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pcDNA3.1-Laconic乳酸传感质粒

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  • Xybio
  • 上海
  • P0722
  • 2025年07月15日
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    • 详细信息
    • 文献和实验
    • 技术资料
    • 保存条件

      -20

    • 保质期

      2年

    • 英文名

      pCDNA3.1-Laconic

    • 库存

      100

    • 供应商

      上海烜雅生物科技有限公司

    • 规格

      干粉/液体

    基本信息
    名称:pcDNA3.1-Laconic乳酸传感质粒
    别称: pCDNA3.1-Laconic
    启动子: CMV
    复制子: pUC
    终止子: SV40 poly(A) signal,bGH poly(A) signal
    质粒分类: 哺乳细胞,乳酸生物传感器
    质粒大小: 7648bp
    原核抗性: Amp
    筛选标记: G418
    克隆菌株: DH5a
    培养条件: 37度
    表达宿主: 哺乳细胞
    诱导方式: 无须诱导,瞬时表达
    5'测序引物: CMV-F:CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG
    3'测序引物: BGH:TAGAAGGCACAGTCGAGG

    质粒属性
    载体宿主: 哺乳细胞
    载体用途: 蛋白表达
    基因种属:  
    基因类型: ORF
    原核抗性: Amp
    真核抗性: Neo/G418
    荧光蛋白:


    质粒简介
      Lactate is shuttled between and inside cells, playing metabolic and signaling roles in healthy tissues. Lactate is also a harbinger of altered metabolism and participates in the pathogenesis of inflammation, hypoxia/ischemia, neurodegeneration and cancer. Many tumor cells show high rates of lactate production in the presence of oxygen, a phenomenon known as the Warburg effect, which has diagnostic and possibly therapeutic implications. In this article we introduce Laconic, a genetically-encoded Forster Resonance Energy Transfer (FRET)-based lactate sensor designed on the bacterial transcription factor LldR. Laconic quantified lactate from 1 µM to 10 mM and was not affected by glucose, pyruvate, acetate, 
    产品细节图片1
    质粒图谱

