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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pSecTag2A
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pSecTag2A哺乳分泌质粒
别称: pSecTag2A
质粒属性
质粒简介
pSecTag2 A, B, and C vectors are fusion vectors requiring that you clone your gene of interest in frame with the initiation ATG of the N-terminal Igκ-chain leader sequence and/or the C-terminal myc epitope/polyhistidine tag. Three versions of this vector are provided to facilitate cloning. For proper expression,first determine which restriction sites are appropriate for ligation and then which vector will preserve the reading frame at BOTH the 5′ and the 3′ ends. It may be nece ssary to PCR your gene product to create a fragment with the appropriate restriction sites to clone in frame at both ends. Carefully inspect your gene and the multiple cloning site of each vector before cloning your gene of interest.
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5159 bp ds-DNA circular SYN 29-AUG-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS Untitled
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 5159)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Monday, August 29, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaollingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5159
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 235..614
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 615..818
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
promoter 863..881
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
CDS 905..967
/codon_start=1
/product="leader sequence from mouse immunoglobulin kappa
light chain"
/note="Ig-kappa leader"
/translation="METDTLLLWVLLLWVPGSTGD"
CDS 1082..1111
/codon_start=1
/product="Myc (human c-Myc oncogene) epitope tag"
/note="Myc"
/translation="EQKLISEEDL"
CDS 1127..1144
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/note="6xHis"
/translation="HHHHHH"
polyA_signal 1173..1397
/note="bGH poly(A) signal"
/note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
rep_origin 1443..1871
/direction=RIGHT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 1885..2214
/note="SV40 promoter"
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 2065..2200
/note="SV40 ori"
/note="SV40 origin of replication"
promoter 2262..2309
/note="EM7 promoter"
/note="synthetic bacterial promoter "
CDS 2328..2702
/codon_start=1
/gene="Sh ble from Streptoalloteichus hindustanus"
/product="antibiotic-binding protein"
/note="BleoR"
/note="confers resistance to bleomycin, phleomycin, and
Zeocin(TM)"
/translation="MAKLTSAVPVLTARDVAGAVEFWTDRLGFSRDFVEDDFAGVVRDD
VTLFISAVQDQVVPDNTLAWVWVRGLDELYAEWSEVVSTNFRDASGPAMTEIGEQPWGR
EFALRDPAGNCVHFVAEEQD"
polyA_signal 2832..2953
/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
primer_bind complement(3002..3018)
/note="M13 rev"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
protein_bind 3026..3042
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(3050..3080)
/note="lac promoter"
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind 3095..3116
/bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
/note="CAP binding site"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
rep_origin complement(3404..3992)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(4163..5023)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(5024..5128)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
