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- Xybio
- 上海
- P0419
- 2025年07月14日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
Plasmid#50661
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pCW-Cas9哺乳编辑质粒
别称: Plasmid#50661
| 启动子: | TRE |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | Stbl3 |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞,慢病毒 |
|---|---|
| 载体用途： | 四环素诱导,基因敲除 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | CRISPR,Cas9 |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | Puro |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pCW-Cas9质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4840/pCIG-IDH1-R132H-EGFP人源基因质粒 |
| P2879/pSLIK-IDH2-R172K-FLAG人源基因质粒 |
| P3000/pECMV-3×FLAG-ISG15（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3001/pCDNA3.1-FURIN（1同义突变）人源基因质粒 |
| P4841/pCDNA3.1-MCL1人源基因质粒 |
| P3029/pLNCX2-MEN1人源基因质粒 |
| P3061/IKKalpha (S176ES180E)-pcw107-V5人源基因质粒 |
| P3110/pECMV-3×FLAG-SLC6A11人源基因质粒 |
| P3111/pECMV-3×FLAG-RGS2人源基因质粒 |
| P3112/pLVX-CDC42-HA-IRES-Neo人源基因质粒 |
| P3113/pECMV-3×FLAG-RAN人源基因质粒 |
| P3114/pECMV-3×FLAG-C1orf158人源基因质粒 |
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文献和实验Cell Rep：上海科技大学季泉江团队开发出高效微型 CRISPR-SpaCas12f1 基因编辑系统
CRISPR-Cas 系统是目前最常用的基因编辑工具，但是由于传统的 Cas 核酸酶分子量普遍太大，使其在在体基因治疗的应用中受限。近年来，为了解决这一难题，小的 Cas 核酸酶逐渐被发现和探究。其中，Cas12f 核酸酶是目前最紧凑的 CRISPR 效应核酸酶，比传统 Cas9 和 Cas12a 核酸酶小一半以上，在临床治疗应用中具有巨大潜力，然而高效的 Cas12f 基因编辑系统仍旧较少。 2022 年 9 月 27 日，上海科技大学季泉江教授团队在 Cell Reports 发表
诺奖得主 Science 发文：基因编辑诞生 10 年，未来将如何改变世界？
3D）。 目前，存在多种用于哺乳动物系统中 CRISPR 基因编辑的递送方式，广泛划分为进入物理递送、基于病毒的递送，以及基于合成材料的递送。常见的物理递送方法包括显微注射和电穿孔，允许控制剂量，效率递送高，但仅限于离体递送。基于病毒的递送方式包括腺病毒、腺相关病毒和慢病毒，它们以质粒 DNA 的形式通过载体传播，具有良好的效率。基于合成材料的递送方法更安全且有高水平的控制和灵活性，但其效率要低于病毒, 递送效率受到材料的体积和阳离子性质的限制，易导致间质分散不良。 因此，改进当前的递送
，从而诱导 CRISPR 结构通过这些空隙进入细胞中。在电脉冲撤离后，细胞恢复原有状态，这种物理学的方式并不影响细胞内部任何代谢及生理变化。BTX 电转和 CRISPR外源物质如何高效的进入目的细胞是进行表达修饰实验（CRISPR、基因编辑、基因工程）成功的关键。BTX 电穿孔系统由于它的易用性、重复性、高效率和低毒性，已经成为将 CRISPR 结构导入细胞（如哺乳动物细胞、细菌、酵母、植物、寄生虫等）的重要手段。使用 BTX 系统可进行多种类型转染；体外培养--贴壁细胞、悬浮细胞及原代细胞·在体·在卵
