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- 上海
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- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pUB6/V5/His/LacZ
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pUB6-V5-His-LacZ哺乳表达质粒
别称: pUB6/V5/His/LacZ
质粒属性
质粒简介
pUB6-V5-His-LacZ pUB6/V5-His /LacZ是一个哺乳细胞UBC启动子表达质粒。All pEF or pUB vectors contain a strong promoter for high-level expression in mammalian cells, a choice of selection marker for generating stable cell lines, and an epitope tag for easy detection with a monoclonal antibody and rapid purification on nickel-chelating resin. Each vector is available in three reading frames to simplify cloning in-frame with the fusion tag.
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 8510 bp ds-DNA circular SYN 20-DEC-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..8510
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 18..1227
/label=UbC promoter
/note="human ubiquitin C promoter"
CDS 1302..4346
/codon_start=1
/gene="lacZ"
/product="beta-galactosidase"
/label=lacZ
/translation="VVLQRRDWENPGVTQLNRLAAHPPFASWRNSEEARTDRPSQQLRS
LNGEWRFAWFPVPEAVPESWLECDLPEADTVVVPSNWQMHGYDAPIYTNVTYPITVNPP
FVPTENPTGCYSLTFNVDESWLQEGQTRIIFDGVNSAFHLWCNGRWVGYGQDSRLPSEF
DLSAFLRAGENRLAVMVLRWSDGSYLEDQDMWRMSGIFRDVSLLHKPTTQISDFHVATR
FNDDFSRAVLEAEVQMCGELRDYLRVTVSLWQGETQVASGTAPFGGEIIDERGGYADRV
TLRLNVENPKLWSAEIPNLYRAVVELHTADGTLIEAEACDVGFREVRIENGLLLLNGKP
LLIRGVNRHEHHPLHGQVMDEQTMVQDILLMKQNNFNAVRCSHYPNHPLWYTLCDRYGL
YVVDEANIETHGMVPMNRLTDDPRWLPAMSERVTRMVQRDRNHPSVIIWSLGNESGHGA
NHDALYRWIKSVDPSRPVQYEGGGADTTATDIICPMYARVDEDQPFPAVPKWSIKKWLS
LPGETRPLILCEYAHAMGNSLGGFAKYWQAFRQYPRLQGGFVWDWVDQSLIKYDENGNP
WSAYGGDFGDTPNDRQFCMNGLVFADRTP-HPALTEAKHQQQFFQFRLSGQTIEVTSEYL
FRHSDNELLHWMVALDGKPLASGEVPLDVAPQGKQLIELPELPQPESAGQLWLTVRVVQ
PNATAWSEAGHISAWQQWRLAENLSVTLPAASHAIPHLTTSEMDFCIELGNKRWQFNRQ
SGFLSQMWIGDKKQLLTPLRDQFTRAPLDNDIGVSEATRIDPNAWVERWKAAGHYQAEA
ALLQCTADTLADAVLITTAHAWQHQGKTLFISRKTYRIDGSGQMAITVDVEVASDTP-HP
ARIGLNCQLAQVAERVNWLGLGPQENYPDRLTAACFDRWDLPLS-DMYTPYVFPSENGLR
CGTRELNYGPHQWRGDFQFNISRYSQQQLMETSHRHLLHAEEGTWLNIDGFHMGIGGDD
SWSPSVSAEFQLSAGRYHYQLVWCQK"
CDS 4374..4415
/codon_start=1
/product="epitope tag from simian virus 5"
/label=V5 tag
/translation="GKPIPNPLLGLDST"
CDS 4425..4442
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/label=6xHis
/translation="HHHHHH"
polyA_signal 4471..4695
/label=bGH poly(A) signal
/note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
rep_origin 4741..5169
/direction=RIGHT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 5183..5513
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 5364..5499
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
promoter 5561..5608
/label=EM7 promoter
/note="synthetic bacterial promoter "
CDS 5627..6025
/codon_start=1
/gene="Aspergillus terreus BSD"
/product="blasticidin S deaminase"
/label=Blast
/note="confers resistance to blasticidin"
/translation="MAKPLSQEESTLIERATATINSIPISEDYSVASAALSSDGRIFTG
VNVYHFTGGPCAELVVLGTAAAAAAGNLTCIVAIGNENRGILSPCGRCRQVLLDLHPGI
KAIVKDSDGQPTAVGIRELLPSGYVWEG"
polyA_signal 6183..6304
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(6755..7343)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(7514..8374)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(8375..8479)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
ORIGIN
1 gacggatcgg gagatctggc ctccgcgccg ggttttggcg cctcccgcgg gcgcccccct
61 cctcacggcg agcgctgcca cgtcagacga agggcgcagg agcgtcctga tccttccgcc
121 cggacgctca ggacagcggc ccgctgctca taagactcgg ccttagaacc ccagtatcag
181 cagaaggaca ttttaggacg ggacttgggt gactctaggg cactggtttt ctttccagag
