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- 上海
- P0267
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pLVX-TRE3G
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pLVX-TRE3G慢病毒表达质粒
别称: pLVX-TRE3G
质粒属性
质粒简介
When used with any Lenti-X Tet-On 3G or Tet-Express inducible expression system, the pLVX-TRE3G Vector Set allows for lentiviral delivery and inducible expression of your gene of interest in a wide variety of mammalian cells. Target cells that contain a gene of interest under the control of a PTRE3GV promoter will express high levels of your gene of interest, when cultured in the presence of doxycycline (when used with the pLVX-Tet3G Vector and a Tet-On 3G system) or in the presence of the Tet-Express tetracycline transactivator (when used with Tet-Express Systems).
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7819 bp ds-DNA circular SYN 29-JAN-2014
DEFINITION Lentiviral vector for doxycycline-inducible expression of a gene in
cells containing the Tet-On 3G transactivator protein.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pLVX-TRE3G
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 7819)
AUTHORS Clontech
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Thursday, September 8, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7819
/organism="synthetic DNA construct"
/lab_host="Mammalian Cells"
/mol_type="other DNA"
LTR 1..634
/note="5' LTR"
/note="5' long terminal repeat (LTR) from HIV-1"
misc_feature 681..806
/note="HIV-1 psi"
/note="packaging signal of human immunodeficiency virus
type 1"
misc_feature 1303..1536
/note="RRE"
/note="The Rev response element (RRE) of HIV-1 allows for
Rev-dependent mRNA export from the nucleus to the
cytoplasm."
misc_feature 2028..2144
/note="cPPT/CTS"
/note="central polypurine tract and central termination
sequence of HIV-1 (lacking the first T)"
promoter 2209..2555
/note="TRE3GV promoter"
/note="3rd-generation Tet-responsive promoter that can be
activated by binding of Tet-On 3G; optimized for retroviral
and lentiviral vectors"
protein_bind 2214..2232
/gene="tetO"
/bound_moiety="tetracycline repressor TetR"
/note="tet operator"
/note="bacterial operator O2 for the tetR and tetA genes"
protein_bind 2250..2268
/gene="tetO"
/bound_moiety="tetracycline repressor TetR"
/note="tet operator"
/note="bacterial operator O2 for the tetR and tetA genes"
protein_bind 2286..2304
/gene="tetO"
/bound_moiety="tetracycline repressor TetR"
/note="tet operator"
/note="bacterial operator O2 for the tetR and tetA genes"
protein_bind 2322..2340
/gene="tetO"
/bound_moiety="tetracycline repressor TetR"
/note="tet operator"
/note="bacterial operator O2 for the tetR and tetA genes"
protein_bind 2358..2376
/gene="tetO"
/bound_moiety="tetracycline repressor TetR"
/note="tet operator"
/note="bacterial operator O2 for the tetR and tetA genes"
protein_bind 2394..2412
/gene="tetO"
/bound_moiety="tetracycline repressor TetR"
/note="tet operator"
/note="bacterial operator O2 for the tetR and tetA genes"
protein_bind 2430..2448
/gene="tetO"
/bound_moiety="tetracycline repressor TetR"
/note="tet operator"
/note="bacterial operator O2 for the tetR and tetA genes"
misc_feature 2556..2599
/note="MCS"
/note="multiple cloning site"
promoter 2604..3103
/note="PGK promoter"
/note="mouse phosphoglycerate kinase 1 promoter"
CDS 3124..3723
/codon_start=1
/gene="pac from Streptomyces alboniger"
/product="puromycin N-acetyltransferase"
/note="PuroR"
/note="confers resistance to puromycin"
/translation="MTEYKPTVRLATRDDVPRAVRTLAAAFADYPATRHTVDPDRHIER
VTELQELFLTRVGLDIGKVWVADDGAAVAVWTTPESVEAGAVFAEIGPRMAELSGSRLA
AQQQMEGLLAPHRPKEPAWFLATVGVSPDHQGKGLGSAVVLPGVEAAERAGVPAFLETS
