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无锡云萃生物
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文献和实验生物素化二抗，37C，1h。 10)切片用PBS洗5rainX 3次。 11)滴加ABC试剂，37℃，45min。 12)切片用PBS洗5rainX 3次。 13)滴加DAB显色液，显色时间为5～10rain(显微镜下控制显色程度) 14)切片经蒸馏水洗，入0．1％甲基绿复染细胞核。 15)切片脱水、透明、封固、镜下观察。
-2h之间，很多时候都是在45min和1h达到高峰，当然还有合适的浓度！！！二是是你用的是药物刺激产生受体可能时间会长一些,因为药物还有一个渗透和刺激产生细胞因子的过程.时间可以长一些,主要根据自己的药物刺激特性确定时间点. 2. 核蛋白样品的制备： 制备蛋白样品的关键是: （1）注意用专用的和核蛋白抽提试剂来做,才能使制备的核蛋白保持蛋白原有的天然活性和构像. （2）掌握好核蛋白的浓度和纯度,尤其是浓度. 能入核的蛋白本来就不是很多,所以核蛋白的浓度往往不会很高
剃度的问题,这个很关键,很多同学不注意这一点,最后试验确实是拿不到阳性结果,比如我一前一个朋友用药物处理SGC7901细胞,就是因为时间点设计的不好EMSA试验结果是阴性的,后来根据自己药品刺激的特性重新设计了刺激时间剃度,最终得到阳性结果! 所以这个设计很关键!!! 给一个个人的实验总结希望能帮助大家:一是受体结合类的直接刺激激活信号通路的方法，一般达到EMSA核转运高峰的时间比较短，大概控制在30min-2h之间，很多时候都是在45min和1h达到高峰，当然还有合适的浓度！！！二
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