- ￥100 - 1000
- Xybio
- 上海
- P0977
- 2025年07月13日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pSuper-Puro
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pSuper-puro哺乳干扰质粒
别称: NM_001308090.1;HD7;HD7A;HDAC7A
| 启动子: | H1 |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | Puro |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 干扰沉默 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | shRNA |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | Puro |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pSuper-puro质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3324/pCMV-SPORT6-PSAT1（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3325/pCMV-SPORT6-MGMT人源基因质粒 |
| P3326/pCMV-SPORT6-PPIH人源基因质粒 |
| P3327/pCMV-SPORT6-PREB人源基因质粒 |
| P3328/pCMV-SPORT6-PPP5C人源基因质粒 |
| P3329/pCMV-SPORT6-TMEM33人源基因质粒 |
| P3330/pCMV-SPORT6-TNFRSF10B（2点突变）人源基因质粒 |
| P3331/pCMV-SPORT6-RAD1人源基因质粒 |
| P3332/pCMV-SPORT6-PAPOLA人源基因质粒 |
| P3333/pCMV-SPORT6-ZNF160（1点突变）人源基因质粒 |
| P3334/pCMV-SPORT6-SLX1A人源基因质粒 |
| P3335/pCMV-SPORT6-LY6K人源基因质粒 |
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文献和实验zhangcy2004问：细胞转染后建立稳转细胞系大多用G418来杀，可是这种抗生素的选择是根据什么来确定的呢？还可以用其他的抗生素吗？如果一个载体上有两个抗生素基因，氨苄青霉素和新霉素，那么建立稳转细胞系时该用哪种抗生素来杀细胞呢？刚结束这方面的知识，不甚了解，恳请高手指点迷津！非常感谢！丁香园网友alfredyu2004认为：虽然我也是不是太清楚，但是应该看转染是细菌还是细胞氨苄青霉素是来选细菌的，大肠杆菌。新霉素是选细胞的，哺乳动物细胞。丁香园网友wangbadan认为：标有neo（实际
清楚，但是应该看转染 是细菌还是细胞 氨苄青霉素是来选细菌 的，大肠杆菌。 新霉素是选细胞的，哺乳动物 细胞。 wangbadan认为： 标有neo(实际上应该是neo resistance)的载体，指载有降解新霉素的基因，新霉素作用于原核和真核细胞，对两者都有杀伤作用。用于转染后，稳定表达外源基因细胞的阳性筛选。 标有amp(实际上应该是amp resistance)的载体，指载有降解氨苄青霉素的基因(β-内酰胺酶)，作用于原核
)信号转导途径的同时，有效抑制人胚肾293细胞、Hela细胞等哺乳动物细胞中目的基因的表达。2002年，Brummelkamp等首次使用小鼠H1启动子构建了小发卡RNA （smallhairpinRNA ，shRNA ）表达载体pSUPER，并证实转染该载体可有效、特异性地剔除哺乳动物细胞内目的基因的表达，为利用RNA i技术进行基因治疗研究奠定了基础。