241 agcggaacag gcgaggaaaa gtagtccctt ctcggcgatt ctgcggaggg atctccgtgg
301 ggcggtgaac gccgatgatt atataaggac gcgccgggtg tggcacagct agttccgtcg
361 cagccgggat ttgggtcgcg gttcttgttt gtggatcgct gtgatcgtca cttggtgagt
421 agcgggctgc tgggctggcc ggggctttcg tggccgccgg gccgctcggt gggacggaag
481 cgtgtggaga gaccgccaag ggctgtagtc tgggtccgcg agcaaggttg ccctgaactg
541 ggggttgggg ggagcgcagc aaaatggcgg ctgttcccga gtcttgaatg gaagacgctt
601 gtgaggcggg ctgtgaggtc gttgaaacaa ggtggggggc atggtgggcg gcaagaaccc
661 aaggtcttga ggccttcgct aatgcgggaa agctcttatt cgggtgagat gggctggggc
721 accatctggg gaccctgacg tgaagtttgt cactgactgg agaactcggt ttgtcgtctg
781 ttgcgggggc ggcagttatg cggtgccgtt gggcagtgca cccgtacctt tgggagcgcg
841 cgccctcgtc gtgtcgtgac gtcacccgtt ctgttggctt ataatgcagg gtggggccac
901 ctgccggtag gtgtgcggta ggcttttctc cgtcgcagga cgcagggttc gggcctaggg
961 taggctctcc tgaatcgaca ggcgccggac ctctggtgag gggagggata agtgaggcgt
1021 cagtttcttt ggtcggtttt atgtacctat cttcttaagt agctgaagct ccggttttga
1081 actatgcgct cggggttggc gagtgtgttt tgtgaagttt tttaggcacc ttttgaaatg
1141 taatcatttg ggtcaatatg taattttcag tgttagacta gtaaattgtc cgctaaattc
1201 tggccgtttt tggctttttt gttagacgaa gcttggtacc gagctcggat ccactagtcc
1261 agtgtggtgg aattctgcag atcgaaacga tgatagatcc cgtcgtttta caacgtcgtg
1321 actgggaaaa ccctggcgtt acccaactta atcgccttgc agcacatccc cctttcgcca
1381 gctggcgtaa tagcgaagag gcccgcaccg atcgcccttc ccaacagttg cgcagcctga
1441 atggcgaatg gcgctttgcc tggtttccgg taccagaagc ggtgccggaa agctggctgg
1501 agtgcgatct tcctgaggcc gatactgtcg tcgtcccctc aaactggcag atgcacggtt
1561 acgatgcgcc catctacacc aacgtaacct atcccattac ggtcaatccg ccgtttgttc
1621 ccacggagaa tccgacgggt tgttactcgc tcacatttaa tgttgatgaa agctggctac
1681 aggaaggcca gacgcgaatt atttttgatg gcgttaactc ggcgtttcat ctgtggtgca
1741 acgggcgctg ggtcggttac ggccaggaca gtcgtttgcc gtctgaattt gacctgagcg
1801 catttttacg cgccggagaa aaccgcctcg cggtgatggt gctgcgttgg agtgacggca
1861 gttatctgga agatcaggat atgtggcgga tgagcggcat tttccgtgac gtctcgttgc
1921 tgcataaacc gactacacaa atcagcgatt tccatgttgc cactcgcttt aatgatgatt
1981 tcagccgcgc tgtactggag gctgaagttc agatgtgcgg cgagttgcgt gactacctac
2041 gggtaacagt ttctttatgg cagggtgaaa cgcaggtcgc cagcggcacc gcgcctttcg
2101 gcggtgaaat tatcgatgag cgtggtggtt atgccgatcg cgtcacacta cgtctgaacg
2161 tcgaaaaccc gaaactgtgg agcgccgaaa tcccgaatct ctatcgtgcg gtggttgaac
2221 tgcacaccgc cgacggcacg ctgattgaag cagaagcctg cgatgtcggt ttccgcgagg
2281 tgcggattga aaatggtctg ctgctgctga acggcaagcc gttgctgatt cgaggcgtta
2341 accgtcacga gcatcatcct ctgcatggtc aggtcatgga tgagcagacg atggtgcagg
2401 atatcctgct gatgaagcag aacaacttta acgccgtgcg ctgttcgcat tatccgaacc
2461 atccgctgtg gtacacgctg tgcgaccgct acggcctgta tgtggtggat gaagccaata
2521 ttgaaaccca cggcatggtg ccaatgaatc gtctgaccga tgatccgcgc tggctaccgg
2581 cgatgagcga acgcgtaacg cgaatggtgc agcgcgatcg taatcacccg agtgtgatca
2641 tctggtcgct ggggaatgaa tcaggccacg gcgctaatca cgacgcgctg tatcgctgga
2701 tcaaatctgt cgatccttcc cgcccggtgc agtatgaagg cggcggagcc gacaccacgg
2761 ccaccgatat tatttgcccg atgtacgcgc gcgtggatga agaccagccc ttcccggctg
2821 tgccgaaatg gtccatcaaa aaatggcttt cgctacctgg agagacgcgc ccgctgatcc
2881 tttgcgaata cgcccacgcg atgggtaaca gtcttggcgg tttcgctaaa tactggcagg
2941 cgtttcgtca gtatccccgt ttacagggcg gcttcgtctg ggactgggtg gatcagtcgc
3001 tgattaaata tgatgaaaac ggcaacccgt ggtcggctta cggcggtgat tttggcgata
3061 cgccgaacga tcgccagttc tgtatgaacg gtctggtctt tgccgaccgc acgccgcatc
3121 cagcgctgac ggaagcaaaa caccagcagc agtttttcca gttccgttta tccgggcaaa
3181 ccatcgaagt gaccagcgaa tacctgttcc gtcatagcga taacgagctc ctgcactgga
