2,4,5-三氨基-6-羟基嘧啶硫酸盐；35011-47-3

DNA甲基化研究方法的回顾与评价

化位点明确,实验结果易解释；缺点是：1.由于CG不仅仅限于CCGG序列中，因此非该序列中的CG将被忽略；2.只有检测与转录相关的关键性位点的甲基化状态时,该检测方法的结果才有意义；3.相对而言，Southern方法较复杂，且需要样本的量大；4.存在着酶不完全消化引起的假阳性的问题；5.不适用于混合样本。 2.2.2 直接测序法 直接测序是由Frommer等[25]提出的研究DNA甲基化方法。过程是：重亚硫酸盐使DNA中未发生甲基化的胞嘧啶脱氨基转变成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶保持不变（见图

DNA甲基化研究方法的回顾与评价(图)

甲基化的胞嘧啶脱氨基转变成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶保持不变（见图1），行PCR扩增所需片段,则尿嘧啶全部转化成胸腺嘧啶，最后,对PCR产物进行测序 并且与未经处理的序列比较,判断是否CpG位点发生甲基化。此方法是一种可靠性及精确度很高的方法，能明确目的片段中每一个CpG位点的甲基化状态，但需要大量的测序 ,过程较为繁琐、昂贵[27]。 图1：重亚硫酸盐处理过程示意图。DNA 经重亚硫酸盐处理后，甲基化的胞嘧啶不变，未甲基化的胞嘧啶转变为尿嘧啶2.2.3 甲基化特异性的PCR

降钙素原（PCT）的标准化

这样的做法，很具有特点。 三、BRAHMS建立的降钙素原一级校准品PTN47和新的第二代校准品PCT115 为了使公司降钙素原第一代产品（LUMItest PCT）确保对患者样品检测结果的持续可靠，在该第一代产品进入市场前，公司自行建立了降钙素原的一级参考制品-PTN47。 1、第一代参考物质PTN47 PTN47是一个合成多肽，仅47个氨基酸组成。这个多肽是完整降钙素原蛋白的一部分。它在BRAHMS的LUMItest PCT产品（2h）中，是PCT-标准的原始标准物质。对PCT