ORIGIN
1 gacggatcgg gagatctccc gatcccctat ggtcgactct cagtacaatc tgctctgatg
61 ccgcatagtt aagccagtat ctgctccctg cttgtgtgtt ggaggtcgct gagtagtgcg
121 cgagcaaaat ttaagctaca acaaggcaag gcttgaccga caattgcatg aagaatctgc
181 ttagggttag gcgttttgcg ctgcttcgcg atgtacgggc cagatatacg cgttgacatt
241 gattattgac tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata
301 tggagttccg cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc
361 cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc
421 attgacgtca atgggtggac tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt
481 atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt
541 atgcccagta catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca
601 tcgctattac catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg
661 actcacgggg atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc
721 aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg
781 gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa gcagagctct ctggctaact agagaaccca
841 ctgcttactg gcttatcgaa attaatacga ctcactatag ggagacccaa gctggctagc
901 caccatggag acagacacac tcctgctatg ggtactgctg ctctgggttc caggttccac
961 tggtgacgcg gcccagccgg ccaggcgcgc cgtacgaagc ttggtaccga gctcggatcc
1021 actccagtgt ggtggaattc tgcagatatc cagcacagtg gcggccgctc gaggagggcc
1081 cgaacaaaaa ctcatctcag aagaggatct gaatagcgcc gtcgaccatc atcatcatca
1141 tcattgagtt taaacccgct gatcagcctc gactgtgcct tctagttgcc agccatctgt
1201 tgtttgcccc tcccccgtgc cttccttgac cctggaaggt gccactccca ctgtcctttc
1261 ctaataaaat gaggaaattg catcgcattg tctgagtagg tgtcattcta ttctgggggg
1321 tggggtgggg caggacagca agggggagga ttgggaagac aatagcaggc atgctgggga
1381 tgcggtgggc tctatggctt ctgaggcgga aagaaccagc tggggctcta gggggtatcc
1441 ccacgcgccc tgtagcggcg cattaagcgc ggcgggtgtg gtggttacgc gcagcgtgac
1501 cgctacactt gccagcgccc tagcgcccgc tcctttcgct ttcttccctt cctttctcgc
1561 cacgttcgcc ggctttcccc gtcaagctct aaatcggggc atccctttag ggttccgatt
1621 tagtgcttta cggcacctcg accccaaaaa acttgattag ggtgatggtt cacgtagtgg
1681 gccatcgccc tgatagacgg tttttcgccc tttgacgttg gagtccacgt tctttaatag
1741 tggactcttg ttccaaactg gaacaacact caaccctatc tcggtctatt cttttgattt
1801 ataagggatt ttggggattt cggcctattg gttaaaaaat gagctgattt aacaaaaatt
1861 taacgcgaat taattctgtg gaatgtgtgt cagttagggt gtggaaagtc cccaggctcc
1921 ccagcaggca gaagtatgca aagcatgcat ctcaattagt cagcaaccag gtgtggaaag
1981 tccccaggct ccccagcagg cagaagtatg caaagcatgc atctcaatta gtcagcaacc
2041 atagtcccgc ccctaactcc gcccatcccg cccctaactc cgcccagttc cgcccattct
2101 ccgccccatg gctgactaat tttttttatt tatgcagagg ccgaggccgc ctctgcctct
2161 gagctattcc agaagtagtg aggaggcttt tttggaggcc taggcttttg caaaaagctc
2221 ccgggagctt gtatatccat tttcggatct gatcagcacg tgttgacaat taatcatcgg
2281 catagtatat cggcatagta taatacgaca aggtgaggaa ctaaaccatg gccaagttga
2341 ccagtgccgt tccggtgctc accgcgcgcg acgtcgccgg agcggtcgag ttctggaccg
2401 accggctcgg gttctcccgg gacttcgtgg aggacgactt cgccggtgtg gtccgggacg
2461 acgtgaccct gttcatcagc gcggtccagg accaggtggt gccggacaac accctggcct
2521 gggtgtgggt gcgcggcctg gacgagctgt acgccgagtg gtcggaggtc gtgtccacga
2581 acttccggga cgcctccggg ccggccatga ccgagatcgg cgagcagccg tgggggcggg
2641 agttcgccct gcgcgacccg gccggcaact gcgtgcactt cgtggccgag gagcaggact
2701 gacacgtgct acgagatttc gattccaccg ccgccttcta tgaaaggttg ggcttcggaa
2761 tcgttttccg ggacgccggc tggatgatcc tccagcgcgg ggatctcatg ctggagttct
2821 tcgcccaccc caacttgttt attgcagctt ataatggtta caaataaagc aatagcatca
