- ￥100 - 1000
- Xybio
- 上海
- P0116
- 2025年07月16日
9 年钻石会员
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
Plasmid#42876
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pCas9大肠敲除质粒
别称: Plasmid#42876
质粒属性
质粒简介
pCas9质粒是CRISPR/Cas9系统类载体，复制子是p15A ori和ori，质粒大小是9326bp，可转化进相应的宿主细胞中，通大量养条件是LB，37℃。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 9326 bp ds-DNA circular SYN 28-JUN-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS pCas9
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 9326)
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Wednesday, June 28, 2017 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..9326
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter complement(220..322)
/note="cat promoter"
/note="promoter of the E. coli cat gene encoding
chloramphenicol acetyltransferase"
rep_origin complement(848..1393)
/direction=LEFT
/note="p15A ori"
/note="Plasmids containing the medium-copy-number p15A
origin of replication can be propagated in E. coli cells
that contain a second plasmid with the ColE1 origin."
promoter 1505..1533
/note="tet promoter"
/note="E. coli promoter for tetracycline efflux protein
gene"
misc_RNA complement(1851..1929)
/note="tracrRNA"
/note="trans-activating CRISPR RNA for the Streptococcus
pyogenes CRISPR/Cas9 system"
CDS 2225..6331
/codon_start=1
/product="Cas9 (Csn1) endonuclease from the Streptococcus
pyogenes Type II CRISPR/Cas system"
/note="Cas9"
/note="generates RNA-guided double strand breaks in DNA"
/translation="MDKKYSIGLDIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKK
NLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEES
FLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIK
FRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRL
ENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQ
IGDQYADLFLAAKNL-SDAILL-SDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVR
QQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLL
RKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARG
NSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEY
FTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFD
SVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEER
LKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFM
QLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGR
HKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLY
LYYLQNGRDMYVDQELDINRLS-DYDVDHIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVP
SEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKH
VAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYL
NAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKT
EITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSK
ESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGI
TIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNE
LALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILAD
ANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVL
DATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD"
misc_feature 6352..6483
/note="crRNA leader"
/note="crRNA leader sequence for the Streptococcus pyogenes
CRISPR/Cas system"
repeat_region 6484..6519
/note="DR"
/note="direct repeat for the Streptococcus pyogenes
CRISPR/Cas system"
repeat_region 6550..6585