APRNLPFYERLGFTVTADVEVPEGPRTWCMTRKPGA"
misc_feature 3741..4329
/note="WPRE"
/note="woodchuck hepatitis virus posttranscriptional
regulatory element"
LTR 4537..5170
/note="3' LTR"
/note="3' long terminal repeat (LTR) from HIV-1"
rep_origin complement(5701..6286)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(6457..7317)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(7318..7422)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
polyA_signal 7470..7604
/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
ORIGIN
1 tggaagggct aattcactcc caaagaagac aagatatcct tgatctgtgg atctaccaca
61 cacaaggcta cttccctgat tagcagaact acacaccagg gccaggggtc agatatccac
121 tgacctttgg atggtgctac aagctagtac cagttgagcc agataaggta gaagaggcca
181 ataaaggaga gaacaccagc ttgttacacc ctgtgagcct gcatgggatg gatgacccgg
241 agagagaagt gttagagtgg aggtttgaca gccgcctagc atttcatcac gtggcccgag
301 agctgcatcc ggagtacttc aagaactgct gatatcgagc ttgctacaag ggactttccg
361 ctggggactt tccagggagg cgtggcctgg gcgggactgg ggagtggcga gccctcagat
421 cctgcatata agcagctgct ttttgcctgt actgggtctc tctggttaga ccagatctga
481 gcctgggagc tctctggcta actagggaac ccactgctta agcctcaata aagcttgcct
541 tgagtgcttc aagtagtgtg tgcccgtctg ttgtgtgact ctggtaacta gagatccctc
601 agaccctttt agtcagtgtg gaaaatctct agcagtggcg cccgaacagg gacttgaaag
661 cgaaagggaa accagaggag ctctctcgac gcaggactcg gcttgctgaa gcgcgcacgg
721 caagaggcga ggggcggcga ctggtgagta cgccaaaaat tttgactagc ggaggctaga
781 aggagagaga tgggtgcgag agcgtcagta ttaagcgggg gagaattaga tcgcgatggg
841 aaaaaattcg gttaaggcca gggggaaaga aaaaatataa attaaaacat atagtatggg
901 caagcaggga gctagaacga ttcgcagtta atcctggcct gttagaaaca tcagaaggct
961 gtagacaaat actgggacag ctacaaccat cccttcagac aggatcagaa gaacttagat
1021 cattatataa tacagtagca accctctatt gtgtgcatca aaggatagag ataaaagaca
1081 ccaaggaagc tttagacaag atagaggaag agcaaaacaa aagtaagacc accgcacagc
1141 aagcggccgg ccgctgatct tcagacctgg aggaggagat atgagggaca attggagaag
1201 tgaattatat aaatataaag tagtaaaaat tgaaccatta ggagtagcac ccaccaaggc
1261 aaagagaaga gtggtgcaga gagaaaaaag agcagtggga ataggagctt tgttccttgg
1321 gttcttggga gcagcaggaa gcactatggg cgcagcgtca atgacgctga cggtacaggc
1381 cagacaatta ttgtctggta tagtgcagca gcagaacaat ttgctgaggg ctattgaggc
1441 gcaacagcat ctgttgcaac tcacagtctg gggcatcaag cagctccagg caagaatcct
1501 ggctgtggaa agatacctaa aggatcaaca gctcctgggg atttggggtt gctctggaaa
1561 actcatttgc accactgctg tgccttggaa tgctagttgg agtaataaat ctctggaaca
1621 gatttggaat cacacgacct ggatggagtg ggacagagaa attaacaatt acacaagctt
1681 aatacactcc ttaattgaag aatcgcaaaa ccagcaagaa aagaatgaac aagaattatt
1741 ggaattagat aaatgggcaa gtttgtggaa ttggtttaac ataacaaatt ggctgtggta
1801 tataaaatta ttcataatga tagtaggagg cttggtaggt ttaagaatag tttttgctgt
1861 actttctata gtgaatagag ttaggcaggg atattcacca ttatcgtttc agacccacct
1921 cccaaccccg aggggacccg acaggcccga aggaatagaa gaagaaggtg gagagagaga
1981 cagagacaga tccattcgat tagtgaacgg atctcgacgg tatcgccttt aaaagaaaag
2041 gggggattgg ggggtacagt gcaggggaaa gaatagtaga cataatagca acagacatac
2101 aaactaaaga actacaaaaa caaattacaa aaattcaaaa ttttcgggtt tattacaggg
2161 acagcagaga tccagtttat cgatgaggcc ctttcgtctt cactcgagtt tactccctat
2221 cagtgataga gaacgtatga agagtttact ccctatcagt gatagagaac gtatgcagac
2281 tttactccct atcagtgata gagaacgtat aaggagttta ctccctatca gtgatagaga
2341 acgtatgacc agtttactcc ctatcagtga tagagaacgt atctacagtt tactccctat
2401 cagtgataga gaacgtatat ccagtttact ccctatcagt gatagagaac gtatgtcgag
2461 gtaggcgtgt acggtgggcg cctataaaag cagagctcgt ttagtgaacc gtcagatcgc
2521 ctggagcaat tccacaacac ttttgtctta tacttggatc cgggcccgcg gccgccccgg
2581 gacgcgtcat atggaattct accgggtagg ggaggcgctt ttcccaaggc agtctggagc
