pBS185 CMV-Cre同源重组质粒

基本信息
名称：pBS185 CMV-Cre同源重组质粒
别称: Plasmid#11916

启动子:	CMV
原核抗性:	Amp
克隆菌株:	DH5a
培养条件:	37度

质粒属性

载体宿主：	哺乳细胞
载体用途：	基因敲除
基因种属：
基因类型：	Cre
原核抗性：	Amp
真核抗性：
荧光蛋白：

质粒简介
 pBS185 CMV-Cre同源重组质粒

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                6919 bp ds-DNA     circular SYN 17-JUL-2018
DEFINITION  synthetic circular DNA
KEYWORDS    pBS185 CMV-Cre
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 6919)
  TITLE     Direct Submission
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..6919
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     CDS             complement(2683..3714)
                     /codon_start=1
                     /product="site-specific recombinase"
                     /note="Cre"
                     /note="Cre is a site-specific recombinase from 
                     bacteriophage P1. Recombination occurs at loxP sequences."
                     /translation="MSNLLTVHQNLPALPVDATSDEVRKNLMDMFRDRQAFSEHTWKML
                     LSVCRSWAAWCKLNNRKWFPAEPEDVRDYLLYLQARGLAVKTIQQHLGQLNMLHRRSGL
                     PRPSDSNAVSLVMRRIRKENVDAGERAKQALAFERTDFDQVRSLMENSDRCQDIRNLAF
                     LGIAYNTLLRIAEIARIRVKDISRTDGGRMLIHIGRTKTLVSTAGVEKALSLGVTKLVE
                     RWISVSGVADDPNNYLFCRVRKNGVAAPSATSQLSTRALEGIFEATHRLIYGAKDDSGQ
                     RYLAWSGHSARVGAARD-MARAGVSIPEIMQAGGWTNVNIVMNYIRNLDSETGAMVRLLE
                     DGD"
     promoter        complement(3855..4058)
                     /note="CMV promoter"
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                     promoter"
     enhancer        4059..4438
                     /note="CMV enhancer"
                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
     promoter        5014..5118
                     /gene="bla"
                     /note="AmpR promoter"
     CDS             5119..5979
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /note="AmpR"
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     rep_origin      6150..6738
                     /direction=RIGHT
                     /note="ori"
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
ORIGIN
        1 agcgcccaat acgcaaaccg cctctccccg cgcgttggcc gattcattaa tgcagctggc
       61 acgacaggtt tcccgactgg aaagcgggca gtgagcgcaa cgcaattaat gtgagttagc
      121 tcactcatta ggcaccccag gctttacact ttatgcttcc ggctcgtatg ttgtgtggaa
      181 ttgtgagcgg ataacaattt cacacaggaa acagctatga catgattacg aattcgagct
      241 cggtaccctc gaccaattcc tggccttcct gctgctacat ctcaaatatc ttgattacag
      301 gcaggaccca cgctctttat cacttttttt tccatctttt tttttttgga tattttcttc
      361 gtttatattt caaatgctat cccaaaagtc ccctataccc cacccctacc cccaccccgc
      421 tcccctaccc actcactccc acttcttggc cctggctttc ccctgaactg gggcatatag
      481 tttgctagac caagggtcct ctcttcccag tgatggccaa ctaggccatc ttctgctaca
