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卡梅德生物科技(天津)有限公司
重组蛋白昆虫表达服务
细胞 | 来源 | 用途 |
Sf9 | * 分离自IPLBSF21-AE | * 适于转染、纯化、生产高滴度病毒、铺板以及表达重组蛋白 |
Sf21 | * 衍生于IPLBSF-21细胞系 | * 转染、纯化、生产高滴度病毒、铺板以及表达重组蛋白。Sf21细胞在一些结构表达方面优于Sf9细胞,如晶体蛋白 |
Hi5 | * 源于白菜尺蠖卵巢细胞,粉纹夜蛾细胞 | * 适用于重组病毒颗粒表达,也常用于转染和空斑纯化,且Hi5细胞系更适合来表达分泌型重组蛋白 |
S2 | * 来源于果蝇晚期胚胎细胞。其中多为雌性四倍体细胞,也有双倍体细胞 | * 比较适合病毒结构蛋白等重组表达 |
步骤 | 服务内容 | 周期 |
亚克隆 | * 客户不提供基因模板: 密码子优化,基因合成 * 客户提供质粒:扩增并抽提含有目标基因的载体质粒 * 拼接序列验证:测序 * 交付:正确构建的重组表达质粒及测序原始报告 |
2周 |
P1代病毒制备与表达小试 | * 重组Bacmid DNA扩大化培养,并转染昆虫细胞制备P1和P2病毒 * P1代病毒滴度测定(滴度106-108),并验证小量蛋白表达 * 交付:实验报告与图片 |
3-4周 |
表达优化及测试 | * P2病毒扩增,病毒滴度测定(滴度107-109) * P2代病毒转染昆虫细胞,蛋白表达纯化 * SDS-PAGE及WB分析 * 交付:图片,实验报告,纯化好的蛋白产品 |
3-4周 |
大规模重组蛋白表达及纯化 | * 1L (默认),5L,10L,30L,80L,130L和250L任选 * 通过亲和,离子交换,疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白 * SDS-PAGE和WB验证蛋白表达 |
协商 |
实验步骤 | 服务内容 | 结果交付 | 周期 |
载体构建与质粒抽提 | 基因优化与合成;表达载体构建;质粒大量抽提与鉴定 | 基因测序报告;载体构建COA | 2-4周 |
蛋白表达小试 | 质粒准备+转座(PCR鉴定);P1代毒种制备,转染SF9细胞,SDS+WB验证;P2代毒种制备,200ml SF9悬浮表达体系,SDS+WB验证;蛋白纯化 | 标准的蛋白表达实验报告;表达质粒,克隆菌株;蛋白0.05-2mg(纯度>85%) | 7-9周 |
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