2641 atgcgcttta gcagccccgc tgggcacttg gcgctacaca agtggcctct ggcctcgcac
2701 acattccaca tccaccggta ggcgccaacc ggctccgttc tttggtggcc ccttcgcgcc
2761 accttctact cctcccctag tcaggaagtt cccccccgcc ccgcagctcg cgtcgtgcag
2821 gacgtgacaa atggaagtag cacgtctcac tagtctcgtg cagatggaca gcaccgctga
2881 gcaatggaag cgggtaggcc tttggggcag cggccaatag cagctttgct ccttcgcttt
2941 ctgggctcag aggctgggaa ggggtgggtc cgggggcggg ctcaggggcg ggctcagggg
3001 cggggcgggc gcccgaaggt cctccggagg cccggcattc tgcacgcttc aaaagcgcac
3061 gtctgccgcg ctgttctcct cttcctcatc tccgggcctt tcgacctgca gcccaagctt
3121 accatgaccg agtacaagcc cacggtgcgc ctcgccaccc gcgacgacgt ccccagggcc
3181 gtacgcaccc tcgccgccgc gttcgccgac taccccgcca cgcgccacac cgtcgatccg
3241 gaccgccaca tcgagcgggt caccgagctg caagaactct tcctcacgcg cgtcgggctc
3301 gacatcggca aggtgtgggt cgcggacgac ggcgccgcgg tggcggtctg gaccacgccg
3361 gagagcgtcg aagcgggggc ggtgttcgcc gagatcggcc cgcgcatggc cgagttgagc
3421 ggttcccggc tggccgcgca gcaacagatg gaaggcctcc tggcgccgca ccggcccaag
3481 gagcccgcgt ggttcctggc caccgtcggc gtctcgcccg accaccaggg caagggtctg
3541 ggcagcgccg tcgtgctccc cggagtggag gcggccgagc gcgccggggt gcccgccttc
3601 ctggagacct ccgcgccccg caacctcccc ttctacgagc ggctcggctt caccgtcacc
3661 gccgacgtcg aggtgcccga aggaccgcgc acctggtgca tgacccgcaa gcccggtgcc
3721 tgacggggcg cgtctggaac aatcaacctc tggattacaa aatttgtgaa agattgactg
3781 gtattcttaa ctatgttgct ccttttacgc tatgtggata cgctgcttta atgcctttgt
3841 atcatgctat tgcttcccgt atggctttca ttttctcctc cttgtataaa tcctggttgc
3901 tgtctcttta tgaggagttg tggcccgttg tcaggcaacg tggcgtggtg tgcactgtgt
3961 ttgctgacgc aacccccact ggttggggca ttgccaccac ctgtcagctc ctttccggga
4021 ctttcgcttt ccccctccct attgccacgg cggaactcat cgccgcctgc cttgcccgct
4081 gctggacagg ggctcggctg ttgggcactg acaattccgt ggtgttgtcg gggaagctga
4141 cgtcctttcc atggctgctc gcctgtgttg ccacctggat tctgcgcggg acgtccttct
4201 gctacgtccc ttcggccctc aatccagcgg accttccttc ccgcggcctg ctgccggctc
4261 tgcggcctct tccgcgtctt cgccttcgcc ctcagacgag tcggatctcc ctttgggccg
4321 cctccccgcc tggaattaat tctgcagtcg agacctagaa aaacatggag caatcacaag
4381 tagcaataca gcagctacca atgctgattg tgcctggcta gaagcacaag aggaggagga
4441 ggtgggtttt tccagtcaca cctcaggtac ctttaagacc aatgacttac aaggcagctg
4501 tagatcttag ccacttttta aaagaaaaga ggggactgga agggctaatt cactcccaac
4561 gaagacaaga tatccttgat ctgtggatct accacacaca aggctacttc cctgattagc
4621 agaactacac accagggcca ggggtcagat atccactgac ctttggatgg tgctacaagc
4681 tagtaccagt tgagccagat aaggtagaag aggccaataa aggagagaac accagcttgt
4741 tacaccctgt gagcctgcat gggatggatg acccggagag agaagtgtta gagtggaggt
4801 ttgacagccg cctagcattt catcacgtgg cccgagagct gcatccggag tacttcaaga
4861 actgctgata tcgagcttgc tacaagggac tttccgctgg ggactttcca gggaggcgtg
4921 gcctgggcgg gactggggag tggcgagccc tcagatcctg catataagca gctgcttttt
4981 gcctgtactg ggtctctctg gttagaccag atctgagcct gggagctctc tggctaacta
5041 gggaacccac tgcttaagcc tcaataaagc ttgccttgag tgcttcaagt agtgtgtgcc
5101 cgtctgttgt gtgactctgg taactagaga tccctcagac ccttttagtc agtgtggaaa
5161 atctctagca gtagtagttc atgtcatctt attattcagt atttataact tgcaaagaaa
5221 tgaatatcag agagtgagag gccttgacat tgctagcgtt ttaccgtcga cctctagcta
5281 gagcttggcg taatcatggt catagctgtt tcctgtgtga aattgttatc cgctcacaat
5341 tccacacaac atacgagccg gaagcataaa gtgtaaagcc tggggtgcct aatgagtgag
5401 ctaactcaca ttaattgcgt tgcgctcact gcccgctttc cagtcgggaa acctgtcgtg
5461 ccagctgcat taatgaatcg gccaacgcgc ggggagaggc ggtttgcgta ttgggcgctc
5521 ttccgcttcc tcgctcactg actcgctgcg ctcggtcgtt cggctgcggc gagcggtatc
5581 agctcactca aaggcggtaa tacggttatc cacagaatca ggggataacg caggaaagaa
5641 catgtgagca aaaggccagc aaaaggccag gaaccgtaaa aaggccgcgt tgctggcgtt
5701 tttccatagg ctccgccccc ctgacgagca tcacaaaaat cgacgctcaa gtcagaggtg