3241 tggtggcgct ggatggtaag ccgctggcaa gcggtgaagt gcctctggat gtcgctccac
3301 aaggtaaaca gttgattgaa ctgcctgaac taccgcagcc ggagagcgcc gggcaactct
3361 ggctcacagt acgcgtagtg caaccgaacg cgaccgcatg gtcagaagcc gggcacatca
3421 gcgcctggca gcagtggcgt ctggcggaaa acctcagtgt gacgctcccc gccgcgtccc
3481 acgccatccc gcatctgacc accagcgaaa tggatttttg catcgagctg ggtaataagc
3541 gttggcaatt taaccgccag tcaggctttc tttcacagat gtggattggc gataaaaaac
3601 aactgctgac gccgctgcgc gatcagttca cccgtgcacc gctggataac gacattggcg
3661 taagtgaagc gacccgcatt gaccctaacg cctgggtcga acgctggaag gcggcgggcc
3721 attaccaggc cgaagcagcg ttgttgcagt gcacggcaga tacacttgct gatgcggtgc
3781 tgattacgac cgctcacgcg tggcagcatc aggggaaaac cttatttatc agccggaaaa
3841 cctaccggat tgatggtagt ggtcaaatgg cgattaccgt tgatgttgaa gtggcgagcg
3901 atacaccgca tccggcgcgg attggcctga actgccagct ggcgcaggta gcagagcggg
3961 taaactggct cggattaggg ccgcaagaaa actatcccga ccgccttact gccgcctgtt
4021 ttgaccgctg ggatctgcca ttgtcagaca tgtatacccc gtacgtcttc ccgagcgaaa
4081 acggtctgcg ctgcgggacg cgcgaattga attatggccc acaccagtgg cgcggcgact
4141 tccagttcaa catcagccgc tacagtcaac agcaactgat ggaaaccagc catcgccatc
4201 tgctgcacgc ggaagaaggc acatggctga atatcgacgg tttccatatg gggattggtg
4261 gcgacgactc ctggagcccg tcagtatcgg cggaattcca gctgagcgcc ggtcgctacc
4321 attaccagtt ggtctggtgt caaaaagcgg ccgctcgagg tcacccattc gaaggtaagc
4381 ctatccctaa ccctctcctc ggtctcgatt ctacgcgtac cggtcatcat caccatcacc
4441 attgagttta aacccgctga tcagcctcga ctgtgccttc tagttgccag ccatctgttg
4501 tttgcccctc ccccgtgcct tccttgaccc tggaaggtgc cactcccact gtcctttcct
4561 aataaaatga ggaaattgca tcgcattgtc tgagtaggtg tcattctatt ctggggggtg
4621 gggtggggca ggacagcaag ggggaggatt gggaagacaa tagcaggcat gctggggatg
4681 cggtgggctc tatggcttct gaggcggaaa gaaccagctg gggctctagg gggtatcccc
4741 acgcgccctg tagcggcgca ttaagcgcgg cgggtgtggt ggttacgcgc agcgtgaccg
4801 ctacacttgc cagcgcccta gcgcccgctc ctttcgcttt cttcccttcc tttctcgcca
4861 cgttcgccgg ctttccccgt caagctctaa atcggggcat ccctttaggg ttccgattta
4921 gtgctttacg gcacctcgac cccaaaaaac ttgattaggg tgatggttca cgtagtgggc
4981 catcgccctg atagacggtt tttcgccctt tgacgttgga gtccacgttc tttaatagtg
5041 gactcttgtt ccaaactgga acaacactca accctatctc ggtctattct tttgatttat
5101 aagggatttt ggggatttcg gcctattggt taaaaaatga gctgatttaa caaaaattta
5161 acgcgaatta attctgtgga atgtgtgtca gttagggtgt ggaaagtccc caggctcccc
5221 aggcaggcag aagtatgcaa agcatgcatc tcaattagtc agcaaccagg tgtggaaagt
5281 ccccaggctc cccagcaggc agaagtatgc aaagcatgca tctcaattag tcagcaacca
5341 tagtcccgcc cctaactccg cccatcccgc ccctaactcc gcccagttcc gcccattctc
5401 cgccccatgg ctgactaatt ttttttattt atgcagaggc cgaggccgcc tctgcctctg
5461 agctattcca gaagtagtga ggaggctttt ttggaggcct aggcttttgc aaaaagctcc
5521 cgggagcttg tatatccatt ttcggatctg atcagcacgt gttgacaatt aatcatcggc
5581 atagtatatc ggcatagtat aatacgacaa ggtgaggaac taaaccatgg ccaagccttt
5641 gtctcaagaa gaatccaccc tcattgaaag agcaacggct acaatcaaca gcatccccat
5701 ctctgaagac tacagcgtcg ccagcgcagc tctctctagc gacggccgca tcttcactgg
5761 tgtcaatgta tatcatttta ctgggggacc ttgtgcagaa ctcgtggtgc tgggcactgc
5821 tgctgctgcg gcagctggca acctgacttg tatcgtcgcg atcggaaatg agaacagggg
5881 catcttgagc ccctgcggac ggtgccgaca ggtgcttctc gatctgcatc ctgggatcaa
5941 agccatagtg aaggacagtg atggacagcc gacggcagtt gggattcgtg aattgctgcc
6001 ctctggttat gtgtgggagg gctaagcact tcgtggccga ggagcaggac tgacacgtgc
6061 tacgagattt cgattccacc gccgccttct atgaaaggtt gggcttcgga atcgttttcc
6121 gggacgccgg ctggatgatc ctccagcgcg gggatctcat gctggagttc ttcgcccacc
6181 ccaacttgtt tattgcagct tataatggtt acaaataaag caatagcatc acaaatttca
