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- 保质期：
2年
- 英文名：
pCAGGS-HA-N
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pCAGGS-HA-N哺乳表达质粒
别称: pCAGGS-HA-N
质粒属性
质粒简介
pCAGGS-HA质粒是在pCAGGS载体的基础上添加了HA标签，利于在WB实验的时候用抗体检测。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4807 bp ds-DNA circular SYN 17-JUL-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS pCAGGS-HA
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4807)
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Sunday, July 17, 2016 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4807
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 4..383
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 385..662
/note="chicken beta-actin promoter"
intron 663..1680
/note="chimeric intron"
/note="chimera between introns from chicken beta-actin and
rabbit beta-globin"
misc_feature 1735..1737
/note="M"
CDS 1738..1764
/codon_start=1
/product="HA (human influenza hemagglutinin) epitope tag"
/note="HA"
/translation="YPYDVPDYA"
polyA_site 1894..1949
/note="beta-globin poly(A) signal"
/note="rabbit beta-globin polyadenylation signal"
primer_bind complement(2310..2326)
/note="M13 rev"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
protein_bind 2334..2350
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(2358..2388)
/note="lac promoter"
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind 2403..2424
/bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
/note="CAP binding site"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
promoter 2483..2678
/note="SV40 promoter"
/note="SV40 early promoter"
rep_origin 2529..2664
/note="SV40 ori"
/note="SV40 origin of replication"
polyA_signal 2684..2818
/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(3056..3644)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(3815..4675)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(4676..4780)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
ORIGIN
1 gtcgacattg attattgact agttattaat agtaatcaat tacggggtca ttagttcata
61 gcccatatat ggagttccgc gttacataac ttacggtaaa tggcccgcct ggctgaccgc
121 ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa tgacgtatgt tcccatagta acgccaatag
181 ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggagt atttacggta aactgcccac ttggcagtac
241 atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc ctattgacgt caatgacggt aaatggcccg
301 cctggcatta tgcccagtac atgaccttat gggactttcc tacttggcag tacatctacg
361 tattagtcat cgctattacc atggtcgagg tgagccccac gttctgcttc actctcccca
421 tctccccccc ctccccaccc ccaattttgt atttatttat tttttaatta ttttgtgcag
481 cgatgggggc gggggggggg ggggggcccc ccccaggcgg ggcggggcgg ggcgaggggc
541 ggggcggggc gaggcggaaa ggtgcggcgg cagccaatca gagcggcgcg ctccgaaagt
601 ttccttttat ggcgaggcgg cggcggcggc ggccctataa aaagcgaagc gcgcggcggg
661 cgggagtcgt tgcgcgctgc cttccccccg tgccccgctc cgccgccgcc tcgcgccgcc
721 cgccccggct ctgactgacc gcgttactcc cacaggtgag cgggcgggac ggcccttctc
781 ctccgggctg taattagcgc ttggtttaat gacggcttgt ttcttttctg tggctgcgtg
841 aaagccttga ggggctccgg gagggccctt tgtgcggggg gagcggctcg gggggtgcgt
901 gcgtgtgtgt gtgcgtgggg agcgccgcgt gcggctccgc gctgcccggc ggctgtgagc