/note="DR"
/note="direct repeat for the Streptococcus pyogenes
CRISPR/Cas system"
CDS complement(8886..219)
/codon_start=1
/gene="cat"
/product="chloramphenicol acetyltransferase"
/note="CmR"
/note="confers resistance to chloramphenicol"
/translation="MEKKITGYTTVDISQWHRKEHFEAFQSVAQCTYNQTVQLDITAFL
KTVKKNKHKFYPAFIHILARLMNAHPEFRMAMKDGELVIWDSVHPCYTVFHEQTETFSS
LWSEYHDDFRQFLHIYSQDVACYGENLAYFPKGFIENMFFVSANPWVSFTSFDLNVANM
DNFFAPVFTMGKYYTQGDKVLMPLAIQVHHAVCDGFHVGRMLNELQQYCDEWQGGA"
ORIGIN
1 gaattccgga tgagcattca tcaggcgggc aagaatgtga ataaaggccg gataaaactt
61 gtgcttattt ttctttacgg tctttaaaaa ggccgtaata tccagctgaa cggtctggtt
121 ataggtacat tgagcaactg actgaaatgc ctcaaaatgt tctttacgat gccattggga
181 tatatcaacg gtggtatatc cagtgatttt tttctccatt ttagcttcct tagctcctga
241 aaatctcgat aactcaaaaa atacgcccgg tagtgatctt atttcattat ggtgaaagtt
301 ggaacctctt acgtgccgat caacgtctca ttttcgccaa aagttggccc agggcttccc
361 ggtatcaaca gggacaccag gatttattta ttctgcgaag tgatcttccg tcacaggtat
421 ttattcggcg caaagtgcgt cgggtgatgc tgccaactta ctgatttagt gtatgatggt
481 gtttttgagg tgctccagtg gcttctgttt ctatcagctg tccctcctgt tcagctactg
541 acggggtggt gcgtaacggc aaaagcaccg ccggacatca gcgctagcgg agtgtatact
601 ggcttactat gttggcactg atgagggtgt cagtgaagtg cttcatgtgg caggagaaaa
661 aaggctgcac cggtgcgtca gcagaatatg tgatacagga tatattccgc ttcctcgctc
721 actgactcgc tacgctcggt cgttcgactg cggcgagcgg aaatggctta cgaacggggc
781 ggagatttcc tggaagatgc caggaagata cttaacaggg aagtgagagg gccgcggcaa
841 agccgttttt ccataggctc cgcccccctg acaagcatca cgaaatctga cgctcaaatc
901 agtggtggcg aaacccgaca ggactataaa gataccaggc gtttccccct ggcggctccc
961 tcgtgcgctc tcctgttcct gcctttcggt ttaccggtgt cattccgctg ttatggccgc
1021 gtttgtctca ttccacgcct gacactcagt tccgggtagg cagttcgctc caagctggac
1081 tgtatgcacg aaccccccgt tcagtccgac cgctgcgcct tatccggtaa ctatcgtctt
1141 gagtccaacc cggaaagaca tgcaaaagca ccactggcag cagccactgg taattgattt
1201 agaggagtta gtcttgaagt catgcgccgg ttaaggctaa actgaaagga caagttttgg
1261 tgactgcgct cctccaagcc agttacctcg gttcaaagag ttggtagctc agagaacctt
1321 cgaaaaaccg ccctgcaagg cggttttttc gttttcagag caagagatta cgcgcagacc
1381 aaaacgatct caagaagatc atcttattaa tcagataaaa tatttctaga tttcagtgca
1441 atttatctct tcaaatgtag cacctgaagt cagccccata cgatataagt tgtaattctc
1501 atgtttgaca gcttatcatc gataagcttt aatgcggtag tttatcacag ttaaattgct
1561 aacgcagtca ggcaccgtgt atgaaatcta acaatgcgct catcgtcatc ctcggcaccg
1621 tcaccctgga tgctgtaggc ataggcttgg ttatgccggt actgccgggc ctcttgcggg
1681 attacgaaat catcctgtgg agcttagtag gtttagcaag atggcagcgc ctaaatgtag
1741 aatgataaaa ggattaagag attaatttcc ctaaaaatga taaaacaagc gttttgaaag
1801 cgcttgtttt tttggtttgc agtcagagta gaatagaagt atcaaaaaaa gcaccgactc
1861 ggtgccactt tttcaagttg ataacggact agccttattt taacttgcta tgctgttttg
1921 aatggttcca acaagattat tttataactt ttataacaaa taatcaagga gaaattcaaa
1981 gaaatttatc agccataaaa caatacttaa tactatagaa tgataacaaa ataaactact
2041 ttttaaaaga attttgtgtt ataatctatt tattattaag tattgggtaa tattttttga
2101 agagatattt tgaaaaagaa aaattaaagc atattaaact aatttcggag gtcattaaaa
2161 ctattattga aatcatcaaa ctcattatgg atttaattta aactttttat tttaggaggc
2221 aaaaatggat aagaaatact caataggctt agatatcggc acaaatagcg tcggatgggc
2281 ggtgatcact gatgaatata aggttccgtc taaaaagttc aaggttctgg gaaatacaga