6241 caaataaagc atttttttca ctgcattcta gttgtggttt gtccaaactc atcaatgtat
6301 cttatcatgt ctgtataccg tcgacctcta gctagagctt ggcgtaatca tggtcatagc
6361 tgtttcctgt gtgaaattgt tatccgctca caattccaca caacatacga gccggaagca
6421 taaagtgtaa agcctggggt gcctaatgag tgagctaact cacattaatt gcgttgcgct
6481 cactgcccgc tttccagtcg ggaaacctgt cgtgccagct gcattaatga atcggccaac
6541 gcgcggggag aggcggtttg cgtattgggc gctcttccgc ttcctcgctc actgactcgc
6601 tgcgctcggt cgttcggctg cggcgagcgg tatcagctca ctcaaaggcg gtaatacggt
6661 tatccacaga atcaggggat aacgcaggaa agaacatgtg agcaaaaggc cagcaaaagg
6721 ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg cgtttttcca taggctccgc ccccctgacg
6781 agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga ggtggcgaaa cccgacagga ctataaagat
6841 accaggcgtt tccccctgga agctccctcg tgcgctctcc tgttccgacc ctgccgctta
6901 ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg gaagcgtggc gctttctcaa tgctcacgct
6961 gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc gctccaagct gggctgtgtg cacgaacccc
7021 ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg gtaactatcg tcttgagtcc aacccggtaa
7081 gacacgactt atcgccactg gcagcagcca ctggtaacag gattagcaga gcgaggtatg
7141 taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt ggcctaacta cggctacact agaaggacag
7201 tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag ttaccttcgg aaaaagagtt ggtagctctt
7261 gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg gtggtttttt tgtttgcaag cagcagatta
7321 cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc ctttgatctt ttctacgggg tctgacgctc
7381 agtggaacga aaactcacgt taagggattt tggtcatgag attatcaaaa aggatcttca
7441 cctagatcct tttaaattaa aaatgaagtt ttaaatcaat ctaaagtata tatgagtaaa
7501 cttggtctga cagttaccaa tgcttaatca gtgaggcacc tatctcagcg atctgtctat
7561 ttcgttcatc catagttgcc tgactccccg tcgtgtagat aactacgata cgggagggct
7621 taccatctgg ccccagtgct gcaatgatac cgcgagaccc acgctcaccg gctccagatt
7681 tatcagcaat aaaccagcca gccggaaggg ccgagcgcag aagtggtcct gcaactttat
7741 ccgcctccat ccagtctatt aattgttgcc gggaagctag agtaagtagt tcgccagtta
7801 atagtttgcg caacgttgtt gccattgcta caggcatcgt ggtgtcacgc tcgtcgtttg
7861 gtatggcttc attcagctcc ggttcccaac gatcaaggcg agttacatga tcccccatgt
7921 tgtgcaaaaa agcggttagc tccttcggtc ctccgatcgt tgtcagaagt aagttggccg
7981 cagtgttatc actcatggtt atggcagcac tgcataattc tcttactgtc atgccatccg
8041 taagatgctt ttctgtgact ggtgagtact caaccaagtc attctgagaa tagtgtatgc
8101 ggcgaccgag ttgctcttgc ccggcgtcaa tacgggataa taccgcgcca catagcagaa
8161 ctttaaaagt gctcatcatt ggaaaacgtt cttcggggcg aaaactctca aggatcttac
8221 cgctgttgag atccagttcg atgtaaccca ctcgtgcacc caactgatct tcagcatctt
8281 ttactttcac cagcgtttct gggtgagcaa aaacaggaag gcaaaatgcc gcaaaaaagg
8341 gaataagggc gacacggaaa tgttgaatac tcatactctt cctttttcaa tattattgaa
8401 gcatttatca gggttattgt ctcatgagcg gatacatatt tgaatgtatt tagaaaaata
8461 aacaaatagg ggttccgcgc acatttcccc gaaaagtgcc acctgacgtc
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pUB6-V5-His-LacZ哺乳表达质粒
别称: pUB6/V5/His/LacZ
| 启动子: | UBC |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | Blast |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | Blast |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pUB6-V5-His-LacZ pUB6/V5-His /LacZ是一个哺乳细胞UBC启动子表达质粒。All pEF or pUB vectors contain a strong promoter for high-level expression in mammalian cells, a choice of selection marker for generating stable cell lines, and an epitope tag for easy detection with a monoclonal antibody and rapid purification on nickel-chelating resin. Each vector is available in three reading frames to simplify cloning in-frame with the fusion tag.
