2,6-二(2-吡啶基)-4(1H)-吡啶酮,128143-

DNA重组实验中常用的技术（二）

。 　　（6）测定DNA的含量。 　　（7）加入线性载体DNA和含量3～4倍于载体的待插入DNA片段，连接缓冲液及T4连接酶适量至总体积为20μl，在12～14℃反应12～16h。 　　（8）连接反应液可置-20℃保存，供转化用。 　　（9）关于待插入DNA片段的获得参见附注。 　　（二）大肠杆菌感受态的制备及重组DNA的转化 　　1．感受态的制备 　　（1）接种单菌落于2ml LB培养液中， 37℃过夜。 　　（2）取0.25ml过夜菌入

PCR技术（二）：PCR反应模板的制备

3～8ul 用于PCR扩增，或放-20℃保存. 　　蛋白酶K消化法除上述经典处理法外，亦可在蛋白K消化处理标本，经离心处理 后，吸取上清经95～97℃或煮沸10min灭活蛋白酶K后，直接作核酸模板用于PCR扩增. 如杂质较多，还可经酚:氯仿抽提后，即可用于PCR反应.此法蛋白质及其它杂质消除 彻底，Taq酶活性不受影响，具有良好的重复性与稳定性.但操作繁复，技术要求高. 　　(二)直接裂解法: 标本(组织细胞，分泌物)加PBS或生理盐水离心洗涤后，加消化 裂解液20～50

工业微生物产生菌的分离筛选（二）

既可根据底物的降解情况，也可通过微生物的生长情况确定。如在分离环己烷降解菌时，样品经环己烷为惟一碳源的培养基富集后，培养液由原来的无色变为浑浊的乳白色。同时锥行瓶壁上也可观察到微生物的生长情况。此时可以2%的接种量移入新鲜的富集培养基中继续培养。连续富集培养的方法虽耗时较长，有时甚至需要6～7个月，但效果较好。通过该方法分离DDT、甲基对硫磷（MP）及其他一些污染物的分解菌，也都取得了满意的结果。二、控制培养条件 在筛选某些微生物时，除通过培养基营养成分的选择外，还可通过它们对pH、温度及通气