2881 caaatttcac aaataaagca tttttttcac tgcattctag ttgtggtttg tccaaactca
2941 tcaatgtatc ttatcatgtc tgtataccgt cgacctctag ctagagcttg gcgtaatcat
3001 ggtcatagct gtttcctgtg tgaaattgtt atccgctcac aattccacac aacatacgag
3061 ccggaagcat aaagtgtaaa gcctggggtg cctaatgagt gagctaactc acattaattg
3121 cgttgcgctc actgcccgct ttccagtcgg gaaacctgtc gtgccagctg cattaatgaa
3181 tcggccaacg cgcggggaga ggcggtttgc gtattgggcg ctcttccgct tcctcgctca
3241 ctgactcgct gcgctcggtc gttcggctgc ggcgagcggt atcagctcac tcaaaggcgg
3301 taatacggtt atccacagaa tcaggggata acgcaggaaa gaacatgtga gcaaaaggcc
3361 agcaaaaggc caggaaccgt aaaaaggccg cgttgctggc gtttttccat aggctccgcc
3421 cccctgacga gcatcacaaa aatcgacgct caagtcagag gtggcgaaac ccgacaggac
3481 tataaagata ccaggcgttt ccccctggaa gctccctcgt gcgctctcct gttccgaccc
3541 tgccgcttac cggatacctg tccgcctttc tcccttcggg aagcgtggcg ctttctcaat
3601 gctcacgctg taggtatctc agttcggtgt aggtcgttcg ctccaagctg ggctgtgtgc
3661 acgaaccccc cgttcagccc gaccgctgcg ccttatccgg taactatcgt cttgagtcca
3721 acccggtaag acacgactta tcgccactgg cagcagccac tggtaacagg attagcagag
3781 cgaggtatgt aggcggtgct acagagttct tgaagtggtg gcctaactac ggctacacta
3841 gaaggacagt atttggtatc tgcgctctgc tgaagccagt taccttcgga aaaagagttg
3901 gtagctcttg atccggcaaa caaaccaccg ctggtagcgg tggttttttt gtttgcaagc
3961 agcagattac gcgcagaaaa aaaggatctc aagaagatcc tttgatcttt tctacggggt
4021 ctgacgctca gtggaacgaa aactcacgtt aagggatttt ggtcatgaga ttatcaaaaa
4081 ggatcttcac ctagatcctt ttaaattaaa aatgaagttt taaatcaatc taaagtatat
4141 atgagtaaac ttggtctgac agttaccaat gcttaatcag tgaggcacct atctcagcga
4201 tctgtctatt tcgttcatcc atagttgcct gactccccgt cgtgtagata actacgatac
4261 gggagggctt accatctggc cccagtgctg caatgatacc gcgagaccca cgctcaccgg
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4441 cgccagttaa tagtttgcgc aacgttgttg ccattgctac aggcatcgtg gtgtcacgct
4501 cgtcgtttgg tatggcttca ttcagctccg gttcccaacg atcaaggcga gttacatgat
4561 cccccatgtt gtgcaaaaaa gcggttagct ccttcggtcc tccgatcgtt gtcagaagta
4621 agttggccgc agtgttatca ctcatggtta tggcagcact gcataattct cttactgtca
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5101 agaaaaataa acaaataggg gttccgcgca catttccccg aaaagtgcca cctgacgtc
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pSecTag2A哺乳分泌质粒
别称: pSecTag2A
| 启动子: | CMV |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 终止子: | SV40 poly(A) signal,BGH poly(A) signal |
| 质粒大小: | 5159bp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 哺乳细胞 |
| 诱导方式: | 无须诱导，瞬时表达 |
| 5'测序引物: | T7:TAATACGACTCACTATAGGG |
| 3'测序引物: | BGH:TAGAAGGCACAGTCGAGG |
质粒属性
| 质粒宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 质粒用途： | 蛋白表达,分泌表达 |
| 片段类型： | ORF |
| 片段物种： | 空载体 |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | Zeo |
| 荧光标记： |
质粒简介
pSecTag2 A, B, and C vectors are fusion vectors requiring that you clone your gene of interest in frame with the initiation ATG of the N-terminal Igκ-chain leader sequence and/or the C-terminal myc epitope/polyhistidine tag. Three versions of this vector are provided to facilitate cloning. For proper expression,first determine which restriction sites are appropriate for ligation and then which vector will preserve the reading frame at BOTH the 5′ and the 3′ ends. It may be nece ssary to PCR your gene product to create a fragment with the appropriate restriction sites to clone in frame at both ends. Carefully inspect your gene and the multiple cloning site of each vector before cloning your gene of interest.