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 8510 bp ds-DNA circular SYN 20-DEC-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..8510
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 18..1227
/label=UbC promoter
/note="human ubiquitin C promoter"
CDS 1302..4346
/codon_start=1
/gene="lacZ"
/product="beta-galactosidase"
/label=lacZ
/translation="VVLQRRDWENPGVTQLNRLAAHPPFASWRNSEEARTDRPSQQLRS
LNGEWRFAWFPVPEAVPESWLECDLPEADTVVVPSNWQMHGYDAPIYTNVTYPITVNPP
FVPTENPTGCYSLTFNVDESWLQEGQTRIIFDGVNSAFHLWCNGRWVGYGQDSRLPSEF
DLSAFLRAGENRLAVMVLRWSDGSYLEDQDMWRMSGIFRDVSLLHKPTTQISDFHVATR
FNDDFSRAVLEAEVQMCGELRDYLRVTVSLWQGETQVASGTAPFGGEIIDERGGYADRV
TLRLNVENPKLWSAEIPNLYRAVVELHTADGTLIEAEACDVGFREVRIENGLLLLNGKP
LLIRGVNRHEHHPLHGQVMDEQTMVQDILLMKQNNFNAVRCSHYPNHPLWYTLCDRYGL
YVVDEANIETHGMVPMNRLTDDPRWLPAMSERVTRMVQRDRNHPSVIIWSLGNESGHGA
NHDALYRWIKSVDPSRPVQYEGGGADTTATDIICPMYARVDEDQPFPAVPKWSIKKWLS
LPGETRPLILCEYAHAMGNSLGGFAKYWQAFRQYPRLQGGFVWDWVDQSLIKYDENGNP
WSAYGGDFGDTPNDRQFCMNGLVFADRTP-HPALTEAKHQQQFFQFRLSGQTIEVTSEYL
FRHSDNELLHWMVALDGKPLASGEVPLDVAPQGKQLIELPELPQPESAGQLWLTVRVVQ
PNATAWSEAGHISAWQQWRLAENLSVTLPAASHAIPHLTTSEMDFCIELGNKRWQFNRQ
SGFLSQMWIGDKKQLLTPLRDQFTRAPLDNDIGVSEATRIDPNAWVERWKAAGHYQAEA
ALLQCTADTLADAVLITTAHAWQHQGKTLFISRKTYRIDGSGQMAITVDVEVASDTP-HP
ARIGLNCQLAQVAERVNWLGLGPQENYPDRLTAACFDRWDLPLS-DMYTPYVFPSENGLR
CGTRELNYGPHQWRGDFQFNISRYSQQQLMETSHRHLLHAEEGTWLNIDGFHMGIGGDD
SWSPSVSAEFQLSAGRYHYQLVWCQK"
CDS 4374..4415
/codon_start=1
/product="epitope tag from simian virus 5"
/label=V5 tag
/translation="GKPIPNPLLGLDST"
CDS 4425..4442
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/label=6xHis
/translation="HHHHHH"
polyA_signal 4471..4695
/label=bGH poly(A) signal
/note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
rep_origin 4741..5169
/direction=RIGHT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 5183..5513
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 5364..5499
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
promoter 5561..5608
/label=EM7 promoter
/note="synthetic bacterial promoter "
CDS 5627..6025
/codon_start=1
/gene="Aspergillus terreus BSD"
/product="blasticidin S deaminase"
/label=Blast
/note="confers resistance to blasticidin"
/translation="MAKPLSQEESTLIERATATINSIPISEDYSVASAALSSDGRIFTG
VNVYHFTGGPCAELVVLGTAAAAAAGNLTCIVAIGNENRGILSPCGRCRQVLLDLHPGI
KAIVKDSDGQPTAVGIRELLPSGYVWEG"
polyA_signal 6183..6304
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(6755..7343)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(7514..8374)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(8375..8479)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
ORIGIN
1 gacggatcgg gagatctggc ctccgcgccg ggttttggcg cctcccgcgg gcgcccccct
61 cctcacggcg agcgctgcca cgtcagacga agggcgcagg agcgtcctga tccttccgcc
121 cggacgctca ggacagcggc ccgctgctca taagactcgg ccttagaacc ccagtatcag
181 cagaaggaca ttttaggacg ggacttgggt gactctaggg cactggtttt ctttccagag
241 agcggaacag gcgaggaaaa gtagtccctt ctcggcgatt ctgcggaggg atctccgtgg
301 ggcggtgaac gccgatgatt atataaggac gcgccgggtg tggcacagct agttccgtcg
361 cagccgggat ttgggtcgcg gttcttgttt gtggatcgct gtgatcgtca cttggtgagt
421 agcgggctgc tgggctggcc ggggctttcg tggccgccgg gccgctcggt gggacggaag
481 cgtgtggaga gaccgccaag ggctgtagtc tgggtccgcg agcaaggttg ccctgaactg
541 ggggttgggg ggagcgcagc aaaatggcgg ctgttcccga gtcttgaatg gaagacgctt
601 gtgaggcggg ctgtgaggtc gttgaaacaa ggtggggggc atggtgggcg gcaagaaccc
661 aaggtcttga ggccttcgct aatgcgggaa agctcttatt cgggtgagat gggctggggc
721 accatctggg gaccctgacg tgaagtttgt cactgactgg agaactcggt ttgtcgtctg