961 gctgcgggcg cggcgcgggg ctttgtgcgc tccgcagtgt gcgcgagggg agcgcggccg
1021 ggggcggtgc cccgcggtgc ggggggggct gcgaggggaa caaaggctgc gtgcggggtg
1081 tgtgcgtggg ggggtgagca gggggtgtgg gcgcgtcggt cgggctgcaa ccccccctgc
1141 acccccctcc ccgagttgct gagcacggcc cggcttcggg tgcggggctc cgtacggggc
1201 gtggcgcggg gctcgccgtg ccgggcgggg ggtggcggca ggtgggggtg ccgggcgggg
1261 cggggccgcc tcgggccggg gagggctcgg gggaaggggc gcggcggccc ccggagcgcc
1321 ggcggctgtc gaggcgcggc gagccgcagc cattgccttt tatggtaatc gtgcgagagg
1381 gcgcagggac ttcctttgtc ccaaatctgt gcggagccga aatctgggag gcgccgccgc
1441 accccctcta gcgggcgcgg ggcgaagcgg tgcggcgccg gcaggaagga aatgggcggg
1501 gagggccttc gtgcgtcgcc gcgccgccgt ccccttctcc ctctccagcc tcggggctgt
1561 ccgcgggggg acggctgcct tcggggggga cggggcaggg cggggttcgg cttctggcgt
1621 gtgaccggcg gctctagagc ctctgctaac catgttcatg ccttcttctt tttcctacag
1681 ctcctgggca acgtgctggt tgttgtgctg tctcatcatt ttggcaaagc caccatgtac
1741 ccatacgatg ttccagatta cgctgaattc gagctcatcg atggtacccg ggcatgcctc
1801 gagctagcag atcttaatta attaaggatc tttttccctc tgccaaaaat tatggggaca
1861 tcatgaagcc ccttgagcat ctgacttctg gctaataaag gaaatttatt ttcattgcaa
1921 tagtgtgttg gaattttttg tgtctctcac tcggaaggac atatgggagg gcaaatcatt
1981 taaaacatca gaatgagtat ttggtttaga gtttggcaac atatgcccat atgctggctg
2041 ccatgaacaa aggttggcta taaagaggtc atcagtatat gaaacagccc cctgctgtcc
2101 attccttatt ccatagaaaa gccttgactt gaggttagat tttttttata ttttgttttg
2161 tgttattttt ttctttaaca tccctaaaat tttccttaca tgttttacta gccagatttt
2221 tcctcctctc ctgactactc ccagtcatag ctgtccctct tctcttatgg agatccctcg
2281 acctgcagcc caagcttggc gtaatcatgg tcatagctgt ttcctgtgtg aaattgttat
2341 ccgctcacaa ttccacacaa catacgagcc ggaagcataa agtgtaaagc ctggggtgcc
2401 taatgagtga gctaactcac attaattgcg ttgcgctcac tgcccgcttt ccagtcggga
2461 aacctgtcgt gccagcggat ccgcatctca attagtcagc aaccatagtc ccgcccctaa
2521 ctccgcccat cccgccccta actccgccca gttccgccca ttctccgccc catggctgac
2581 taattttttt tatttatgca gaggccgagg ccgcctcggc ctctgagcta ttccagaagt
2641 agtgaggagg cttttttgga ggcctaggct tttgcaaaaa gctaacttgt ttattgcagc
2701 ttataatggt tacaaataaa gcaatagcat cacaaatttc acaaataaag catttttttc
2761 actgcattct agttgtggtt tgtccaaact catcaatgta tcttatcatg tctggatccg
2821 ctgcattaat gaatcggcca acgcgcgggg agaggcggtt tgcgtattgg gcgctcttcc
2881 gcttcctcgc tcactgactc gctgcgctcg gtcgttcggc tgcggcgagc ggtatcagct
2941 cactcaaagg cggtaatacg gttatccaca gaatcaggga taacgcagga aagaacatgt
3001 gagcaaaagg ccagcaaaag gccaggaacc gtaaaaaggc cgcgttgctg gcgtttttcc
3061 ataggctccg cccccctgac gagcatcaca aaaatcgacg ctcaagtcag aggtggcgaa
3121 acccgacagg actataaaga taccaggcgt ttccccctgg aagctccctc gtgcgctctc
3181 ctgttccgac cctgccgctt accggatacc tgtccgcctt tctcccttcg ggaagcgtgg
3241 cgctttctca tagctcacgc tgtaggtatc tcagttcggt gtaggtcgtt cgctccaagc
3301 tgggctgtgt gcacgaaccc cccgttcagc ccgaccgctg cgccttatcc ggtaactatc
3361 gtcttgagtc caacccggta agacacgact tatcgccact ggcagcagcc actggtaaca
3421 ggattagcag agcgaggtat gtaggcggtg ctacagagtt cttgaagtgg tggcctaact
3481 acggctacac tagaagaaca gtatttggta tctgcgctct gctgaagcca gttaccttcg
3541 gaaaaagagt tggtagctct tgatccggca aacaaaccac cgctggtagc ggtggttttt