2341 ccgccacagt atcaaaaaaa atcttatagg ggctctttta tttgacagtg gagagacagc
2401 ggaagcgact cgtctcaaac ggacagctcg tagaaggtat acacgtcgga agaatcgtat
2461 ttgttatcta caggagattt tttcaaatga gatggcgaaa gtagatgata gtttctttca
2521 tcgacttgaa gagtcttttt tggtggaaga agacaagaag catgaacgtc atcctatttt
2581 tggaaatata gtagatgaag ttgcttatca tgagaaatat ccaactatct atcatctgcg
2641 aaaaaaattg gtagattcta ctgataaagc ggatttgcgc ttaatctatt tggccttagc
2701 gcatatgatt aagtttcgtg gtcatttttt gattgaggga gatttaaatc ctgataatag
2761 tgatgtggac aaactattta tccagttggt acaaacctac aatcaattat ttgaagaaaa
2821 ccctattaac gcaagtggag tagatgctaa agcgattctt tctgcacgat tgagtaaatc
2881 aagacgatta gaaaatctca ttgctcagct ccccggtgag aagaaaaatg gcttatttgg
2941 gaatctcatt gctttgtcat tgggtttgac ccctaatttt aaatcaaatt ttgatttggc
3001 agaagatgct aaattacagc tttcaaaaga tacttacgat gatgatttag ataatttatt
3061 ggcgcaaatt ggagatcaat atgctgattt gtttttggca gctaagaatt tatcagatgc
3121 tattttactt tcagatatcc taagagtaaa tactgaaata actaaggctc ccctatcagc
3181 ttcaatgatt aaacgctacg atgaacatca tcaagacttg actcttttaa aagctttagt
3241 tcgacaacaa cttccagaaa agtataaaga aatctttttt gatcaatcaa aaaacggata
3301 tgcaggttat attgatgggg gagctagcca agaagaattt tataaattta tcaaaccaat
3361 tttagaaaaa atggatggta ctgaggaatt attggtgaaa ctaaatcgtg aagatttgct
3421 gcgcaagcaa cggacctttg acaacggctc tattccccat caaattcact tgggtgagct
3481 gcatgctatt ttgagaagac aagaagactt ttatccattt ttaaaagaca atcgtgagaa
3541 gattgaaaaa atcttgactt ttcgaattcc ttattatgtt ggtccattgg cgcgtggcaa
3601 tagtcgtttt gcatggatga ctcggaagtc tgaagaaaca attaccccat ggaattttga
3661 agaagttgtc gataaaggtg cttcagctca atcatttatt gaacgcatga caaactttga
3721 taaaaatctt ccaaatgaaa aagtactacc aaaacatagt ttgctttatg agtattttac
3781 ggtttataac gaattgacaa aggtcaaata tgttactgaa ggaatgcgaa aaccagcatt
3841 tctttcaggt gaacagaaga aagccattgt tgatttactc ttcaaaacaa atcgaaaagt
3901 aaccgttaag caattaaaag aagattattt caaaaaaata gaatgttttg atagtgttga
3961 aatttcagga gttgaagata gatttaatgc ttcattaggt acctaccatg atttgctaaa
4021 aattattaaa gataaagatt ttttggataa tgaagaaaat gaagatatct tagaggatat
4081 tgttttaaca ttgaccttat ttgaagatag ggagatgatt gaggaaagac ttaaaacata
4141 tgctcacctc tttgatgata aggtgatgaa acagcttaaa cgtcgccgtt atactggttg
4201 gggacgtttg tctcgaaaat tgattaatgg tattagggat aagcaatctg gcaaaacaat
4261 attagatttt ttgaaatcag atggttttgc caatcgcaat tttatgcagc tgatccatga
4321 tgatagtttg acatttaaag aagacattca aaaagcacaa gtgtctggac aaggcgatag
4381 tttacatgaa catattgcaa atttagctgg tagccctgct attaaaaaag gtattttaca
4441 gactgtaaaa gttgttgatg aattggtcaa agtaatgggg cggcataagc cagaaaatat
4501 cgttattgaa atggcacgtg aaaatcagac aactcaaaag ggccagaaaa attcgcgaga
4561 gcgtatgaaa cgaatcgaag aaggtatcaa agaattagga agtcagattc ttaaagagca
4621 tcctgttgaa aatactcaat tgcaaaatga aaagctctat ctctattatc tccaaaatgg
4681 aagagacatg tatgtggacc aagaattaga tattaatcgt ttaagtgatt atgatgtcga
4741 tcacattgtt ccacaaagtt tccttaaaga cgattcaata gacaataagg tcttaacgcg
4801 ttctgataaa aatcgtggta aatcggataa cgttccaagt gaagaagtag tcaaaaagat
4861 gaaaaactat tggagacaac ttctaaacgc caagttaatc actcaacgta agtttgataa
4921 tttaacgaaa gctgaacgtg gaggtttgag tgaacttgat aaagctggtt ttatcaaacg
4981 ccaattggtt gaaactcgcc aaatcactaa gcatgtggca caaattttgg atagtcgcat