781 ttgcgggggc ggcagttatg cggtgccgtt gggcagtgca cccgtacctt tgggagcgcg
841 cgccctcgtc gtgtcgtgac gtcacccgtt ctgttggctt ataatgcagg gtggggccac
901 ctgccggtag gtgtgcggta ggcttttctc cgtcgcagga cgcagggttc gggcctaggg
961 taggctctcc tgaatcgaca ggcgccggac ctctggtgag gggagggata agtgaggcgt
1021 cagtttcttt ggtcggtttt atgtacctat cttcttaagt agctgaagct ccggttttga
1081 actatgcgct cggggttggc gagtgtgttt tgtgaagttt tttaggcacc ttttgaaatg
1141 taatcatttg ggtcaatatg taattttcag tgttagacta gtaaattgtc cgctaaattc
1201 tggccgtttt tggctttttt gttagacgaa gcttggtacc gagctcggat ccactagtcc
1261 agtgtggtgg aattctgcag atcgaaacga tgatagatcc cgtcgtttta caacgtcgtg
1321 actgggaaaa ccctggcgtt acccaactta atcgccttgc agcacatccc cctttcgcca
1381 gctggcgtaa tagcgaagag gcccgcaccg atcgcccttc ccaacagttg cgcagcctga
1441 atggcgaatg gcgctttgcc tggtttccgg taccagaagc ggtgccggaa agctggctgg
1501 agtgcgatct tcctgaggcc gatactgtcg tcgtcccctc aaactggcag atgcacggtt
1561 acgatgcgcc catctacacc aacgtaacct atcccattac ggtcaatccg ccgtttgttc
1621 ccacggagaa tccgacgggt tgttactcgc tcacatttaa tgttgatgaa agctggctac
1681 aggaaggcca gacgcgaatt atttttgatg gcgttaactc ggcgtttcat ctgtggtgca
1741 acgggcgctg ggtcggttac ggccaggaca gtcgtttgcc gtctgaattt gacctgagcg
1801 catttttacg cgccggagaa aaccgcctcg cggtgatggt gctgcgttgg agtgacggca
1861 gttatctgga agatcaggat atgtggcgga tgagcggcat tttccgtgac gtctcgttgc
1921 tgcataaacc gactacacaa atcagcgatt tccatgttgc cactcgcttt aatgatgatt
1981 tcagccgcgc tgtactggag gctgaagttc agatgtgcgg cgagttgcgt gactacctac
2041 gggtaacagt ttctttatgg cagggtgaaa cgcaggtcgc cagcggcacc gcgcctttcg
2101 gcggtgaaat tatcgatgag cgtggtggtt atgccgatcg cgtcacacta cgtctgaacg
2161 tcgaaaaccc gaaactgtgg agcgccgaaa tcccgaatct ctatcgtgcg gtggttgaac
2221 tgcacaccgc cgacggcacg ctgattgaag cagaagcctg cgatgtcggt ttccgcgagg
2281 tgcggattga aaatggtctg ctgctgctga acggcaagcc gttgctgatt cgaggcgtta
2341 accgtcacga gcatcatcct ctgcatggtc aggtcatgga tgagcagacg atggtgcagg
2401 atatcctgct gatgaagcag aacaacttta acgccgtgcg ctgttcgcat tatccgaacc
2461 atccgctgtg gtacacgctg tgcgaccgct acggcctgta tgtggtggat gaagccaata
2521 ttgaaaccca cggcatggtg ccaatgaatc gtctgaccga tgatccgcgc tggctaccgg
2581 cgatgagcga acgcgtaacg cgaatggtgc agcgcgatcg taatcacccg agtgtgatca
2641 tctggtcgct ggggaatgaa tcaggccacg gcgctaatca cgacgcgctg tatcgctgga
2701 tcaaatctgt cgatccttcc cgcccggtgc agtatgaagg cggcggagcc gacaccacgg
2761 ccaccgatat tatttgcccg atgtacgcgc gcgtggatga agaccagccc ttcccggctg
2821 tgccgaaatg gtccatcaaa aaatggcttt cgctacctgg agagacgcgc ccgctgatcc
2881 tttgcgaata cgcccacgcg atgggtaaca gtcttggcgg tttcgctaaa tactggcagg
2941 cgtttcgtca gtatccccgt ttacagggcg gcttcgtctg ggactgggtg gatcagtcgc
3001 tgattaaata tgatgaaaac ggcaacccgt ggtcggctta cggcggtgat tttggcgata
3061 cgccgaacga tcgccagttc tgtatgaacg gtctggtctt tgccgaccgc acgccgcatc
3121 cagcgctgac ggaagcaaaa caccagcagc agtttttcca gttccgttta tccgggcaaa
3181 ccatcgaagt gaccagcgaa tacctgttcc gtcatagcga taacgagctc ctgcactgga
3241 tggtggcgct ggatggtaag ccgctggcaa gcggtgaagt gcctctggat gtcgctccac
3301 aaggtaaaca gttgattgaa ctgcctgaac taccgcagcc ggagagcgcc gggcaactct
3361 ggctcacagt acgcgtagtg caaccgaacg cgaccgcatg gtcagaagcc gggcacatca
3421 gcgcctggca gcagtggcgt ctggcggaaa acctcagtgt gacgctcccc gccgcgtccc
3481 acgccatccc gcatctgacc accagcgaaa tggatttttg catcgagctg ggtaataagc
3541 gttggcaatt taaccgccag tcaggctttc tttcacagat gtggattggc gataaaaaac
3601 aactgctgac gccgctgcgc gatcagttca cccgtgcacc gctggataac gacattggcg
3661 taagtgaagc gacccgcatt gaccctaacg cctgggtcga acgctggaag gcggcgggcc
3721 attaccaggc cgaagcagcg ttgttgcagt gcacggcaga tacacttgct gatgcggtgc