5761 gcgaaacccg acaggactat aaagatacca ggcgtttccc cctggaagct ccctcgtgcg
5821 ctctcctgtt ccgaccctgc cgcttaccgg atacctgtcc gcctttctcc cttcgggaag
5881 cgtggcgctt tctcatagct cacgctgtag gtatctcagt tcggtgtagg tcgttcgctc
5941 caagctgggc tgtgtgcacg aaccccccgt tcagcccgac cgctgcgcct tatccggtaa
6001 ctatcgtctt gagtccaacc cggtaagaca cgacttatcg ccactggcag cagccactgg
6061 taacaggatt agcagagcga ggtatgtagg cggtgctaca gagttcttga agtggtggcc
6121 taactacggc tacactagaa gaacagtatt tggtatctgc gctctgctga agccagttac
6181 cttcggaaaa agagttggta gctcttgatc cggcaaacaa accaccgctg gtagcggttt
6241 ttttgtttgc aagcagcaga ttacgcgcag aaaaaaagga tctcaagaag atcctttgat
6301 cttttctacg gggtctgacg ctcagtggaa cgaaaactca cgttaaggga ttttggtcat
6361 gagattatca aaaaggatct tcacctagat ccttttaaat taaaaatgaa gttttaaatc
6421 aatctaaagt atatatgagt aaacttggtc tgacagttac caatgcttaa tcagtgaggc
6481 acctatctca gcgatctgtc tatttcgttc atccatagtt gcctgactcc ccgtcgtgta
6541 gataactacg atacgggagg gcttaccatc tggccccagt gctgcaatga taccgcgaga
6601 cccacgctca ccggctccag atttatcagc aataaaccag ccagccggaa gggccgagcg
6661 cagaagtggt cctgcaactt tatccgcctc catccagtct attaattgtt gccgggaagc
6721 tagagtaagt agttcgccag ttaatagttt gcgcaacgtt gttgccattg ctacaggcat
6781 cgtggtgtca cgctcgtcgt ttggtatggc ttcattcagc tccggttccc aacgatcaag
6841 gcgagttaca tgatccccca tgttgtgcaa aaaagcggtt agctccttcg gtcctccgat
6901 cgttgtcaga agtaagttgg ccgcagtgtt atcactcatg gttatggcag cactgcataa
6961 ttctcttact gtcatgccat ccgtaagatg cttttctgtg actggtgagt actcaaccaa
7021 gtcattctga gaatagtgta tgcggcgacc gagttgctct tgcccggcgt caatacggga
7081 taataccgcg ccacatagca gaactttaaa agtgctcatc attggaaaac gttcttcggg
7141 gcgaaaactc tcaaggatct taccgctgtt gagatccagt tcgatgtaac ccactcgtgc
7201 acccaactga tcttcagcat cttttacttt caccagcgtt tctgggtgag caaaaacagg
7261 aaggcaaaat gccgcaaaaa agggaataag ggcgacacgg aaatgttgaa tactcatact
7321 cttccttttt caatattatt gaagcattta tcagggttat tgtctcatga gcggatacat
7381 atttgaatgt atttagaaaa ataaacaaat aggggttccg cgcacatttc cccgaaaagt
7441 gccacctgac gtcgacggat cgggagatca acttgtttat tgcagcttat aatggttaca
7501 aataaagcaa tagcatcaca aatttcacaa ataaagcatt tttttcactg cattctagtt
7561 gtggtttgtc caaactcatc aatgtatctt atcatgtctg gatcaactgg ataactcaag
7621 ctaaccaaaa tcatcccaaa cttcccaccc cataccctat taccactgcc aattacctag
7681 tggtttcatt tactctaaac ctgtgattcc tctgaattat tttcatttta aagaaattgt
7741 atttgttaaa tatgtactac aaacttagta gtttttaaag aaattgtatt tgttaaatat
7801 gtactacaaa cttagtagt
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pLVX-TRE3G慢病毒表达质粒
别称: pLVX-TRE3G
| 启动子: | TRE3G |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 终止子: | SV40 poly(A) signal |
| 质粒分类: | 病毒系列，慢病毒克隆载体 |
| 质粒大小: | 7819bp |
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | Puro |
| 克隆菌株: | Stbl3 |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 哺乳细胞 |
| 诱导方式: | 四环素诱导 |
| 5'测序引物: | M13R:CAGGAAACAGCTATGACC |
| 3'测序引物: | 根据序列设计引物 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞,慢病毒 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | Puro |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
When used with any Lenti-X Tet-On 3G or Tet-Express inducible expression system, the pLVX-TRE3G Vector Set allows for lentiviral delivery and inducible expression of your gene of interest in a wide variety of mammalian cells. Target cells that contain a gene of interest under the control of a PTRE3GV promoter will express high levels of your gene of interest, when cultured in the presence of doxycycline (when used with the pLVX-Tet3G Vector and a Tet-On 3G system) or in the presence of the Tet-Express tetracycline transactivator (when used with Tet-Express Systems).