      541 tacgaagcta gatacacgag ttcagggggt actggttagt tcagattgct gttccaccta
      601 tagggttgca gatcccttta gctccttggg tactttctct agctcctcca ttgggggccc
      661 tgtgttccat ccaatagctg actgtgagca tccacttctg tgtttgctgg gcactggcaa
      721 agcctcacag gagacagctt tatcagggtc ctttcagcaa aatcttgatg gcatatgcaa
      781 tagtgtctgc atttggtggc tgaataggag atggcctggt gacacagtca ctcctgtaat
      841 cccaggtact tgggaagctg aggcaggaga atcaaaaact caaggtcaga ctggactgca
      901 gaatgagttc taggacaagg taagcaactt gtgtcaaaac agccaagaaa gcccctctgg
      961 aatctagttc agtgttagtc cctgcctagc atacgagaca ccctatgtta attttcatac
     1021 ccacctcctt atacccaaca atgtgagagg aaaccagaat ccaaagagaa tataaatgat
     1081 aagattttct gtgcttccag gatgggacat caagtcttcc aggaccaccc tccctccctc
     1141 ccttccccta acacaagacc tgaccaggca cacagctgtt ttccatgagg aagcttatgg
     1201 gatagcttgg ctttacccaa agacattacc cctctgtgag ggccagaggc gggaggtaaa
     1261 ggcacgaggg ggtccaaaac cagatcccca gactatcaag tcaccccagt ttcttattgc
     1321 caaaccacac caagaaaacc agagttagac tcaaacaggc ttttattatt cacgtactcg
     1381 gtagaaaacg ggggtttagt aaacagggtg gaactgtata ggaagacgct gggttggtcc
     1441 gatactattt acacgtggtg gcagcgctgt tcgtcacatc aggcacagca cgtgcacttg
     1501 tccgcggcgc ctttgcagac acagccctgg gcacatttgg agcagcccac gggacagcag
     1561 gagcagcagc ctagaaagga ggaggaagag gtcagcctgg ctgaagacct ctgcttcctg
     1621 tccccaacag agaagacctc ggttttttta aatagttctc tgtatagttc tgtccccgag
     1681 acaatacaat ggcctccggg aagcaaagga catttctcag agccagtttt gtaggagttc
     1741 cccgccccta gccttagccg ccacccaagg tgtcccaact cactcttctt gcaggaggtg
     1801 cacttgcagt tcttgcaggc gcaggagctg gtgcaagtgc aggagccgcc tggggaggag
     1861 aaagaagaca gcatgaggga ggcagcatta cagcagtggc caacaccacg agtcccggct
     1921 cagttcacta agtcctcctc ggagctgcag ggagcctagc cccacttttc tcctcacagg
     1981 ttaagtcagg gattatgtct ttgagtccca agacataaag gtccttcacc tctttcttaa
     2041 ttcaagcaat tcacagtaag tttagtaatg cctgggactc aacccagatg tccccactaa
     2101 ctgggtgatc aggaaccgga catttgcgcg tctaaatcct agccccaacc ccgccaaagg
     2161 acccgttcga caatactcgt aactaatgaa ggcttttgca agagcggatt ctagaaagaa
     2221 ccggaatgaa tcgccaacta aaggtgccta ttcccgccaa gcctctacaa ctcggggatt
     2281 ccgctctgcg gtcccaactt ggtattctaa agaccaagga tcgggagtct taccggtgga
     2341 gcaggagcag ttggggtcca ttccgagatc cctcgacaat tccaacctta cccaagagtt
     2401 cgccaaactc agacatcact ttagcaaaac cgcgccgtgc ttcttcctcg gtggcattca
     2461 tcacgaaatg ttcagcacta cgcatacttt tgacaggaaa cgcaacggat attgagtcaa
     2521 tatcaggcat tctatcgctc agctttacag tgacaatgac ggctggcgac tgaatattag
     2581 tgcttacaga cagcactaca tattttccgt cgatgttgaa atcctttctc atatgtcacc
     2641 ataaatatca aataattata gcaatcattt acgcgttaat ggctaatcgc catcttccag
     2701 caggcgcacc attgcccctg tttcactatc caggttacgg atatagttca tgacaatatt