5041 gaatactaaa tacgatgaaa atgataaact tattcgagag gttaaagtga ttaccttaaa
5101 atctaaatta gtttctgact tccgaaaaga tttccaattc tataaagtac gtgagattaa
5161 caattaccat catgcccatg atgcgtatct aaatgccgtc gttggaactg ctttgattaa
5221 gaaatatcca aaacttgaat cggagtttgt ctatggtgat tataaagttt atgatgttcg
5281 taaaatgatt gctaagtctg agcaagaaat aggcaaagca accgcaaaat atttctttta
5341 ctctaatatc atgaacttct tcaaaacaga aattacactt gcaaatggag agattcgcaa
5401 acgccctcta atcgaaacta atggggaaac tggagaaatt gtctgggata aagggcgaga
5461 ttttgccaca gtgcgcaaag tattgtccat gccccaagtc aatattgtca agaaaacaga
5521 agtacagaca ggcggattct ccaaggagtc aattttacca aaaagaaatt cggacaagct
5581 tattgctcgt aaaaaagact gggatccaaa aaaatatggt ggttttgata gtccaacggt
5641 agcttattca gtcctagtgg ttgctaaggt ggaaaaaggg aaatcgaaga agttaaaatc
5701 cgttaaagag ttactaggga tcacaattat ggaaagaagt tcctttgaaa aaaatccgat
5761 tgacttttta gaagctaaag gatataagga agttaaaaaa gacttaatca ttaaactacc
5821 taaatatagt ctttttgagt tagaaaacgg tcgtaaacgg atgctggcta gtgccggaga
5881 attacaaaaa ggaaatgagc tggctctgcc aagcaaatat gtgaattttt tatatttagc
5941 tagtcattat gaaaagttga agggtagtcc agaagataac gaacaaaaac aattgtttgt
6001 ggagcagcat aagcattatt tagatgagat tattgagcaa atcagtgaat tttctaagcg
6061 tgttatttta gcagatgcca atttagataa agttcttagt gcatataaca aacatagaga
6121 caaaccaata cgtgaacaag cagaaaatat tattcattta tttacgttga cgaatcttgg
6181 agctcccgct gcttttaaat attttgatac aacaattgat cgtaaacgat atacgtctac
6241 aaaagaagtt ttagatgcca ctcttatcca tcaatccatc actggtcttt atgaaacacg
6301 cattgatttg agtcagctag gaggtgactg aagtatattt tagatgaaga ttatttctta
6361 ataactaaaa atatggtata atactcttaa taaatgcagt aatacagggg cttttcaaga
6421 ctgaagtcta gctgagacaa atagtgcgat tacgaaattt tttagacaaa aatagtctac
6481 gaggttttag agctatgctg ttttgaatgg tcccaaaact gagaccagtc tcggaagctc
6541 aaaggtctcg ttttagagct atgctgtttt gaatggtccc aaaacttcag cacactgaga
6601 cttgttgagt tccatgtttt agagctatgc tgttttgaat ggactccatt caacattgcc
6661 gatgataact tgagaaagag ggttaatacc agcagtcgga taccttccta ttctttctgt
6721 taaagcgttt tcatgttata ataggcaaaa gaagagtagt gtgatcgtcc attccgacag
6781 catcgccagt cactatggcg tgctgctagc gctatatgcg ttgatgcaat ttctatgcgc
6841 acccgttctc ggagcactgt ccgaccgctt tggccgccgc ccagtcctgc tcgcttcgct
6901 acttggagcc actatcgact acgcgatcat ggcgaccaca cccgtcctgt ggatcctcta
6961 cgccggacgc atcgtggccg gcatcaccgg cgccacaggt gcggttgctg gcgcctatat
7021 cgccgacatc accgatgggg aagatcgggc tcgccacttc gggctcatga gcgcttgttt
7081 cggcgtgggt atggtggcag gccccgtggc cgggggactg ttgggcgcca tctccttgca
7141 tgcaccattc cttgcggcgg cggtgctcaa cggcctcaac ctactactgg gctgcttcct
7201 aatgcaggag tcgcataagg gagagcgtcg accgatgccc ttgagagcct tcaacccagt
7261 cagctccttc cggtgggcgc ggggcatgac tatcgtcgcc gcacttatga ctgtcttctt
7321 tatcatgcaa ctcgtaggac aggtgccggc agcgctctgg gtcattttcg gcgaggaccg
7381 ctttcgctgg agcgcgacga tgatcggcct gtcgcttgcg gtattcggaa tcttgcacgc
7441 cctcgctcaa gccttcgtca ctggtcccgc caccaaacgt ttcggcgaga agcaggccat
7501 tatcgccggc atggcggccg acgcgctggg ctacgtcttg ctggcgttcg cgacgcgagg
7561 ctggatggcc ttccccatta tgattcttct cgcttccggc ggcatcggga tgcccgcgtt
7621 gcaggccatg ctgtccaggc aggtagatga cgaccatcag ggacagcttc aaggatcgct
7681 cgcggctctt accagcctaa cttcgatcat tggaccgctg atcgtcacgg cgatttatgc
7741 cgcctcggcg agcacatgga acgggttggc atggattgta ggcgccgccc tataccttgt
