcccag ttccgcccat tctccgcccc atggctgact
     4801 aatttttttt atttatgcag aggccgaggc cgcctcggcc tctgagctat tccagaagta
     4861 gtgaggaggc ttttttggag gcctagactt ttgcagagac ggcccaaatt cgtaatcatg
     4921 gtcatagctg tttcctgtgt gaaattgtta tccgctcaca attccacaca acatacgagc
     4981 cggaagcata aagtgtaaag cctggggtgc ctaatgagtg agctaactca cattaattgc
     5041 gttgcgctca ctgcccgctt tccagtcggg aaacctgtcg tgccagctgc attaatgaat
     5101 cggccaacgc gcggggagag gcggtttgcg tattgggcgc tcttccgctt cctcgctcac
     5161 tgactcgctg cgctcggtcg ttcggctgcg gcgagcggta tcagctcact caaaggcggt
     5221 aatacggtta tccacagaat caggggataa cgcaggaaag aacatgtgag caaaaggcca
     5281 gcaaaaggcc aggaaccgta aaaaggccgc gttgctggcg tttttccata ggctccgccc
     5341 ccctgacgag catcacaaaa atcgacgctc aagtcagagg tggcgaaacc cgacaggact
     5401 ataaagatac caggcgtttc cccctggaag ctccctcgtg cgctctcctg ttccgaccct
     5461 gccgcttacc ggatacctgt ccgcctttct cccttcggga agcgtggcgc tttctcatag
     5521 ctcacgctgt aggtatctca gttcggtgta ggtcgttcgc tccaagctgg gctgtgtgca
     5581 cgaacccccc gttcagcccg accgctgcgc cttatccggt aactatcgtc ttgagtccaa
     5641 cccggtaaga cacgacttat cgccactggc agcagccact ggtaacagga ttagcagagc
     5701 gaggtatgta ggcggtgcta cagagttctt gaagtggtgg cctaactacg gctacactag
     5761 aaggacagta tttggtatct gcgctctgct gaagccagtt accttcggaa aaagagttgg
     5821 tagctcttga tccggcaaac aaaccaccgc tggtagcggt ggtttttttg tttgcaagca
     5881 gcagattacg cgcagaaaaa aaggatctca agaagatcct ttgatctttt ctacggggtc
     5941 tgacgctcag tggaacgaaa actcacgtta agggattttg gtcatgagat tatcaaaaag
     6001 gatcttcacc tagatccttt taaattaaaa atgaagtttt aaatcaatct aaagtatata
     6061 tgagtaaact tggtctgaca gttaccaatg cttaatcagt gaggcaccta tctcagcgat
     6121 ctgtctattt cgttcatcca tagttgcctg actccccgtc gtgtagataa ctacgatacg
     6181 ggagggctta ccatctggcc ccagtgctgc aatgataccg cgagacccac gctcaccggc
     6241 tccagattta tcagcaataa accagccagc cggaagggcc gagcgcagaa gtggtcctgc
     6301 aactttatcc gcctccatcc agtctattaa ttgttgccgg gaagctagag taagtagttc
     6361 gccagttaat agtttgcgca acgttgttgc cattgctaca ggcatcgtgg tgtcacgctc
     6421 gtcgtttggt atggcttcat tcagctccgg ttcccaacga tcaaggcgag ttacatgatc
     6481 ccccatgttg tgcaaaaaag cggttagctc cttcggtcct ccgatcgttg tcagaagtaa
     6541 gttggccgca gtgttatcac tcatggttat ggcagcactg cataattctc ttactgtcat
     6601 gccatccgta agatgctttt ctgtgactgg tgagtactca accaagtcat tctgagaata
     6661 gtgtatgcgg cgaccgagtt gctcttgccc ggcgtcaata cgggataata ccgcgccaca
     6721 tagcagaact ttaaaagtgc tcatcattgg aaaacgttct tcggggcgaa aactctcaag
     6781 gatcttaccg ctgttgagat ccagttcgat gtaacccact cgtgcaccca actgatcttc
     6841 agcatctttt actttcacca gcgtttctgg gtgagcaaaa acaggaaggc aaaatgccgc
     6901 aaaaaaggga ataagggcga cacggaaatg ttgaatactc atactcttcc tttttcaata
     6961 ttattgaagc atttatcagg gttattgtct catgagcgga tacatatttg aatgtattta
     7021 gaaaaataaa caaatagggg ttccgcgcac atttccccga aaagtgccac ctgacgtcta
     7081 agaaaccatt attatcatga cattaaccta taaaaatagg cgtatcacga ggccctttcg
     7141 tctcgcgcgt ttcggtgatg acggtgaaaa cctctgacac atgcagctcc cggagacggt
     7201 cacagcttgt ctgtaagcgg atgccgggag cagacaagcc cgtcagggcg cgtcagcggg
     7261 tgttggcggg tgtcggggct ggcttaacta tgcggcatca gagcagattg tactgagagt
     7321 gcaccatatg cggtgtgaaa taccgcacag atgcgtaagg agaaaatacc gcatcaggcg
     7381 ccattcgcca ttcaggctgc gcaactgttg ggaagggcga tcggtgcggg cctcttcgct
     7441 attacgccag ctggcgaaag ggggatgtgc tgcaaggcga ttaagttggg taacgccagg
     7501 gttttcccag tcacgacgtt gtaaaacgac ggccagtgcc aagctg
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P3775/pECMV-3×FLAG-SRP54（1同义突变）人源基因质粒

P3776/pECMV-3×FLAG-OAT（1同义突变）人源基因质粒

P3777/pECMV-3×FLAG-VGLL1人源基因质粒

P3778/pECMV-3×FLAG-ARF4人源基因质粒

P3779/pECMV-3×FLAG-MMADHC(1同义突变）人源基因质粒

P3780/pECMV-3×FLAG-RPL10人源基因质粒

P3781/pECMV-3×FLAG-SLC12A9(1同义突变）人源基因质粒

P3782/pECMV-3×FLAG-GPC-PD1人源基因质粒

P3783/pECMV-3×FLAG-ZNF559人源基因质粒

P3784/pECMV-3×FLAG-KIAA0391（1同义突变）人源基因质粒

P3785/pECMV-3×FLAG-S100A14人源基因质粒