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7819 bp ds-DNA circular SYN 29-JAN-2014
DEFINITION Lentiviral vector for doxycycline-inducible expression of a gene in
cells containing the Tet-On 3G transactivator protein.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pLVX-TRE3G
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 7819)
AUTHORS Clontech
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Thursday, September 8, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7819
/organism="synthetic DNA construct"
/lab_host="Mammalian Cells"
/mol_type="other DNA"
LTR 1..634
/note="5' LTR"
/note="5' long terminal repeat (LTR) from HIV-1"
misc_feature 681..806
/note="HIV-1 psi"
/note="packaging signal of human immunodeficiency virus
type 1"
misc_feature 1303..1536
/note="RRE"
/note="The Rev response element (RRE) of HIV-1 allows for
Rev-dependent mRNA export from the nucleus to the
cytoplasm."
misc_feature 2028..2144
/note="cPPT/CTS"
/note="central polypurine tract and central termination
sequence of HIV-1 (lacking the first T)"
promoter 2209..2555
/note="TRE3GV promoter"
/note="3rd-generation Tet-responsive promoter that can be
activated by binding of Tet-On 3G; optimized for retroviral
and lentiviral vectors"
protein_bind 2214..2232
/gene="tetO"
/bound_moiety="tetracycline repressor TetR"
/note="tet operator"
/note="bacterial operator O2 for the tetR and tetA genes"
protein_bind 2250..2268
/gene="tetO"
/bound_moiety="tetracycline repressor TetR"
/note="tet operator"
/note="bacterial operator O2 for the tetR and tetA genes"
protein_bind 2286..2304
/gene="tetO"
/bound_moiety="tetracycline repressor TetR"
/note="tet operator"
/note="bacterial operator O2 for the tetR and tetA genes"
protein_bind 2322..2340
/gene="tetO"
/bound_moiety="tetracycline repressor TetR"
/note="tet operator"
/note="bacterial operator O2 for the tetR and tetA genes"
protein_bind 2358..2376
/gene="tetO"
/bound_moiety="tetracycline repressor TetR"
/note="tet operator"
/note="bacterial operator O2 for the tetR and tetA genes"
protein_bind 2394..2412
/gene="tetO"
/bound_moiety="tetracycline repressor TetR"
/note="tet operator"
/note="bacterial operator O2 for the tetR and tetA genes"
protein_bind 2430..2448
/gene="tetO"
/bound_moiety="tetracycline repressor TetR"
/note="tet operator"
/note="bacterial operator O2 for the tetR and tetA genes"
misc_feature 2556..2599
/note="MCS"
/note="multiple cloning site"
promoter 2604..3103
/note="PGK promoter"
/note="mouse phosphoglycerate kinase 1 promoter"
CDS 3124..3723
/codon_start=1
/gene="pac from Streptomyces alboniger"
/product="puromycin N-acetyltransferase"
/note="PuroR"
/note="confers resistance to puromycin"
/translation="MTEYKPTVRLATRDDVPRAVRTLAAAFADYPATRHTVDPDRHIER
VTELQELFLTRVGLDIGKVWVADDGAAVAVWTTPESVEAGAVFAEIGPRMAELSGSRLA
AQQQMEGLLAPHRPKEPAWFLATVGVSPDHQGKGLGSAVVLPGVEAAERAGVPAFLETS
APRNLPFYERLGFTVTADVEVPEGPRTWCMTRKPGA"
misc_feature 3741..4329
/note="WPRE"
/note="woodchuck hepatitis virus posttranscriptional
regulatory element"
LTR 4537..5170
/note="3' LTR"
/note="3' long terminal repeat (LTR) from HIV-1"
rep_origin complement(5701..6286)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(6457..7317)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(7318..7422)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
