N,N-二乙基-4-氟-3-硝·基苯甲酰胺；474018-9

PCR专题

.6*lg[K+]+0.41(%[G+C])-(675/n)。以上两种算法都是基于碱基组成而不是碱基排列而计算的，事实上相同碱基组成的引物Tm 可能差异不小：GGGAA 和GAGAG 的Tm 是不一样的，所以确定引物Tm 最可信的方法是近邻分析法。这种方法从序列一级结构和相邻碱基的特性预测引物的杂交稳定性。大部分计算机程序如Primer5 等均使用近邻分析法。九、当在引物5’端添加酶切位点时要考虑：a)该目的序列内部不得含有相同的酶切位点，在引物发出后才发现错误的事情本人就干过，在论坛上也能看到这样的

［共享］DNA测序技术

疾病的遗传基础[35， 36]。而这种实验的成功与否极大程度上取决于疾病相关等位基因的频率以及它 们在不同种族人群中的分布[37]。如果待测序列的高危等位基因频率很低，那么 直接确定突变序列基因型的方法就不适用了。以往对基因的分析表明大多数基 因突变频率很低（ 能力[38]。最近有文献[39]介绍了一项研究，利用DHPLC 对神经精神疾病相关 的两个基因的编码区和剪接结合部的突变序列（频率很低）进行大样本量筛查 （n=450）。结果表明这两种基因，SLC6A4（编码5-羟色胺转运

一些分子生物学常用实验技术方法，建议加分啦

2+ . Tris·Cl在20℃时pH为8.3-8.8,但在实际PCR反应中,pH为6.8-7.8. 50mmol/L的KCl有利于引物的退火.另外,反应液可加入5mmol/L的二硫苏糖醇(DDT)或100μg/ml的牛血清白蛋白(BSA),它们可稳定酶活性,另外加入T4噬菌体的基因32蛋白则对扩增较长的DNA片段有利.各种Taq DNA聚合酶商品都有自己特定的一些缓冲液。　　二、PCR反应参数　　1. 变性：在第一轮循环前,在94℃下变性5-10min非常重要,它可使模板DNA完全解链,然后加入Taq DNA