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- Xybio
- 上海
- P1300
- 2025年07月05日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pRK5-2×HA
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pRK5-2×HA哺乳表达质粒
别称: pRK5-2×HA
| 启动子: | CMV |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pRK5-2×HA质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4756/pCMV-SPORT6-NME4人源基因质粒 |
| P4757/pCMV-SPORT6-RAB34人源基因质粒 |
| P4758/pCMV-SPORT6-AIDA人源基因质粒 |
| P4759/pCMV-SPORT6-TCIRG1人源基因质粒 |
| P4760/pCMV-SPORT6-RNASE4人源基因质粒 |
| P4761/pCMV-SPORT6-TEAD4人源基因质粒 |
| P4762/pCMV-SPORT6-RSPRY1人源基因质粒 |
| P4763/pCMV-SPORT6-ZBTB8人源基因质粒 |
| P4764/pCMV-SPORT6-GPRC5C人源基因质粒 |
| P4765/pCMV-SPORT6-ANXA6人源基因质粒 |
| P4766/pCMV-SPORT6-KPNA6人源基因质粒 |
| P4767/pCMV-SPORT6-PINX1人源基因质粒 |
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文献和实验pmCherry-C1 哺乳细胞质粒 Amp http://www.yrgene.com/product/vector/15552 pCDNA3 哺乳细胞质粒 Amp pCDNA3-HA 哺乳细胞质粒 Amp
检测法 二、 实验内容 293细胞的传代培养。 将TNF－R1哺乳动物细胞表达质粒用磷酸钙介导的方法转染入293细胞，使其过量，诱导293细胞凋亡。 观察凋亡的293细胞与对照组细胞的形态差异。 抽提细胞的总DNA进行凝胶电泳，检测“DNA Ladder” 三、 实验步骤 （一）293细胞的传代培养（第一天） 1．显微镜观察母细胞的生长状态，确定传代比例。 为了获得较高的转染效率，必需保证细胞处于合适的生长密度，因此应
Ladder”）电泳检测法 二、 实验内容 293细胞的传代培养。 将TNF－R1哺乳动物细胞表达质粒用磷酸钙介导的方法转染入293细胞，使其过量，诱导293细胞凋亡。 观察凋亡的293细胞与对照组细胞的形态差异。 抽提细胞的总DNA进行凝胶电泳，检测“DNA Ladder” 三、 实验步骤 （一）293细胞的传代培养（第一天） 1．显微镜观察母细胞的生长状态，确定传代比例。 为了获得较高的转染