3601 ttgtttgcaa gcagcagatt acgcgcagaa aaaaaggatc tcaagaagat cctttgatct
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4741 ttgaatgtat ttagaaaaat aaacaaatag gggttccgcg cacatttccc cgaaaagtgc
4801 cacctgg
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pCAGGS-HA-N哺乳表达质粒
别称: pCAGGS-HA-N
| 启动子: | CAG |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 质粒分类: | 哺乳系列质粒；哺乳表达质粒；pCAG系列质粒 |
| 质粒大小: | 4807bp |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 293T等哺乳细胞 |
| 培养条件: | 37℃，5%CO2 |
| 诱导方式: | 无需诱导 |
| 5'测序引物: | pcaggs-F（GCTAACCATGTTCATGCCTTCT） |
| 3'测序引物: | pcaggs-R（TATGTCCTTCCGAGTGAGAG） |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pCAGGS-HA质粒是在pCAGGS载体的基础上添加了HA标签，利于在WB实验的时候用抗体检测。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4807 bp ds-DNA circular SYN 17-JUL-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS pCAGGS-HA
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4807)
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Sunday, July 17, 2016 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4807
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/mol_type="other DNA"
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/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
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/note="chicken beta-actin promoter"
intron 663..1680
/note="chimeric intron"
/note="chimera between introns from chicken beta-actin and
rabbit beta-globin"
misc_feature 1735..1737
/note="M"
CDS 1738..1764
/codon_start=1
/product="HA (human influenza hemagglutinin) epitope tag"
/note="HA"
/translation="YPYDVPDYA"
polyA_site 1894..1949
/note="beta-globin poly(A) signal"
/note="rabbit beta-globin polyadenylation signal"
primer_bind complement(2310..2326)
/note="M13 rev"
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variants"
protein_bind 2334..2350
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(2358..2388)
/note="lac promoter"
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind 2403..2424
/bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
/note="CAP binding site"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
promoter 2483..2678
/note="SV40 promoter"
/note="SV40 early promoter"
rep_origin 2529..2664
/note="SV40 ori"
/note="SV40 origin of replication"
polyA_signal 2684..2818
/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(3056..3644)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(3815..4675)
/codon_start=1
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/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
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ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
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EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
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LIKHW"
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ORIGIN
1 gtcgacattg attattgact agttattaat agtaatcaat tacggggtca ttagttcata
61 gcccatatat ggagttccgc gttacataac ttacggtaaa tggcccgcct ggctgaccgc
121 ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa tgacgtatgt tcccatagta acgccaatag