7801 ctgcctcccc gcgttgcgtc gcggtgcatg gagccgggcc acctcgacct gaatggaagc
7861 cggcggcacc tcgctaacgg attcaccact ccaagaattg gagccaatca attcttgcgg
7921 agaactgtga atgcgcaaac caacccttgg cagaacatat ccatcgcgtc cgccatctcc
7981 agcagccgca cgcggcgcat ctcgggcagc gttgggtcct ggccacgggt gcgcatgatc
8041 gtgctcctgt cgttgaggac ccggctaggc tggcggggtt gccttactgg ttagcagaat
8101 gaatcaccga tacgcgagcg aacgtgaagc gactgctgct gcaaaacgtc tgcgacctga
8161 gcaacaacat gaatggtctt cggtttccgt gtttcgtaaa gtctggaaac gcggaagtcc
8221 cctacgtgct gctgaagttg cccgcaacag agagtggaac caaccggtga taccacgata
8281 ctatgactga gagtcaacgc catgagcggc ctcatttctt attctgagtt acaacagtcc
8341 gcaccgctgt ccggtagctc cttccggtgg gcgcggggca tgactatcgt cgccgcactt
8401 atgactgtct tctttatcat gcaactcgta ggacaggtgc cggcagcgcc caacagtccc
8461 ccggccacgg ggcctgccac catacccacg ccgaaacaag cgccctgcac cattatgttc
8521 cggatctgca tcgcaggatg ctgctggcta ccctgtggaa cacctacatc tgtattaacg
8581 aagcgctaac cgtttttatc aggctctggg aggcagaata aatgatcata tcgtcaatta
8641 ttacctccac ggggagagcc tgagcaaact ggcctcaggc atttgagaag cacacggtca
8701 cactgcttcc ggtagtcaat aaaccggtaa accagcaata gacataagcg gctatttaac
8761 gaccctgccc tgaaccgacg accgggtcga atttgctttc gaatttctgc cattcatccg
8821 cttattatca cttattcagg cgtagcacca ggcgtttaag ggcaccaata actgccttaa
8881 aaaaattacg ccccgccctg ccactcatcg cagtactgtt gtaattcatt aagcattctg
8941 ccgacatgga agccatcaca gacggcatga tgaacctgaa tcgccagcgg catcagcacc
9001 ttgtcgcctt gcgtataata tttgcccatg gtgaaaacgg gggcgaagaa gttgtccata
9061 ttggccacgt ttaaatcaaa actggtgaaa ctcacccagg gattggctga gacgaaaaac
9121 atattctcaa taaacccttt agggaaatag gccaggtttt caccgtaaca cgccacatct
9181 tgcgaatata tgtgtagaaa ctgccggaaa tcgtcgtggt attcactcca gagcgatgaa
9241 aacgtttcag tttgctcatg gaaaacggtg taacaagggt gaacactatc ccatatcacc
9301 agctcaccgt ctttcattgc catacg
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pCas9大肠敲除质粒
别称: Plasmid#42876
| 复制子: | p15A |
|---|---|
| 质粒分类: | 大肠系列质粒；大肠编辑质粒；大肠Cas9质粒 |
| 质粒大小: | 9326bp |
| 原核抗性: | Chl |
| 克隆菌株: | Stbl3 |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 大肠杆菌 |
| 诱导方式: | 无需诱导 |
| 5'测序引物: | StrepPyoCas9-5UTR-F（CGGTGCCACTTTTTCAAGTTG） |
| 3'测序引物: | pBRrevBam（GGTGATGTCGGCGATATAGG） |
质粒属性
| 载体宿主： | 大肠杆菌 |
|---|---|
| 载体用途： | 基因敲除 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | CRISPR |
| 原核抗性： | Chl |
| 筛选标记： | |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pCas9质粒是CRISPR/Cas9系统类载体，复制子是p15A ori和ori，质粒大小是9326bp，可转化进相应的宿主细胞中，通大量养条件是LB，37℃。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 9326 bp ds-DNA circular SYN 28-JUN-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS pCas9
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 9326)
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Wednesday, June 28, 2017 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..9326
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter complement(220..322)
/note="cat promoter"
/note="promoter of the E. coli cat gene encoding
chloramphenicol acetyltransferase"
rep_origin complement(848..1393)
/direction=LEFT
/note="p15A ori"
/note="Plasmids containing the medium-copy-number p15A
origin of replication can be propagated in E. coli cells
that contain a second plasmid with the ColE1 origin."