     2761 tacattggtc cagccaccag cttgcatgat ctccggtatt gaaactccag cgcgggccat
     2821 atctcgcgcg gctccgacac gggcactgtg tccagaccag gccaggtatc tctgaccaga
     2881 gtcatcctta gcgccgtaaa tcaatcgatg agttgcttca aaaatccctt ccagggcgcg
     2941 agttgatagc tggctggtgg cagatggcgc ggcaacacca ttttttctga cccggcaaaa
     3001 caggtagtta ttcggatcat cagctacacc agagacggaa atccatcgct cgaccagttt
     3061 agttaccccc aggctaagtg ccttctctac acctgcggtg ctaaccagcg ttttcgttct
     3121 gccaatatgg attaacattc tcccaccgtc agtacgtgag atatctttaa ccctgatcct
     3181 ggcaatttcg gctatacgta acagggtgtt ataagcaatc cccagaaatg ccagattacg
     3241 tatatcctgg cagcgatcgc tattttccat gagtgaacga acctggtcga aatcagtgcg
     3301 ttcgaacgct agagcctgtt ttgcacgttc accggcatca acgttttctt ttcggatccg
     3361 ccgcataacc agtgaaacag cattgctgtc acttggtcgt ggcagcccgg accgacgatg
     3421 aagcatgttt agctggccca aatgttgctg gatagttttt actgccagac cgcgcgcctg
     3481 aagatataga agataatcgc gaacatcttc aggttctgcg ggaaaccatt tccggttatt
     3541 caacttgcac catgccgccc acgaccggca aacggacaga agcattttcc aggtatgctc
     3601 agaaaacgcc tggcgatccc tgaacatgtc catcaggttc ttgcgaacct catcactcgt
     3661 tgcatcgacc ggtaatgcag gcaaattttg gtgtacggtc agtaaattgg acatttcaca
     3721 ctcagataat ggttttaagt aaagtgtaca ggatcggctc tgcccctcga ggggatcctc
     3781 tagagtcggt gtcttctatg gaggtcaaaa cagcgtggat ggcgtctcca ggcgatctga
     3841 cggttcacta aacgagctct gcttatatag acctcccacc gtacacgcct accgcccatt
     3901 tgcgtcaatg gggcggagtt gttacgacat tttggaaagt cccgttgatt ttggtgccaa
     3961 aacaaactcc cattgacgtc aatggggtgg agacttggaa atccccgtga gtcaaaccgc
     4021 tatccacgcc cattgatgta ctgccaaaac cgcatcacca tggtaatagc gatgactaat
     4081 acgtagatgt actgccaagt aggaaagtcc cataaggtca tgtactgggc ataatgccag
     4141 gcgggccatt taccgtcatt gacgtcaata gggggcgtac ttggcatatg atacacttga
     4201 tgtactgcca agtgggcagt ttaccgtaaa tactccaccc attgacgtca atggaaagtc
     4261 cctattggcg ttactatggg aacatacgtc attattgacg tcaatgggcg ggggtcgttg
     4321 ggcggtcagc caggcgggcc atttaccgta agttatgtaa cgcggaactc catatatggg
     4381 ctatgaacta atgaccccgt aattgattac tattaataac tagtcaataa tcaatgtcaa
     4441 catggcggta atgttggaca tgagccaata taaatgtaca tattatgata tggatacaac
     4501 gtatgcaatg ggccaagctt ggcactggcc gtcgttttac aacgtcgtga ctgggaaaac
     4561 cctggcgtta cccaacttaa tcgccttgca gcacatcccc ctttcgccag ctggcgtaat
     4621 agcgaagagg cccgcaccga tcgcccttcc caacagttgc gcagcctgaa tggcgaatgg
     4681 cgcctgatgc ggtattttct ccttacgcat ctgtgcggta tttcacaccg catatggtgc
     4741 actctcagta caatctgctc tgatgccgca tagttaagcc agccccgaca cccgccaaca
     4801 cccgctgacg cgccctgacg ggcttgtctg ctcccggcat ccgcttacag acaagctgtg
     4861 accgtctccg ggagctgcat gtgtcagagg ttttcaccgt catcaccgaa acgcgcgaga
     4921 cgaaagggcc tcgtgatacg cctattttta taggttaatg tcatgataat aatggtttct
     4981 tagacgtcag gtggcacttt tcggggaaat gtgcgcggaa cccctatttg tttatttttc
