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- Xybio
- 上海
- P0479
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pLVX-EF1a-IRES-mCherry
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pLVX-EF1α-IRES-mCherry慢病毒表达质粒
别称: pLVX-EF1a-IRES-mCherry
质粒属性
质粒简介
plvx-ef1α- IRES mCherry是双基因慢病毒表达载体，可用于几乎任何分裂或不分裂的转导哺乳动物细胞产生高滴度的慢病毒，包括原发性和干细胞。该载体包含一个内部核糖体进入位点（IRES）允许一个感兴趣的基因和红色荧光蛋白mCherry是同时从一个单一的mRNA转录表达。的转录表达的人延伸因子1α（EF1α）启动子驱动，继续甚至在载体稳定整合到宿主细胞的基因组被激活。稳定表达的转录允许各种细胞过程的监控（如原发性或干细胞分化）不与cmvpromoters转基因沉默。此外，矢量允许有效的流式细胞术检测稳定或瞬时转染的哺乳动物细胞表达的蛋白mCherry和利益，而无需耗时的药物和克隆选。
质粒图谱
质粒序列
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pLVX-EF1α-IRES-mCherry慢病毒表达质粒
别称: pLVX-EF1a-IRES-mCherry
| 启动子: | EF1a |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 终止子: | SV40 poly(A) signal |
| 质粒分类: | 病毒系列，慢病毒克隆载体 |
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | 红色荧光 |
| 克隆菌株: | Stbl3 |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 哺乳细胞 |
| 诱导方式: | 无须诱导，瞬时表达 |
| 5'测序引物: | WPRE-R：CATAGCGTAAAAGGAGCAACA |
| 3'测序引物: | 根据序列设计引物 |
| 备注: | 跟Clontech的序列有区别 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞,慢病毒 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： | 红色 |
质粒简介
plvx-ef1α- IRES mCherry是双基因慢病毒表达载体，可用于几乎任何分裂或不分裂的转导哺乳动物细胞产生高滴度的慢病毒，包括原发性和干细胞。该载体包含一个内部核糖体进入位点（IRES）允许一个感兴趣的基因和红色荧光蛋白mCherry是同时从一个单一的mRNA转录表达。的转录表达的人延伸因子1α（EF1α）启动子驱动，继续甚至在载体稳定整合到宿主细胞的基因组被激活。稳定表达的转录允许各种细胞过程的监控（如原发性或干细胞分化）不与cmvpromoters转基因沉默。此外，矢量允许有效的流式细胞术检测稳定或瞬时转染的哺乳动物细胞表达的蛋白mCherry和利益，而无需耗时的药物和克隆选。
质粒图谱
质粒序列
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3969/pCMV-SPORT6-NCAPH2（219-1818bp）人源基因质粒 |
| P3971/pCMV-SPORT6-C11orf74人源基因质粒 |
| P3972/pCMV-SPORT6-PBXIP1人源基因质粒 |
| P3973/pCMV-SPORT6-USP48人源基因质粒 |
| P3974/pCMV-SPORT6-ABCD1人源基因质粒 |
| P3975/pCMV-SPORT6-C1D人源基因质粒 |
| P3976/pCMV-SPORT6-BCL7B人源基因质粒 |
| P3977/pCMV-SPORT6-ALDOA人源基因质粒 |
| P3978/pCMV-SPORT6-PFKL人源基因质粒 |
| P3979/pCMV-SPORT6-ACAD10人源基因质粒 |
| P3980/pCMV-SPORT6-MOAP1人源基因质粒 |
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