    产品细节图片2

    质粒序列
    LOCUS       Exported                7648 bp ds-DNA     circular SYN 05-SEP-2016
    DEFINITION  synthetic circular DNA
    ACCESSION   .
    VERSION     .
    KEYWORDS    Untitled
    SOURCE      synthetic DNA construct
      ORGANISM  synthetic DNA construct
    REFERENCE   1  (bases 1 to 7648)
      AUTHORS   .
      TITLE     Direct Submission
      JOURNAL   Exported Monday, September 5, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
                http://www.miaolingbio.com
    FEATURES             Location/Qualifiers
         source          1..7648
                         /organism="synthetic DNA construct"
                         /mol_type="other DNA"
         enhancer        235..614
                         /note="CMV enhancer"
                         /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
         promoter        615..818
                         /note="CMV promoter"
                         /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                         promoter"
         promoter        863..881
                         /note="T7 promoter"
                         /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
         CDS             987..1694
                         /codon_start=1
                         /product="monomeric teal (cyan) fluorescent protein (Ai et 
                         al., 2006)"
                         /note="mTFP1"
                         /note="mammalian codon-optimized"
                         /translation="MVSKGEETTMGVIKPDMKIKLKMEGNVNGHAFVIEGEGEGKPYDG
                         TNTINLEVKEGAPLPFSYDILTTAFAYGNRAFTKYPDDIPNYFKQSFPEGYSWERTMTF
                         EDKGIVKVKSDISMEEDSFIYEIHLKGENFPPNGPVMQKKTTGWDASTERMYVRDGVLK
                         GDVKHKLLLEGGGHHRVDFKTIYRAKKAVKLPDYHFVDHRIEILNHDKDYNKVTVYESA
                         VARNSTDGMDELYK"
         CDS             2496..3215
                         /codon_start=1
                         /product="Venus YFP with monomerizing A206K mutation (Nagai
                         et al., 2002)"
                         /note="mVenus"
                         /note="mammalian codon-optimized"
                         /translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
                         KLICTTGKLPVPWPTLVTTLGYGLQCFARYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
                         GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYITADKQKNGIK
                         ANFKIRHNIEDGGVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSYQSALSKDPNEKRDHMVLL
                         EFVTAAGITLGMDELYK"
         polyA_signal    3248..3472
                         /note="bGH poly(A) signal"
                         /note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
         rep_origin      3518..3946
                         /direction=RIGHT
                         /note="f1 ori"
                         /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 
                         indicates direction of (+) strand synthesis"
         promoter        3960..4289
                         /note="SV40 promoter"
                         /note="SV40 enhancer and early promoter"
         rep_origin      4140..4275
                         /note="SV40 ori"
                         /note="SV40 origin of replication"
         CDS             4356..5150
                         /codon_start=1
                         /gene="aph(3')-II (or nptII)"
                         /product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
                         /note="NeoR/KanR"
                         /note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418 
                         (Geneticin(R))"
                         /translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
                         VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
                         SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATC-PFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
                         GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
                         LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
         polyA_signal    5324..5445
                         /note="SV40 poly(A) signal"