polyA_signal 7470..7604
/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
ORIGIN
1 tggaagggct aattcactcc caaagaagac aagatatcct tgatctgtgg atctaccaca
61 cacaaggcta cttccctgat tagcagaact acacaccagg gccaggggtc agatatccac
121 tgacctttgg atggtgctac aagctagtac cagttgagcc agataaggta gaagaggcca
181 ataaaggaga gaacaccagc ttgttacacc ctgtgagcct gcatgggatg gatgacccgg
241 agagagaagt gttagagtgg aggtttgaca gccgcctagc atttcatcac gtggcccgag
301 agctgcatcc ggagtacttc aagaactgct gatatcgagc ttgctacaag ggactttccg
361 ctggggactt tccagggagg cgtggcctgg gcgggactgg ggagtggcga gccctcagat
421 cctgcatata agcagctgct ttttgcctgt actgggtctc tctggttaga ccagatctga
481 gcctgggagc tctctggcta actagggaac ccactgctta agcctcaata aagcttgcct
541 tgagtgcttc aagtagtgtg tgcccgtctg ttgtgtgact ctggtaacta gagatccctc
601 agaccctttt agtcagtgtg gaaaatctct agcagtggcg cccgaacagg gacttgaaag
661 cgaaagggaa accagaggag ctctctcgac gcaggactcg gcttgctgaa gcgcgcacgg
721 caagaggcga ggggcggcga ctggtgagta cgccaaaaat tttgactagc ggaggctaga
781 aggagagaga tgggtgcgag agcgtcagta ttaagcgggg gagaattaga tcgcgatggg
841 aaaaaattcg gttaaggcca gggggaaaga aaaaatataa attaaaacat atagtatggg
901 caagcaggga gctagaacga ttcgcagtta atcctggcct gttagaaaca tcagaaggct
961 gtagacaaat actgggacag ctacaaccat cccttcagac aggatcagaa gaacttagat
1021 cattatataa tacagtagca accctctatt gtgtgcatca aaggatagag ataaaagaca
1081 ccaaggaagc tttagacaag atagaggaag agcaaaacaa aagtaagacc accgcacagc
1141 aagcggccgg ccgctgatct tcagacctgg aggaggagat atgagggaca attggagaag
1201 tgaattatat aaatataaag tagtaaaaat tgaaccatta ggagtagcac ccaccaaggc
1261 aaagagaaga gtggtgcaga gagaaaaaag agcagtggga ataggagctt tgttccttgg
1321 gttcttggga gcagcaggaa gcactatggg cgcagcgtca atgacgctga cggtacaggc
1381 cagacaatta ttgtctggta tagtgcagca gcagaacaat ttgctgaggg ctattgaggc
1441 gcaacagcat ctgttgcaac tcacagtctg gggcatcaag cagctccagg caagaatcct
1501 ggctgtggaa agatacctaa aggatcaaca gctcctgggg atttggggtt gctctggaaa
1561 actcatttgc accactgctg tgccttggaa tgctagttgg agtaataaat ctctggaaca
1621 gatttggaat cacacgacct ggatggagtg ggacagagaa attaacaatt acacaagctt
1681 aatacactcc ttaattgaag aatcgcaaaa ccagcaagaa aagaatgaac aagaattatt
1741 ggaattagat aaatgggcaa gtttgtggaa ttggtttaac ataacaaatt ggctgtggta
1801 tataaaatta ttcataatga tagtaggagg cttggtaggt ttaagaatag tttttgctgt
1861 actttctata gtgaatagag ttaggcaggg atattcacca ttatcgtttc agacccacct
1921 cccaaccccg aggggacccg acaggcccga aggaatagaa gaagaaggtg gagagagaga
1981 cagagacaga tccattcgat tagtgaacgg atctcgacgg tatcgccttt aaaagaaaag
2041 gggggattgg ggggtacagt gcaggggaaa gaatagtaga cataatagca acagacatac
2101 aaactaaaga actacaaaaa caaattacaa aaattcaaaa ttttcgggtt tattacaggg
2161 acagcagaga tccagtttat cgatgaggcc ctttcgtctt cactcgagtt tactccctat
2221 cagtgataga gaacgtatga agagtttact ccctatcagt gatagagaac gtatgcagac
2281 tttactccct atcagtgata gagaacgtat aaggagttta ctccctatca gtgatagaga
2341 acgtatgacc agtttactcc ctatcagtga tagagaacgt atctacagtt tactccctat
2401 cagtgataga gaacgtatat ccagtttact ccctatcagt gatagagaac gtatgtcgag
2461 gtaggcgtgt acggtgggcg cctataaaag cagagctcgt ttagtgaacc gtcagatcgc
2521 ctggagcaat tccacaacac ttttgtctta tacttggatc cgggcccgcg gccgccccgg
2581 gacgcgtcat atggaattct accgggtagg ggaggcgctt ttcccaaggc agtctggagc
2641 atgcgcttta gcagccccgc tgggcacttg gcgctacaca agtggcctct ggcctcgcac
2701 acattccaca tccaccggta ggcgccaacc ggctccgttc tttggtggcc ccttcgcgcc