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5159 bp ds-DNA circular SYN 29-AUG-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS Untitled
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 5159)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Monday, August 29, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaollingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5159
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
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/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 615..818
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/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
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indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 1885..2214
/note="SV40 promoter"
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 2065..2200
/note="SV40 ori"
/note="SV40 origin of replication"
promoter 2262..2309
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/gene="Sh ble from Streptoalloteichus hindustanus"
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/note="BleoR"
/note="confers resistance to bleomycin, phleomycin, and
Zeocin(TM)"
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/note="M13 rev"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
protein_bind 3026..3042
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(3050..3080)
/note="lac promoter"
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind 3095..3116
/bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
/note="CAP binding site"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
rep_origin complement(3404..3992)
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/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(4163..5023)
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/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
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ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(5024..5128)
/gene="bla"
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ORIGIN
1 gacggatcgg gagatctccc gatcccctat ggtcgactct cagtacaatc tgctctgatg
61 ccgcatagtt aagccagtat ctgctccctg cttgtgtgtt ggaggtcgct gagtagtgcg
121 cgagcaaaat ttaagctaca acaaggcaag gcttgaccga caattgcatg aagaatctgc
181 ttagggttag gcgttttgcg ctgcttcgcg atgtacgggc cagatatacg cgttgacatt
241 gattattgac tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata
301 tggagttccg cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc
361 cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc
421 attgacgtca atgggtggac tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt
481 atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt
541 atgcccagta catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca
601 tcgctattac catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg
661 actcacgggg atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc
721 aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg
781 gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa gcagagctct ctggctaact agagaaccca
841 ctgcttactg gcttatcgaa attaatacga ctcactatag ggagacccaa gctggctagc