3781 tgattacgac cgctcacgcg tggcagcatc aggggaaaac cttatttatc agccggaaaa
3841 cctaccggat tgatggtagt ggtcaaatgg cgattaccgt tgatgttgaa gtggcgagcg
3901 atacaccgca tccggcgcgg attggcctga actgccagct ggcgcaggta gcagagcggg
3961 taaactggct cggattaggg ccgcaagaaa actatcccga ccgccttact gccgcctgtt
4021 ttgaccgctg ggatctgcca ttgtcagaca tgtatacccc gtacgtcttc ccgagcgaaa
4081 acggtctgcg ctgcgggacg cgcgaattga attatggccc acaccagtgg cgcggcgact
4141 tccagttcaa catcagccgc tacagtcaac agcaactgat ggaaaccagc catcgccatc
4201 tgctgcacgc ggaagaaggc acatggctga atatcgacgg tttccatatg gggattggtg
4261 gcgacgactc ctggagcccg tcagtatcgg cggaattcca gctgagcgcc ggtcgctacc
4321 attaccagtt ggtctggtgt caaaaagcgg ccgctcgagg tcacccattc gaaggtaagc
4381 ctatccctaa ccctctcctc ggtctcgatt ctacgcgtac cggtcatcat caccatcacc
4441 attgagttta aacccgctga tcagcctcga ctgtgccttc tagttgccag ccatctgttg
4501 tttgcccctc ccccgtgcct tccttgaccc tggaaggtgc cactcccact gtcctttcct
4561 aataaaatga ggaaattgca tcgcattgtc tgagtaggtg tcattctatt ctggggggtg
4621 gggtggggca ggacagcaag ggggaggatt gggaagacaa tagcaggcat gctggggatg
4681 cggtgggctc tatggcttct gaggcggaaa gaaccagctg gggctctagg gggtatcccc
4741 acgcgccctg tagcggcgca ttaagcgcgg cgggtgtggt ggttacgcgc agcgtgaccg
4801 ctacacttgc cagcgcccta gcgcccgctc ctttcgcttt cttcccttcc tttctcgcca
4861 cgttcgccgg ctttccccgt caagctctaa atcggggcat ccctttaggg ttccgattta
4921 gtgctttacg gcacctcgac cccaaaaaac ttgattaggg tgatggttca cgtagtgggc
4981 catcgccctg atagacggtt tttcgccctt tgacgttgga gtccacgttc tttaatagtg
5041 gactcttgtt ccaaactgga acaacactca accctatctc ggtctattct tttgatttat
5101 aagggatttt ggggatttcg gcctattggt taaaaaatga gctgatttaa caaaaattta
5161 acgcgaatta attctgtgga atgtgtgtca gttagggtgt ggaaagtccc caggctcccc
5221 aggcaggcag aagtatgcaa agcatgcatc tcaattagtc agcaaccagg tgtggaaagt
5281 ccccaggctc cccagcaggc agaagtatgc aaagcatgca tctcaattag tcagcaacca
5341 tagtcccgcc cctaactccg cccatcccgc ccctaactcc gcccagttcc gcccattctc
5401 cgccccatgg ctgactaatt ttttttattt atgcagaggc cgaggccgcc tctgcctctg
5461 agctattcca gaagtagtga ggaggctttt ttggaggcct aggcttttgc aaaaagctcc
5521 cgggagcttg tatatccatt ttcggatctg atcagcacgt gttgacaatt aatcatcggc
5581 atagtatatc ggcatagtat aatacgacaa ggtgaggaac taaaccatgg ccaagccttt
5641 gtctcaagaa gaatccaccc tcattgaaag agcaacggct acaatcaaca gcatccccat
5701 ctctgaagac tacagcgtcg ccagcgcagc tctctctagc gacggccgca tcttcactgg
5761 tgtcaatgta tatcatttta ctgggggacc ttgtgcagaa ctcgtggtgc tgggcactgc
5821 tgctgctgcg gcagctggca acctgacttg tatcgtcgcg atcggaaatg agaacagggg
5881 catcttgagc ccctgcggac ggtgccgaca ggtgcttctc gatctgcatc ctgggatcaa
5941 agccatagtg aaggacagtg atggacagcc gacggcagtt gggattcgtg aattgctgcc
6001 ctctggttat gtgtgggagg gctaagcact tcgtggccga ggagcaggac tgacacgtgc
6061 tacgagattt cgattccacc gccgccttct atgaaaggtt gggcttcgga atcgttttcc
6121 gggacgccgg ctggatgatc ctccagcgcg gggatctcat gctggagttc ttcgcccacc
6181 ccaacttgtt tattgcagct tataatggtt acaaataaag caatagcatc acaaatttca
6241 caaataaagc atttttttca ctgcattcta gttgtggttt gtccaaactc atcaatgtat
6301 cttatcatgt ctgtataccg tcgacctcta gctagagctt ggcgtaatca tggtcatagc
6361 tgtttcctgt gtgaaattgt tatccgctca caattccaca caacatacga gccggaagca
6421 taaagtgtaa agcctggggt gcctaatgag tgagctaact cacattaatt gcgttgcgct
6481 cactgcccgc tttccagtcg ggaaacctgt cgtgccagct gcattaatga atcggccaac
6541 gcgcggggag aggcggtttg cgtattgggc gctcttccgc ttcctcgctc actgactcgc
6601 tgcgctcggt cgttcggctg cggcgagcgg tatcagctca ctcaaaggcg gtaatacggt
6661 tatccacaga atcaggggat aacgcaggaa agaacatgtg agcaaaaggc cagcaaaagg
6721 ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg cgtttttcca taggctccgc ccccctgacg
