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- 2025年07月16日
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无锡云萃生物
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| 规格： | 10mg | 产品价格： | ￥100.0 |
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文献和实验我做NF-kB的EMSA实验方法和结果，条带不好，请大家指点！
核蛋白提取： （1）5 millions个离心收集 （2）弃上清，细胞沉淀重悬于1.5ml冰预冷的PBS缓冲液，4℃下2000 rpm离心5min。 （3）弃上清，沉淀重悬于500μl冰预冷的Buffer A离心收集，再悬于0.5 ml Buffer A。 （4）冰上放置10分钟，加入NP40使终浓度为0.5%，混匀后，轻摇20秒。 （5）4℃下1330×g离心15分钟得到细胞核。 （6）重悬于50µl Buffer B，于冰上强烈振荡15分钟，4℃下16300×g离心10分钟
酒精透化（如材料脱水不净，进入此步，将出现浑浊），每隔2－3小时更换1次，至纯二甲苯，重复换1次，使酒精完全脱除。⑤浸蜡：将指管（连同材料及二甲苯）放入60℃温箱中，取熔点52－56℃的纯净石蜡小块片（或熔融的石蜡）逐步加入指管中，使熔蜡达到饱和，并让二甲苯徐徐挥散，换蜡3－4次，至口尝无异味，如同嚼蜡为止。⑥包埋：将熔蜡及材料趁热倒入预制小纸盒中，调整材料位置，使之疏散均匀，让蜡渐渐冷凝，移浮于水面，至完全凝固。⑦切片：剥离纸盒，切取材料蜡块，于旋转切片机上切成连续蜡带8－15μm厚。⑧粘片：被片
检查细胞核的着色程度，过深可用0.5%盐酸乙醇分化。 ⑤自来水洗至变蓝；用蒸馏水洗。 ⑥用Van Gieson液染1~5 min。 ⑦倾去染液，直接用95%乙醇分化和脱水。 ⑧无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。 结果判定： 胶原纤维呈深粉红色，肌纤维、胞浆及红细胞黄色，细胞核呈棕黑色或兰黑色。 （3）网状纤维染色－Wider染色法：可以用来显示病变组织网状支架的破坏情况。特别是在肿瘤病理诊断中，网状纤维染色对于鉴别来源于上皮组织和间叶
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