901 caccatggag acagacacac tcctgctatg ggtactgctg ctctgggttc caggttccac
961 tggtgacgcg gcccagccgg ccaggcgcgc cgtacgaagc ttggtaccga gctcggatcc
1021 actccagtgt ggtggaattc tgcagatatc cagcacagtg gcggccgctc gaggagggcc
1081 cgaacaaaaa ctcatctcag aagaggatct gaatagcgcc gtcgaccatc atcatcatca
1141 tcattgagtt taaacccgct gatcagcctc gactgtgcct tctagttgcc agccatctgt
1201 tgtttgcccc tcccccgtgc cttccttgac cctggaaggt gccactccca ctgtcctttc
1261 ctaataaaat gaggaaattg catcgcattg tctgagtagg tgtcattcta ttctgggggg
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1381 tgcggtgggc tctatggctt ctgaggcgga aagaaccagc tggggctcta gggggtatcc
1441 ccacgcgccc tgtagcggcg cattaagcgc ggcgggtgtg gtggttacgc gcagcgtgac
1501 cgctacactt gccagcgccc tagcgcccgc tcctttcgct ttcttccctt cctttctcgc
1561 cacgttcgcc ggctttcccc gtcaagctct aaatcggggc atccctttag ggttccgatt
1621 tagtgcttta cggcacctcg accccaaaaa acttgattag ggtgatggtt cacgtagtgg
1681 gccatcgccc tgatagacgg tttttcgccc tttgacgttg gagtccacgt tctttaatag
1741 tggactcttg ttccaaactg gaacaacact caaccctatc tcggtctatt cttttgattt
1801 ataagggatt ttggggattt cggcctattg gttaaaaaat gagctgattt aacaaaaatt
1861 taacgcgaat taattctgtg gaatgtgtgt cagttagggt gtggaaagtc cccaggctcc
1921 ccagcaggca gaagtatgca aagcatgcat ctcaattagt cagcaaccag gtgtggaaag
1981 tccccaggct ccccagcagg cagaagtatg caaagcatgc atctcaatta gtcagcaacc
2041 atagtcccgc ccctaactcc gcccatcccg cccctaactc cgcccagttc cgcccattct
2101 ccgccccatg gctgactaat tttttttatt tatgcagagg ccgaggccgc ctctgcctct
2161 gagctattcc agaagtagtg aggaggcttt tttggaggcc taggcttttg caaaaagctc
2221 ccgggagctt gtatatccat tttcggatct gatcagcacg tgttgacaat taatcatcgg
2281 catagtatat cggcatagta taatacgaca aggtgaggaa ctaaaccatg gccaagttga
2341 ccagtgccgt tccggtgctc accgcgcgcg acgtcgccgg agcggtcgag ttctggaccg
2401 accggctcgg gttctcccgg gacttcgtgg aggacgactt cgccggtgtg gtccgggacg
2461 acgtgaccct gttcatcagc gcggtccagg accaggtggt gccggacaac accctggcct
2521 gggtgtgggt gcgcggcctg gacgagctgt acgccgagtg gtcggaggtc gtgtccacga
2581 acttccggga cgcctccggg ccggccatga ccgagatcgg cgagcagccg tgggggcggg
2641 agttcgccct gcgcgacccg gccggcaact gcgtgcactt cgtggccgag gagcaggact
2701 gacacgtgct acgagatttc gattccaccg ccgccttcta tgaaaggttg ggcttcggaa
2761 tcgttttccg ggacgccggc tggatgatcc tccagcgcgg ggatctcatg ctggagttct
2821 tcgcccaccc caacttgttt attgcagctt ataatggtta caaataaagc aatagcatca
2881 caaatttcac aaataaagca tttttttcac tgcattctag ttgtggtttg tccaaactca
2941 tcaatgtatc ttatcatgtc tgtataccgt cgacctctag ctagagcttg gcgtaatcat
3001 ggtcatagct gtttcctgtg tgaaattgtt atccgctcac aattccacac aacatacgag
3061 ccggaagcat aaagtgtaaa gcctggggtg cctaatgagt gagctaactc acattaattg
3121 cgttgcgctc actgcccgct ttccagtcgg gaaacctgtc gtgccagctg cattaatgaa
3181 tcggccaacg cgcggggaga ggcggtttgc gtattgggcg ctcttccgct tcctcgctca
3241 ctgactcgct gcgctcggtc gttcggctgc ggcgagcggt atcagctcac tcaaaggcgg
3301 taatacggtt atccacagaa tcaggggata acgcaggaaa gaacatgtga gcaaaaggcc
3361 agcaaaaggc caggaaccgt aaaaaggccg cgttgctggc gtttttccat aggctccgcc
3421 cccctgacga gcatcacaaa aatcgacgct caagtcagag gtggcgaaac ccgacaggac
3481 tataaagata ccaggcgttt ccccctggaa gctccctcgt gcgctctcct gttccgaccc