     5041 taaatacatt caaatatgta tccgctcatg agacaataac cctgataaat gcttcaataa
     5101 tattgaaaaa ggaagagtat gagtattcaa catttccgtg tcgcccttat tccctttttt
     5161 gcggcatttt gccttcctgt ttttgctcac ccagaaacgc tggtgaaagt aaaagatgct
     5221 gaagatcagt tgggtgcacg agtgggttac atcgaactgg atctcaacag cggtaagatc
     5281 cttgagagtt ttcgccccga agaacgtttt ccaatgatga gcacttttaa agttctgcta
     5341 tgtggcgcgg tattatcccg tattgacgcc gggcaagagc aactcggtcg ccgcatacac
     5401 tattctcaga atgacttggt tgagtactca ccagtcacag aaaagcatct tacggatggc
     5461 atgacagtaa gagaattatg cagtgctgcc ataaccatga gtgataacac tgcggccaac
     5521 ttacttctga caacgatcgg aggaccgaag gagctaaccg cttttttgca caacatgggg
     5581 gatcatgtaa ctcgccttga tcgttgggaa ccggagctga atgaagccat accaaacgac
     5641 gagcgtgaca ccacgatgcc tgtagcaatg gcaacaacgt tgcgcaaact attaactggc
     5701 gaactactta ctctagcttc ccggcaacaa ttaatagact ggatggaggc ggataaagtt
     5761 gcaggaccac ttctgcgctc ggcccttccg gctggctggt ttattgctga taaatctgga
     5821 gccggtgagc gtgggtctcg cggtatcatt gcagcactgg ggccagatgg taagccctcc
     5881 cgtatcgtag ttatctacac gacggggagt caggcaacta tggatgaacg aaatagacag
     5941 atcgctgaga taggtgcctc actgattaag cattggtaac tgtcagacca agtttactca
     6001 tatatacttt agattgattt aaaacttcat ttttaattta aaaggatcta ggtgaagatc
     6061 ctttttgata atctcatgac caaaatccct taacgtgagt tttcgttcca ctgagcgtca
     6121 gaccccgtag aaaagatcaa aggatcttct tgagatcctt tttttctgcg cgtaatctgc
     6181 tgcttgcaaa caaaaaaacc accgctacca gcggtggttt gtttgccgga tcaagagcta
     6241 ccaactcttt ttccgaaggt aactggcttc agcagagcgc agataccaaa tactgttctt
     6301 ctagtgtagc cgtagttagg ccaccacttc aagaactctg tagcaccgcc tacatacctc
     6361 gctctgctaa tcctgttacc agtggctgct gccagtggcg ataagtcgtg tcttaccggg
     6421 ttggactcaa gacgatagtt accggataag gcgcagcggt cgggctgaac ggggggttcg
     6481 tgcacacagc ccagcttgga gcgaacgacc tacaccgaac tgagatacct acagcgtgag
     6541 ctatgagaaa gcgccacgct tcccgaaggg agaaaggcgg acaggtatcc ggtaagcggc
     6601 agggtcggaa caggagagcg cacgagggag cttccagggg gaaacgcctg gtatctttat
     6661 agtcctgtcg ggtttcgcca cctctgactt gagcgtcgat ttttgtgatg ctcgtcaggg
     6721 gggcggagcc tatggaaaaa cgccagcaac gcggcctttt tacggttcct ggccttttgc
     6781 tggccttttg ctcacatgtt ctttcctgcg ttatcccctg attctgtgga taaccgtatt
     6841 accgcctttg agtgagctga taccgctcgc cgcagccgaa cgaccgagcg cagcgagtca
     6901 gtgagcgagg aagcggaag
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P3519/pCMV-SPORT6-APEX1（1点突变）人源基因质粒

P3520/pCMV-SPORT6-TMEM106C人源基因质粒

P3521/pCMV-SPORT6-LACTB2人源基因质粒

P3522/pCMV-SPORT6-TGIF1（1同义突变）人源基因质粒

P4288/pCMV-SPORT6-RBM8A人源基因质粒

P4289/pCMV-SPORT6-REG4人源基因质粒

P4290/pCMV-SPORT6-TSC22D1人源基因质粒

P4291/pCMV-SPORT6-PRICKLE3人源基因质粒

P4292/pCMV-SPORT6-DBP人源基因质粒

P4293/pCMV-SPORT6-SEMA4A人源基因质粒

P4294/pCMV-SPORT6-FAM192A人源基因质粒