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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20
- 保质期:
2年
- 英文名:
pGL4.18[luc2P-Neo]
- 库存:
100
- 供应商:
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格:
干粉/液体
名称:pGL4.18[luc2P-Neo]哺乳报告质粒
别称: pGL4.18[luc2P-Neo]
| 复制子: | pUC |
|---|---|
| 质粒分类: | 哺乳细胞载体;信号通路报告质粒 |
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | G418 |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主: | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途: | 启动子检测 |
| 基因种属: | 空载体 |
| 基因类型: | Promoter |
| 原核抗性: | Amp |
| 真核抗性: | Neo/G418 |
| 荧光蛋白: | fLuc |
质粒简介
pGL4.18[luc2P-Neo]质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列:详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒;
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;(从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作)
③加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min;
④6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;(可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布,可以比传统涂布方法获得更多转化子)
⑤将平板正向培养1h,再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h;
(菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态,要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态)
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种(冰袋运输,存于-80℃,保质期90天,请务必划线挑单克隆培养)
四区划线后挑单菌落培养,酵母菌需要先液体复苏再四区划线,再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
穿刺接种,液体培养后四区划线,再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒(冰袋运输,存于-20℃,保质期90天)
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中,加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min,吸取5ul质粒转化,离心全涂。
二、转化图片
| P3224/pENTR223-TMEM208人源基因质粒 |
| P3225/pENTR223-RAB33A人源基因质粒 |
| P3226/pENTR223-CCDC42(1同义突变)人源基因质粒 |
| P3227/pENTR223-DAZAP1人源基因质粒 |
| P3228/pENTR223-RNF5人源基因质粒 |
| P3229/pENTR223-AIF1L人源基因质粒 |
| P3230/pENTR223-S100A4人源基因质粒 |
| P3231/pENTR223-LSM3(1同义突变)人源基因质粒 |
| P3232/pENTR223-ALG8-A1507G人源基因质粒 |
| P3233/pENTR223-IL32(2同义突变)人源基因质粒 |
| P3234/pENTR223-MRTO4(1同义突变)人源基因质粒 |
| P3235/pENTR223-STK32C(1同义突变)人源基因质粒 |
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文献和实验相关专题体外基因表达体外基因表达系统包括原核细胞系统和真核细胞系统。原核细胞系统主要是大肠杆菌细胞,它操作简便、周期短收益大及表达产物稳定,但是表达基因的相对分子质量有限,不宜过大,且不能对表达产物进行一些翻译后加工 、修饰。真核细胞系统包括 CHO等哺乳动物细胞、酵母细胞和昆虫细胞等。昆虫细胞表达系统(即杆状病毒表达系统)具有独特的生物学特性,日益受到人们的重视。1、杆状病毒的生物学特性 杆状病毒只来源于无脊椎动物,虽然已发现600多种杆状病毒,但进行分子生物学研究的不到20种。杆状
puro 哺乳细胞质粒 pEF1alpha-myc/hisb 哺乳细胞质粒 pCAGGS-HA 哺乳细胞质粒 Amp pCI-NEO 哺乳
试验温度的孵育时间不够。 5. 等板底的水珠挥发以后再读数. 要不会出现负值。 6. 实验时尽量少开口说话(因为大部分做的是蛋白的测定. 口水避免不了会使所测蛋白降解的啊. 呵呵)经验三 1)实验技术大类: 动物建模 (2)具体实验技术名称: 早产儿视网膜病变动物模型建立 (3)实验对象: C57BL/6J小鼠 (4)模型制作:高氧组幼鼠与哺乳母鼠一起置于密闭容器内. 氧气的流量










