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无锡云萃生物
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2227206-68-8
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云萃
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文献和实验[原理] DNA是通过异羟基洋地黄毒苷（digoxigenin，Dig）配基标记的脱氧尿嘧啶核苷三磷酸（dUTP）随机插入结合而被标记。dUTP通过间臂连结类固醇半抗原异羟基洋地黄毒苷酸基，形成Dig-dUTP，杂交反应后，杂交的靶DNA通过酶联免疫法与一个抗体复合物[抗异羟基洋地黄毒苷配基碱性磷酸酶复合物（Dig）Ap]结合，接着在5-溴-4氯-3-吲哚磷酸盐（X-磷酸盐）和硝基四氮唑蓝（NBT）存在下，由酶催化反应，在杂交部位形成蓝紫色带或颗粒。 ［操作］ 1．转移 通过打点吸渍
标记前,应使用苯酚、氯仿抽提DNA 模板。此外,对于随机引物标记DNA 的方法而言,在标记反应之前,先将模板线性化并加热变性是至关重要的;而对寡核苷酸来说,在其3' 末端加上DIG-11-dUTP 的尾巴前,应该先经过凝胶或HPLC 纯化。 3 杂交技术 使用地高辛标记的核酸探针进行分子杂交,其杂交动力学、杂交条件与放射性同位素标记的探针相似。探针的性质不同,杂交温度和时间也不同:DNAP不含甲酰胺:杂交温度为68 ℃,时间≥6h ;DNAP含50 %甲酰胺:杂交温度为42 ℃
方法】把770g乙酸酰溶解于800ml水中，加水定容至1L后过滤除菌。 6．10%过硫酸铵溶液 【配制方法】把1g过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中，该溶液可在4℃保存数周。 7．BCIP溶液 【配制方法】把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二钠盐（BCIP）溶解于10ml 100%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃ 8．2×BES缓冲盐溶液 【配制方法】用总体积90ml的蒸馏水溶解1.07g盐溶液BES[N，N-双（2-羟乙基）-2-氨基乙磺酸]、1.6g
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