3541 tgccgcttac cggatacctg tccgcctttc tcccttcggg aagcgtggcg ctttctcaat
3601 gctcacgctg taggtatctc agttcggtgt aggtcgttcg ctccaagctg ggctgtgtgc
3661 acgaaccccc cgttcagccc gaccgctgcg ccttatccgg taactatcgt cttgagtcca
3721 acccggtaag acacgactta tcgccactgg cagcagccac tggtaacagg attagcagag
3781 cgaggtatgt aggcggtgct acagagttct tgaagtggtg gcctaactac ggctacacta
3841 gaaggacagt atttggtatc tgcgctctgc tgaagccagt taccttcgga aaaagagttg
3901 gtagctcttg atccggcaaa caaaccaccg ctggtagcgg tggttttttt gtttgcaagc
3961 agcagattac gcgcagaaaa aaaggatctc aagaagatcc tttgatcttt tctacggggt
4021 ctgacgctca gtggaacgaa aactcacgtt aagggatttt ggtcatgaga ttatcaaaaa
4081 ggatcttcac ctagatcctt ttaaattaaa aatgaagttt taaatcaatc taaagtatat
4141 atgagtaaac ttggtctgac agttaccaat gcttaatcag tgaggcacct atctcagcga
4201 tctgtctatt tcgttcatcc atagttgcct gactccccgt cgtgtagata actacgatac
4261 gggagggctt accatctggc cccagtgctg caatgatacc gcgagaccca cgctcaccgg
4321 ctccagattt atcagcaata aaccagccag ccggaagggc cgagcgcaga agtggtcctg
4381 caactttatc cgcctccatc cagtctatta attgttgccg ggaagctaga gtaagtagtt
4441 cgccagttaa tagtttgcgc aacgttgttg ccattgctac aggcatcgtg gtgtcacgct
4501 cgtcgtttgg tatggcttca ttcagctccg gttcccaacg atcaaggcga gttacatgat
4561 cccccatgtt gtgcaaaaaa gcggttagct ccttcggtcc tccgatcgtt gtcagaagta
4621 agttggccgc agtgttatca ctcatggtta tggcagcact gcataattct cttactgtca
4681 tgccatccgt aagatgcttt tctgtgactg gtgagtactc aaccaagtca ttctgagaat
4741 agtgtatgcg gcgaccgagt tgctcttgcc cggcgtcaat acgggataat accgcgccac
4801 atagcagaac tttaaaagtg ctcatcattg gaaaacgttc ttcggggcga aaactctcaa
4861 ggatcttacc gctgttgaga tccagttcga tgtaacccac tcgtgcaccc aactgatctt
4921 cagcatcttt tactttcacc agcgtttctg ggtgagcaaa aacaggaagg caaaatgccg
4981 caaaaaaggg aataagggcg acacggaaat gttgaatact catactcttc ctttttcaat
5041 attattgaag catttatcag ggttattgtc tcatgagcgg atacatattt gaatgtattt
5101 agaaaaataa acaaataggg gttccgcgca catttccccg aaaagtgcca cctgacgtc
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P2376/pECMV-3×FLAG-MRP4(2364-3837bp)人源基因质粒 |
| P2377/pEGFP-C3-ATG5人源基因质粒 |
| P2412/pECMV-3×FLAG-MAPK15人源基因质粒 |
| P2413/pECMV-3×FLAG-MS4A3人源基因质粒 |
| P2414/pECMV-3×FLAG-C19orf36人源基因质粒 |
| P2415/pECMV-3×FLAG-TIGIT人源基因质粒 |
| P2416/pECMV-3×FLAG-STXBP1人源基因质粒 |
| P2417/pECMV-3×FLAG-HDAC7人源基因质粒 |
| P2418/pECMV-3×FLAG-CXCR4人源基因质粒 |
| P2961/pECMV-3×FLAG-GUCY2C人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
1、质粒的概念 质粒（Plasmid）是一种存在于细菌、酵母等微生物细胞中的小型环状双链 DNA 分子，能够独立于宿主染色体进行自我复制，并通常携带对宿主生存非必需但具有特定功能的基因（如抗生素抗性基因）。质粒是分子生物学和基因工程中最重要的工具之一。 质粒根据其用途可以分为多种不同的类型，如用于保存序列信息的克隆质粒（如：pUC 系列质粒），用于表达蛋白的质粒（如哺乳动物细胞表达所用的 pcDNA3.1 系列质粒），用于基因编辑的质粒（如哺乳动物细胞基因编辑所用的 espCas9-2A
上(即表达)荧光素酶，就可以用高敏感度的CCD相机进行对动物体内进行活体观察而不会伤害到动物本身。在荧光素酶中加入正确的萤光素底物就可以放出荧光，而发出的光子可以被光敏感元件，如萤光探测器或改进后的光学显微镜 探测到。这就使得对包括感染在内的多种生命活动进程进行观察成为可能。 荧光素酶分析可应用于启动子研究中分析顺式作用元件和反式作用因子、药物筛选、sirna 和miRNA筛选、分泌途径及蛋白定位报告基因检测、活细胞的实时动态研究、信号转导通路分析、难转染的细胞(包括干细胞和原代细胞)的研究
动物细胞表达载体包含原核序列、启动子、增强子、选择标记基因、终止子和多聚核苷酸信号等。 将外源基因导入哺乳动物细胞主要通过2类方法 ：一是感染性病毒颗粒感染宿主细胞，二是通过脂质体法、显微注射法 、磷酸钙共沉淀法及DEAE一葡聚糖法等非病毒载体的方式将基因导入到细胞中。外源基因的体外表达一般采用质粒表达载体，如将重组质粒导入CHO细胞可建立高效稳定的表达系统，而利用COS细胞可建立瞬时表达系统。目前，病毒载体已成为动物体内表达外源基因的有力工具，在临床基因治疗的探索中也发挥了重要作用。痘苗病毒由于其基因的分子量
pSecTag2A哺乳分泌质粒
￥100 - 1000