181 ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggagt atttacggta aactgcccac ttggcagtac
241 atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc ctattgacgt caatgacggt aaatggcccg
301 cctggcatta tgcccagtac atgaccttat gggactttcc tacttggcag tacatctacg
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661 cgggagtcgt tgcgcgctgc cttccccccg tgccccgctc cgccgccgcc tcgcgccgcc
721 cgccccggct ctgactgacc gcgttactcc cacaggtgag cgggcgggac ggcccttctc
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961 gctgcgggcg cggcgcgggg ctttgtgcgc tccgcagtgt gcgcgagggg agcgcggccg
1021 ggggcggtgc cccgcggtgc ggggggggct gcgaggggaa caaaggctgc gtgcggggtg
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1141 acccccctcc ccgagttgct gagcacggcc cggcttcggg tgcggggctc cgtacggggc
1201 gtggcgcggg gctcgccgtg ccgggcgggg ggtggcggca ggtgggggtg ccgggcgggg
1261 cggggccgcc tcgggccggg gagggctcgg gggaaggggc gcggcggccc ccggagcgcc
1321 ggcggctgtc gaggcgcggc gagccgcagc cattgccttt tatggtaatc gtgcgagagg
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1561 ccgcgggggg acggctgcct tcggggggga cggggcaggg cggggttcgg cttctggcgt
1621 gtgaccggcg gctctagagc ctctgctaac catgttcatg ccttcttctt tttcctacag
1681 ctcctgggca acgtgctggt tgttgtgctg tctcatcatt ttggcaaagc caccatgtac
1741 ccatacgatg ttccagatta cgctgaattc gagctcatcg atggtacccg ggcatgcctc
1801 gagctagcag atcttaatta attaaggatc tttttccctc tgccaaaaat tatggggaca
1861 tcatgaagcc ccttgagcat ctgacttctg gctaataaag gaaatttatt ttcattgcaa
1921 tagtgtgttg gaattttttg tgtctctcac tcggaaggac atatgggagg gcaaatcatt
1981 taaaacatca gaatgagtat ttggtttaga gtttggcaac atatgcccat atgctggctg
2041 ccatgaacaa aggttggcta taaagaggtc atcagtatat gaaacagccc cctgctgtcc
2101 attccttatt ccatagaaaa gccttgactt gaggttagat tttttttata ttttgttttg
2161 tgttattttt ttctttaaca tccctaaaat tttccttaca tgttttacta gccagatttt
2221 tcctcctctc ctgactactc ccagtcatag ctgtccctct tctcttatgg agatccctcg
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3361 gtcttgagtc caacccggta agacacgact tatcgccact ggcagcagcc actggtaaca
3421 ggattagcag agcgaggtat gtaggcggtg ctacagagtt cttgaagtgg tggcctaact
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3494/pENTR223-CD27人源基因质粒 |
| P3495/pENTR223-KCNG4人源基因质粒 |
| P3496/pENTR223-SPIN1人源基因质粒 |
| P3497/pENTR223-RAB3IP人源基因质粒 |
| P3498/pENTR223-THAP12人源基因质粒 |
| P3499/pENTR223-USP29（2点突变）人源基因质粒 |
| P3500/pENTR223-CENPK人源基因质粒 |
| P3501/pENTR223-NCF2（2点突变）人源基因质粒 |
| P3502/pENTR223-SLC45A2（2点突变）人源基因质粒 |
| P3503/pENTR223-ACVR1B（1点突变）人源基因质粒 |
| P3504/pENTR223-DARS人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
puro 哺乳细胞质粒 pEF1alpha-myc/hisb 哺乳细胞质粒 pCAGGS-HA 哺乳细胞质粒 Amp pCI-NEO 哺乳
shRNAs(short hairpin RNAs)在哺乳动物细胞中引发的基因沉默
(double-stranded RNA)诱导的基因沉默广泛存在于各种物种当中,包括植物、真菌、昆虫、原生动物以及真核生物等[1] 。通过研究小片段干扰RNAs(siRNAs)和表达后的shRNAs在哺乳动物细胞中的作用，研究人员发现人或鼠基因组的任何基因都能成为dsRNAs诱导基因沉默的靶向基因。因此，RNAi很快成为哺乳动物细胞体系研究的标准实验技术。 我们和其他一些实验室构建了用于哺乳动物细胞产生小片段dsRNA的体内表达载体,类似于内源表达的hairpin RNAs[2]。在试验中
直接检测癌基因有两种方法：一种是从动物肿瘤中提取 DNA 转染正常细胞使其转化，已确立的小鼠 NIH3T3 纤维瘤细胞株也可作为受体细胞。另一种方法将这种提取的 DNA 注入裸鼠（无免疫能力的一种小鼠）可形成肿瘤。用以上的方法就可用来检测 c-ras 家族的 onc 。 ras 癌基因最初是在两种大鼠的反转录病毒 Ha-Musr 和 Ki-Musy 中发现的。在人和大鼠的基因组中相应的 C-ras,,N-ras,H-ras 和 K-ras
pCAGGS-HA-N哺乳表达质粒
￥100 - 1000