6781 agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga ggtggcgaaa cccgacagga ctataaagat
6841 accaggcgtt tccccctgga agctccctcg tgcgctctcc tgttccgacc ctgccgctta
6901 ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg gaagcgtggc gctttctcaa tgctcacgct
6961 gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc gctccaagct gggctgtgtg cacgaacccc
7021 ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg gtaactatcg tcttgagtcc aacccggtaa
7081 gacacgactt atcgccactg gcagcagcca ctggtaacag gattagcaga gcgaggtatg
7141 taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt ggcctaacta cggctacact agaaggacag
7201 tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag ttaccttcgg aaaaagagtt ggtagctctt
7261 gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg gtggtttttt tgtttgcaag cagcagatta
7321 cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc ctttgatctt ttctacgggg tctgacgctc
7381 agtggaacga aaactcacgt taagggattt tggtcatgag attatcaaaa aggatcttca
7441 cctagatcct tttaaattaa aaatgaagtt ttaaatcaat ctaaagtata tatgagtaaa
7501 cttggtctga cagttaccaa tgcttaatca gtgaggcacc tatctcagcg atctgtctat
7561 ttcgttcatc catagttgcc tgactccccg tcgtgtagat aactacgata cgggagggct
7621 taccatctgg ccccagtgct gcaatgatac cgcgagaccc acgctcaccg gctccagatt
7681 tatcagcaat aaaccagcca gccggaaggg ccgagcgcag aagtggtcct gcaactttat
7741 ccgcctccat ccagtctatt aattgttgcc gggaagctag agtaagtagt tcgccagtta
7801 atagtttgcg caacgttgtt gccattgcta caggcatcgt ggtgtcacgc tcgtcgtttg
7861 gtatggcttc attcagctcc ggttcccaac gatcaaggcg agttacatga tcccccatgt
7921 tgtgcaaaaa agcggttagc tccttcggtc ctccgatcgt tgtcagaagt aagttggccg
7981 cagtgttatc actcatggtt atggcagcac tgcataattc tcttactgtc atgccatccg
8041 taagatgctt ttctgtgact ggtgagtact caaccaagtc attctgagaa tagtgtatgc
8101 ggcgaccgag ttgctcttgc ccggcgtcaa tacgggataa taccgcgcca catagcagaa
8161 ctttaaaagt gctcatcatt ggaaaacgtt cttcggggcg aaaactctca aggatcttac
8221 cgctgttgag atccagttcg atgtaaccca ctcgtgcacc caactgatct tcagcatctt
8281 ttactttcac cagcgtttct gggtgagcaa aaacaggaag gcaaaatgcc gcaaaaaagg
8341 gaataagggc gacacggaaa tgttgaatac tcatactctt cctttttcaa tattattgaa
8401 gcatttatca gggttattgt ctcatgagcg gatacatatt tgaatgtatt tagaaaaata
8461 aacaaatagg ggttccgcgc acatttcccc gaaaagtgcc acctgacgtc
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3308/pCMV-SPORT6-RAD18（1点突变）人源基因质粒 |
| P3309/pCMV-SPORT6-SSX1(1同义突变）人源基因质粒 |
| P3310/pCMV-SPORT6-PDIA6人源基因质粒 |
| P3311/pCMV-SPORT6-SEPT8（358-1284）人源基因质粒 |
| P3312/pCMV-SPORT6-KRT17人源基因质粒 |
| P3313/pCMV-SPORT6-ZNF655人源基因质粒 |
| P3314/pCMV-SPORT6-PPP2R3C人源基因质粒 |
| P3315/pCMV-SPORT6-HINT1人源基因质粒 |
| P3316/pCMV-SPORT6-TRMT6（1点突变）人源基因质粒 |
| P3317/pCMV-SPORT6-NUDCD3人源基因质粒 |
| P3319/pCMV-SPORT6-TCEAL1人源基因质粒 |
| P2574/pCMV-SPORT6-SEC11C人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
培养基上筛选出单个菌落，此菌落经过酶切鉴定或杂交实验后确定为含重组 DNA 分子的单克隆。下面以质粒为例图示 DNA 体外重组的基本程序：一、基因组 DNA 的制备【实验目的】1． 理解生物细胞基因组 DNA 制备方法的原理。2． 熟悉组织细胞基因组 DNA 制备的基本操作。【实验原理】在阴离子去污剂（SDS-十二烷基硫酸钠）以及酚/氯仿/异戊醇作用下可以使细胞膜破坏，核蛋白质变性，将染色体 DNA 分离出来。【实验对象】新鲜哺乳动物组织或细胞。（一）从哺乳动物组织中提取基因组 DNA【实验试剂与器材
2）。 图2 使用BLOCK-iT™ Complete Dicer RNAi Kit得到＞80％的靶定基因阻断 经Dicer酶切的，来源于β-半乳糖苷酶或者荧光素酶的dsRNA产生siRNA（d-siRNA）库，用来确定d-siRNA特异阻断基因活性的效果。GripTite™ 293 MSR 细胞共转染pcDNA™1.2/V5-GW/lacZ阳性对照质粒和pcDNA™5/FRT/luc，分别独自表达β-gal或者荧光素酶报告子，或者50ng luc 或者lacZ d-siRNA。对于每一种报告子
性成正比，因此，可对荧光素酶报告基因的转录进行间接估计。荧光素酶易 被蛋白酶降解，在转染的哺乳动物细胞中的半衰期约为3 小时。荧光素酶报告系 统为启动子活性的检测提供了一个敏感、快速、非放射性的检测方法。 实验步骤： 1．实验第一天，消化并接种细胞（根据具体实验选择合适的细胞）于35mm 细 胞培养皿，置于5％ CO2、饱和湿度的37℃培养箱内培养过夜。 2．等细胞密度达到70％ 时用Luciferase 报告基因质粒、LacZ 的表达质粒及其 它质粒（根据具体实验确定）共
pUB6-V5-His-LacZ哺乳表达质粒
￥100 - 1000