2761 accttctact cctcccctag tcaggaagtt cccccccgcc ccgcagctcg cgtcgtgcag
2821 gacgtgacaa atggaagtag cacgtctcac tagtctcgtg cagatggaca gcaccgctga
2881 gcaatggaag cgggtaggcc tttggggcag cggccaatag cagctttgct ccttcgcttt
2941 ctgggctcag aggctgggaa ggggtgggtc cgggggcggg ctcaggggcg ggctcagggg
3001 cggggcgggc gcccgaaggt cctccggagg cccggcattc tgcacgcttc aaaagcgcac
3061 gtctgccgcg ctgttctcct cttcctcatc tccgggcctt tcgacctgca gcccaagctt
3121 accatgaccg agtacaagcc cacggtgcgc ctcgccaccc gcgacgacgt ccccagggcc
3181 gtacgcaccc tcgccgccgc gttcgccgac taccccgcca cgcgccacac cgtcgatccg
3241 gaccgccaca tcgagcgggt caccgagctg caagaactct tcctcacgcg cgtcgggctc
3301 gacatcggca aggtgtgggt cgcggacgac ggcgccgcgg tggcggtctg gaccacgccg
3361 gagagcgtcg aagcgggggc ggtgttcgcc gagatcggcc cgcgcatggc cgagttgagc
3421 ggttcccggc tggccgcgca gcaacagatg gaaggcctcc tggcgccgca ccggcccaag
3481 gagcccgcgt ggttcctggc caccgtcggc gtctcgcccg accaccaggg caagggtctg
3541 ggcagcgccg tcgtgctccc cggagtggag gcggccgagc gcgccggggt gcccgccttc
3601 ctggagacct ccgcgccccg caacctcccc ttctacgagc ggctcggctt caccgtcacc
3661 gccgacgtcg aggtgcccga aggaccgcgc acctggtgca tgacccgcaa gcccggtgcc
3721 tgacggggcg cgtctggaac aatcaacctc tggattacaa aatttgtgaa agattgactg
3781 gtattcttaa ctatgttgct ccttttacgc tatgtggata cgctgcttta atgcctttgt
3841 atcatgctat tgcttcccgt atggctttca ttttctcctc cttgtataaa tcctggttgc
3901 tgtctcttta tgaggagttg tggcccgttg tcaggcaacg tggcgtggtg tgcactgtgt
3961 ttgctgacgc aacccccact ggttggggca ttgccaccac ctgtcagctc ctttccggga
4021 ctttcgcttt ccccctccct attgccacgg cggaactcat cgccgcctgc cttgcccgct
4081 gctggacagg ggctcggctg ttgggcactg acaattccgt ggtgttgtcg gggaagctga
4141 cgtcctttcc atggctgctc gcctgtgttg ccacctggat tctgcgcggg acgtccttct
4201 gctacgtccc ttcggccctc aatccagcgg accttccttc ccgcggcctg ctgccggctc
4261 tgcggcctct tccgcgtctt cgccttcgcc ctcagacgag tcggatctcc ctttgggccg
4321 cctccccgcc tggaattaat tctgcagtcg agacctagaa aaacatggag caatcacaag
4381 tagcaataca gcagctacca atgctgattg tgcctggcta gaagcacaag aggaggagga
4441 ggtgggtttt tccagtcaca cctcaggtac ctttaagacc aatgacttac aaggcagctg
4501 tagatcttag ccacttttta aaagaaaaga ggggactgga agggctaatt cactcccaac
4561 gaagacaaga tatccttgat ctgtggatct accacacaca aggctacttc cctgattagc
4621 agaactacac accagggcca ggggtcagat atccactgac ctttggatgg tgctacaagc
4681 tagtaccagt tgagccagat aaggtagaag aggccaataa aggagagaac accagcttgt
4741 tacaccctgt gagcctgcat gggatggatg acccggagag agaagtgtta gagtggaggt
4801 ttgacagccg cctagcattt catcacgtgg cccgagagct gcatccggag tacttcaaga
4861 actgctgata tcgagcttgc tacaagggac tttccgctgg ggactttcca gggaggcgtg
4921 gcctgggcgg gactggggag tggcgagccc tcagatcctg catataagca gctgcttttt
4981 gcctgtactg ggtctctctg gttagaccag atctgagcct gggagctctc tggctaacta
5041 gggaacccac tgcttaagcc tcaataaagc ttgccttgag tgcttcaagt agtgtgtgcc
5101 cgtctgttgt gtgactctgg taactagaga tccctcagac ccttttagtc agtgtggaaa
5161 atctctagca gtagtagttc atgtcatctt attattcagt atttataact tgcaaagaaa
5221 tgaatatcag agagtgagag gccttgacat tgctagcgtt ttaccgtcga cctctagcta
5281 gagcttggcg taatcatggt catagctgtt tcctgtgtga aattgttatc cgctcacaat
5341 tccacacaac atacgagccg gaagcataaa gtgtaaagcc tggggtgcct aatgagtgag
5401 ctaactcaca ttaattgcgt tgcgctcact gcccgctttc cagtcgggaa acctgtcgtg
5461 ccagctgcat taatgaatcg gccaacgcgc ggggagaggc ggtttgcgta ttgggcgctc