                         /note="SV40 polyadenylation signal"
         primer_bind     complement(5494..5510)
                         /note="M13 rev"
                         /note="common sequencing primer, one of multiple similar 
                         variants"
         protein_bind    5518..5534
                         /bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
                         /note="lac operator"
                         /note="The lac repressor binds to the lac operator to 
                         inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be 
                         relieved by adding lactose or 
                         isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
         promoter        complement(5542..5572)
                         /note="lac promoter"
                         /note="promoter for the E. coli lac operon"
         protein_bind    5587..5608
                         /bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
                         /note="CAP binding site"
                         /note="CAP binding activates transcription in the presence 
                         of cAMP."
         rep_origin      complement(5896..6481)
                         /direction=LEFT
                         /note="ori"
                         /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                         replication"
         CDS             complement(6652..7512)
                         /codon_start=1
                         /gene="bla"
                         /product="beta-lactamase"
                         /note="AmpR"
                         /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                         related antibiotics"
                         /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                         ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                         PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                         EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                         LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                         LIKHW"
         promoter        complement(7513..7617)
                         /gene="bla"
                         /note="AmpR promoter"
    ORIGIN
            1 gacggatcgg gagatctccc gatcccctat ggtgcactct cagtacaatc tgctctgatg
           61 ccgcatagtt aagccagtat ctgctccctg cttgtgtgtt ggaggtcgct gagtagtgcg
          121 cgagcaaaat ttaagctaca acaaggcaag gcttgaccga caattgcatg aagaatctgc
          181 ttagggttag gcgttttgcg ctgcttcgcg atgtacgggc cagatatacg cgttgacatt
          241 gattattgac tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata
          301 tggagttccg cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc
          361 cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc
          421 attgacgtca atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt
          481 atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt
          541 atgcccagta catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca
          601 tcgctattac catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg
          661 actcacgggg atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc
          721 aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg
          781 gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa gcagagctct ctggctaact agagaaccca
          841 ctgcttactg gcttatcgaa attaatacga ctcactatag ggagacccaa gctggctagc
          901 gtttaaacgg gccctctaga ctcgagcggc cgccactgtg ctggatatct gcagaattcc
          961 accacactgg actagtggat ccgaacatgg tgagcaaggg cgaggagacc acaatgggcg
         1021 taatcaagcc cgacatgaag atcaagctga agatggaggg caacgtgaat ggccacgcct
         1081 tcgtgatcga gggcgagggc gagggcaagc cctacgacgg caccaacacc atcaacctgg
         1141 aggtgaagga gggagccccc ctgcccttct cctacgacat tctgaccacc gcgttcgcct
         1201 acggcaacag ggccttcacc aagtaccccg acgacatccc caactacttc aagcagtcct
         1261 tccccgaggg ctactcttgg gagcgcacca tgaccttcga ggacaagggc atcgtgaagg
         1321 tgaagtccga catctccatg gaggaggact ccttcatcta cgagatacac ctcaagggcg
         1381 agaacttccc ccccaacggc cccgtgatgc agaagaagac caccggctgg gacgcctcca
         1441 ccgagaggat gtacgtgcgc gacggcgtgc tgaagggcga cgtcaagcac aagctgctgc
         1501 tggagggcgg cggccaccac cgcgttgact tcaagaccat ctacagggcc aagaaggcgg
         1561 tgaagctgcc cgactatcac tttgtggacc accgcatcga gatcctgaac cacgacaagg
         1621 actacaacaa ggtgaccgtt tacgagagcg ccgtggcccg caactccacc gacggcatgg
         1681 acgagctgta caagagatct ggtaccatga ttgttttacc cagacgcctg tcagacgagg
         1741 ttgccgatcg tgtgcgggcg ctgattgatg aaaaaaacct ggaagcgggc atgaagttgc
         1801 ccgctgagcg ccaactggcg atgcaactcg gcgtatcacg taattcactg cgcgaggcgc
         1861 tggcaaaact ggtgagtgaa ggcgtgctgc tcagtcgacg cggcggcggg acgtttattc
         1921 gctggcgtca tgacacatgg tcggagcaaa acatcgtcca gccgctaaaa acactgatgg
         1981 ccgatgatcc ggattacagt ttcgatattc tggaagcccg ctacgccatt gaagccagca
         2041 ccgcatggca tgcggcaatg cgcgccacac ctggcgacaa agaaaagatt cagctttgct
         2101 ttgaagcaac gctaagtgaa gacccggata tcgcctcaca agcggacgtt cgttttcatc
         2161 tggcgattgc cgaagcctca cataacatcg tgctgctgca aaccatgcgc ggtttcttcg
         2221 atgtcctgca atcctcagtg aagcatagcc gtcagcggat gtatctggtg ccaccggttt
         2281 tttcacaact gaccgaacaa catcaggctg tcattgacgc catttttgcc ggtgatgctg
         2341 acggggcgcg taaagcaatg atggcgcacc ttagttttgt tcacaccacc atgaaacgat
         2401 tcgatgaaga tcaggctcgc cacgcacgga ttacccgcct gcccggtgag cataatgagc
         2461 attcgaggga gaaaaacgca cttaagagat ctaccatggt gagcaagggc gaggagctgt
         2521 tcaccggggt ggtgcccatc ctggtcgagc tggacggcga cgtaaacggc cacaagttca
         2581 gcgtgtccgg cgagggcgag ggcgatgcca cctacggcaa gctgaccctg aagctgatct
         2641 gcaccaccgg caagctgccc gtgccctggc ccaccctcgt gaccaccctg ggctacggcc
         2701 tgcagtgctt cgcccgctac cccgaccaca tgaagcagca cgacttcttc aagtccgcca
         2761 tgcccgaagg ctacgtccag gagcgcacca tcttcttcaa ggacgacggc aactacaaga
         2821 cccgcgccga ggtgaagttc gagggcgaca ccctggtgaa ccgcatcgag ctgaagggca
         2881 tcgacttcaa ggaggacggc aacatcctgg ggcacaagct ggagtacaac tacaacagcc
         2941 acaacgtcta tatcaccgcc gacaagcaga agaacggcat caaggccaac ttcaagatcc
         3001 gccacaacat cgaggacggc ggcgtgcagc tcgccgacca ctaccagcag aacaccccca
         3061 tcggcgacgg ccccgtgctg ctgcccgaca accactacct gagctaccag tccgccctga
         3121 gcaaagaccc caacgagaag cgcgatcaca tggtcctgct ggagttcgtg accgccgccg
         3181 ggatcactct cggcatggac gagctgtaca agtaaaagct taagtttaaa ccgctgatca
         3241 gcctcgactg tgccttctag ttgccagcca tctgttgttt gcccctcccc cgtgccttcc
         3301 ttgaccctgg aaggtgccac tcccactgtc ctttcctaat aaaatgagga aattgcatcg
         3361 cattgtctga gtaggtgtca ttctattctg gggggtgggg tggggcagga cagcaagggg
         3421 gaggattggg aagacaatag caggcatgct ggggatgcgg tgggctctat ggcttctgag
         3481 gcggaaagaa ccagctgggg ctctaggggg tatccccacg cgccctgtag cggcgcatta
         3541 agcgcggcgg gtgtggtggt tacgcgcagc gtgaccgcta cacttgccag cgccctagcg
         3601 cccgctcctt tcgctttctt cccttccttt ctcgccacgt tcgccggctt tccccgtcaa
         3661 gctctaaatc gggggctccc tttagggttc cgatttagtg ctttacggca cctcgacccc
         3721 aaaaaacttg attagggtga tggttcacgt agtgggccat cgccctgata gacggttttt
         3781 cgccctttga cgttggagtc cacgttcttt aatagtggac tcttgttcca aactggaaca
         3841 acactcaacc ctatctcggt ctattctttt gatttataag ggattttgcc gatttcggcc
         3901 tattggttaa aaaatgagct gatttaacaa aaatttaacg cgaattaatt ctgtggaatg
         3961 tgtgtcagtt agggtgtgga aagtccccag gctccccagc aggcagaagt atgcaaagca
         4021 tgcatctcaa ttagtcagca accaggtgtg gaaagtcccc aggctcccca gcaggcagaa
         4081 gtatgcaaag catgcatctc aattagtcag caaccatagt cccgccccta actccgccca
         4141 tcccgcccct aactccgccc agttccgccc attctccgcc ccatggctga ctaatttttt
         4201 ttatttatgc agaggccgag gccgcctctg cctctgagct attccagaag tagtgaggag
         4261 gcttttttgg aggcctaggc ttttgcaaaa agctcccggg agcttgtata tccattttcg
         4321 gatctgatca agagacagga tgaggatcgt ttcgcatgat tgaacaagat ggattgcacg
         4381 caggttctcc ggccgcttgg gtggagaggc tattcggcta tgactgggca caacagacaa
         4441 tcggctgctc tgatgccgcc gtgttccggc tgtcagcgca ggggcgcccg gttctttttg
         4501 tcaagaccga cctgtccggt gccctgaatg aactgcagga cgaggcagcg cggctatcgt
         4561 ggctggccac gacgggcgtt ccttgcgcag ctgtgctcga cgttgtcact gaagcgggaa
         4621 gggactggct gctattgggc gaagtgccgg ggcaggatct cctgtcatct caccttgctc