5521 ttccgcttcc tcgctcactg actcgctgcg ctcggtcgtt cggctgcggc gagcggtatc
5581 agctcactca aaggcggtaa tacggttatc cacagaatca ggggataacg caggaaagaa
5641 catgtgagca aaaggccagc aaaaggccag gaaccgtaaa aaggccgcgt tgctggcgtt
5701 tttccatagg ctccgccccc ctgacgagca tcacaaaaat cgacgctcaa gtcagaggtg
5761 gcgaaacccg acaggactat aaagatacca ggcgtttccc cctggaagct ccctcgtgcg
5821 ctctcctgtt ccgaccctgc cgcttaccgg atacctgtcc gcctttctcc cttcgggaag
5881 cgtggcgctt tctcatagct cacgctgtag gtatctcagt tcggtgtagg tcgttcgctc
5941 caagctgggc tgtgtgcacg aaccccccgt tcagcccgac cgctgcgcct tatccggtaa
6001 ctatcgtctt gagtccaacc cggtaagaca cgacttatcg ccactggcag cagccactgg
6061 taacaggatt agcagagcga ggtatgtagg cggtgctaca gagttcttga agtggtggcc
6121 taactacggc tacactagaa gaacagtatt tggtatctgc gctctgctga agccagttac
6181 cttcggaaaa agagttggta gctcttgatc cggcaaacaa accaccgctg gtagcggttt
6241 ttttgtttgc aagcagcaga ttacgcgcag aaaaaaagga tctcaagaag atcctttgat
6301 cttttctacg gggtctgacg ctcagtggaa cgaaaactca cgttaaggga ttttggtcat
6361 gagattatca aaaaggatct tcacctagat ccttttaaat taaaaatgaa gttttaaatc
6421 aatctaaagt atatatgagt aaacttggtc tgacagttac caatgcttaa tcagtgaggc
6481 acctatctca gcgatctgtc tatttcgttc atccatagtt gcctgactcc ccgtcgtgta
6541 gataactacg atacgggagg gcttaccatc tggccccagt gctgcaatga taccgcgaga
6601 cccacgctca ccggctccag atttatcagc aataaaccag ccagccggaa gggccgagcg
6661 cagaagtggt cctgcaactt tatccgcctc catccagtct attaattgtt gccgggaagc
6721 tagagtaagt agttcgccag ttaatagttt gcgcaacgtt gttgccattg ctacaggcat
6781 cgtggtgtca cgctcgtcgt ttggtatggc ttcattcagc tccggttccc aacgatcaag
6841 gcgagttaca tgatccccca tgttgtgcaa aaaagcggtt agctccttcg gtcctccgat
6901 cgttgtcaga agtaagttgg ccgcagtgtt atcactcatg gttatggcag cactgcataa
6961 ttctcttact gtcatgccat ccgtaagatg cttttctgtg actggtgagt actcaaccaa
7021 gtcattctga gaatagtgta tgcggcgacc gagttgctct tgcccggcgt caatacggga
7081 taataccgcg ccacatagca gaactttaaa agtgctcatc attggaaaac gttcttcggg
7141 gcgaaaactc tcaaggatct taccgctgtt gagatccagt tcgatgtaac ccactcgtgc
7201 acccaactga tcttcagcat cttttacttt caccagcgtt tctgggtgag caaaaacagg
7261 aaggcaaaat gccgcaaaaa agggaataag ggcgacacgg aaatgttgaa tactcatact
7321 cttccttttt caatattatt gaagcattta tcagggttat tgtctcatga gcggatacat
7381 atttgaatgt atttagaaaa ataaacaaat aggggttccg cgcacatttc cccgaaaagt
7441 gccacctgac gtcgacggat cgggagatca acttgtttat tgcagcttat aatggttaca
7501 aataaagcaa tagcatcaca aatttcacaa ataaagcatt tttttcactg cattctagtt
7561 gtggtttgtc caaactcatc aatgtatctt atcatgtctg gatcaactgg ataactcaag
7621 ctaaccaaaa tcatcccaaa cttcccaccc cataccctat taccactgcc aattacctag
7681 tggtttcatt tactctaaac ctgtgattcc tctgaattat tttcatttta aagaaattgt
7741 atttgttaaa tatgtactac aaacttagta gtttttaaag aaattgtatt tgttaaatat
7801 gtactacaaa cttagtagt
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4917/pCMV-SPORT6-FGFR1人源基因质粒 |
| P4918/pCMV-SPORT6-ZNF41人源基因质粒 |
| P4919/pCMV-SPORT6-ADGRE5人源基因质粒 |
| P4920/pCMV-SPORT6-CRTAC1（389-1986bp）人源基因质粒 |
| P4921/pCMV-SPORT6-RACK1人源基因质粒 |
| P4922/pCMV-SPORT6-ALDH16A1人源基因质粒 |
| P4923/pCMV-SPORT6-COASY（277-1695bp）人源基因质粒 |
| P4924/pCMV-SPORT6-TMEM184A人源基因质粒 |
| P4925/pCMV-SPORT6-PAK4人源基因质粒 |
| P3648/pCMV-SPORT6-ZG16B人源基因质粒 |
| P3649/pCMV-SPORT6-DNAJC19(1同义突变）人源基因质粒 |
| P3650/pCMV-SPORT6-CCNDBP1人源基因质粒 |
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pLVX-TRE3G慢病毒表达质粒
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