         4681 ctgccgagaa agtatccatc atggctgatg caatgcggcg gctgcatacg cttgatccgg
         4741 ctacctgccc attcgaccac caagcgaaac atcgcatcga gcgagcacgt actcggatgg
         4801 aagccggtct tgtcgatcag gatgatctgg acgaagagca tcaggggctc gcgccagccg
         4861 aactgttcgc caggctcaag gcgcgcatgc ccgacggcga ggatctcgtc gtgacccatg
         4921 gcgatgcctg cttgccgaat atcatggtgg aaaatggccg cttttctgga ttcatcgact
         4981 gtggccggct gggtgtggcg gaccgctatc aggacatagc gttggctacc cgtgatattg
         5041 ctgaagagct tggcggcgaa tgggctgacc gcttcctcgt gctttacggt atcgccgctc
         5101 ccgattcgca gcgcatcgcc ttctatcgcc ttcttgacga gttcttctga gcgggactct
         5161 ggggttcgaa atgaccgacc aagcgacgcc caacctgcca tcacgagatt tcgattccac
         5221 cgccgccttc tatgaaaggt tgggcttcgg aatcgttttc cgggacgccg gctggatgat
         5281 cctccagcgc ggggatctca tgctggagtt cttcgcccac cccaacttgt ttattgcagc
         5341 ttataatggt tacaaataaa gcaatagcat cacaaatttc acaaataaag catttttttc
         5401 actgcattct agttgtggtt tgtccaaact catcaatgta tcttatcatg tctgtatacc
         5461 gtcgacctct agctagagct tggcgtaatc atggtcatag ctgtttcctg tgtgaaattg
         5521 ttatccgctc acaattccac acaacatacg agccggaagc ataaagtgta aagcctgggg
         5581 tgcctaatga gtgagctaac tcacattaat tgcgttgcgc tcactgcccg ctttccagtc
         5641 gggaaacctg tcgtgccagc tgcattaatg aatcggccaa cgcgcgggga gaggcggttt
         5701 gcgtattggg cgctcttccg cttcctcgct cactgactcg ctgcgctcgg tcgttcggct
         5761 gcggcgagcg gtatcagctc actcaaaggc ggtaatacgg ttatccacag aatcagggga
         5821 taacgcagga aagaacatgt gagcaaaagg ccagcaaaag gccaggaacc gtaaaaaggc
         5881 cgcgttgctg gcgtttttcc ataggctccg cccccctgac gagcatcaca aaaatcgacg
         5941 ctcaagtcag aggtggcgaa acccgacagg actataaaga taccaggcgt ttccccctgg
         6001 aagctccctc gtgcgctctc ctgttccgac cctgccgctt accggatacc tgtccgcctt
         6061 tctcccttcg ggaagcgtgg cgctttctca tagctcacgc tgtaggtatc tcagttcggt
         6121 gtaggtcgtt cgctccaagc tgggctgtgt gcacgaaccc cccgttcagc ccgaccgctg
         6181 cgccttatcc ggtaactatc gtcttgagtc caacccggta agacacgact tatcgccact
         6241 ggcagcagcc actggtaaca ggattagcag agcgaggtat gtaggcggtg ctacagagtt
         6301 cttgaagtgg tggcctaact acggctacac tagaagaaca gtatttggta tctgcgctct
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    质粒菌株产品操作说明书
    一、扩增流程
             收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
             1、质粒干粉(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
                  收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒;
                  1100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42热激60s,不要搅动,再冰浴2min;(从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作)
                  加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37培养45min
                  6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;(可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布,可以比传统涂布方法获得更多转化子)
                  将平板正向培养1h,再倒置37培养14h。如果要求是30度则培养20h
    (菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态,要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态)
                  挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
            2、甘油菌种(冰袋运输,存于-80,保质期90天,请务必划线挑单克隆培养)
                  四区划线后挑单菌落培养,酵母菌需要先液体复苏再四区划线,再挑单菌落液体培养。
            3、穿刺菌种(冰袋运输,存于4,保质期7天)
                  穿刺接种,液体培养后四区划线,再挑单菌落液体培养。
            4、菌落平板(冰袋运输,存于4,保质期7天)
                  直接挑取单菌落至液体培养基中。
            5、液体质粒(冰袋运输,存于-20,保质期90天)
                  单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
            6、滤纸质粒(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
                  收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中,加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min,吸取5ul质粒转化,离心全涂。

    二、转化图片
    产品细节图片3
    产品细节图片4
    P3274/pCMV-SPORT6-XBP1人源基因质粒
    P3275/pCMV-SPORT6-ICA1L人源基因质粒
    P3276/pCMV-SPORT6-TNFAIP1人源基因质粒
    P3277/pCMV-SPORT6-CCDC22(1同义突变)人源基因质粒
    P3278/pCMV-SPORT6-TCF25(1同义突变)人源基因质粒
    P3279/pCMV-SPORT6-STAP2(1点突变1同义突变)人源基因质粒
    P3280/pCMV-SPORT6-YPEL5人源基因质粒
    P3281/pCMV-SPORT6-LIMA1(294-2280)人源基因质粒
    P3282/pCMV-SPORT6-CDK7人源基因质粒
    P3283/pCMV-SPORT6-COMMD4人源基因质粒
    P3284/pCMV-SPORT6-H1F0人源基因质粒

     

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