promoter 1505..1533
/note="tet promoter"
/note="E. coli promoter for tetracycline efflux protein
gene"
misc_RNA complement(1851..1929)
/note="tracrRNA"
/note="trans-activating CRISPR RNA for the Streptococcus
pyogenes CRISPR/Cas9 system"
CDS 2225..6331
/codon_start=1
/product="Cas9 (Csn1) endonuclease from the Streptococcus
pyogenes Type II CRISPR/Cas system"
/note="Cas9"
/note="generates RNA-guided double strand breaks in DNA"
/translation="MDKKYSIGLDIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKK
NLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEES
FLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIK
FRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRL
ENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQ
IGDQYADLFLAAKNL-SDAILL-SDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVR
QQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLL
RKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARG
NSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEY
FTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFD
SVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEER
LKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFM
QLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGR
HKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLY
LYYLQNGRDMYVDQELDINRLS-DYDVDHIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVP
SEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKH
VAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYL
NAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKT
EITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSK
ESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGI
TIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNE
LALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILAD
ANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVL
DATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD"
misc_feature 6352..6483
/note="crRNA leader"
/note="crRNA leader sequence for the Streptococcus pyogenes
CRISPR/Cas system"
repeat_region 6484..6519
/note="DR"
/note="direct repeat for the Streptococcus pyogenes
CRISPR/Cas system"
repeat_region 6550..6585
/note="DR"
/note="direct repeat for the Streptococcus pyogenes
CRISPR/Cas system"
CDS complement(8886..219)
/codon_start=1
/gene="cat"
/product="chloramphenicol acetyltransferase"
/note="CmR"
/note="confers resistance to chloramphenicol"
/translation="MEKKITGYTTVDISQWHRKEHFEAFQSVAQCTYNQTVQLDITAFL
KTVKKNKHKFYPAFIHILARLMNAHPEFRMAMKDGELVIWDSVHPCYTVFHEQTETFSS
LWSEYHDDFRQFLHIYSQDVACYGENLAYFPKGFIENMFFVSANPWVSFTSFDLNVANM
DNFFAPVFTMGKYYTQGDKVLMPLAIQVHHAVCDGFHVGRMLNELQQYCDEWQGGA"
ORIGIN
1 gaattccgga tgagcattca tcaggcgggc aagaatgtga ataaaggccg gataaaactt
61 gtgcttattt ttctttacgg tctttaaaaa ggccgtaata tccagctgaa cggtctggtt
121 ataggtacat tgagcaactg actgaaatgc ctcaaaatgt tctttacgat gccattggga
181 tatatcaacg gtggtatatc cagtgatttt tttctccatt ttagcttcct tagctcctga
241 aaatctcgat aactcaaaaa atacgcccgg tagtgatctt atttcattat ggtgaaagtt
301 ggaacctctt acgtgccgat caacgtctca ttttcgccaa aagttggccc agggcttccc
361 ggtatcaaca gggacaccag gatttattta ttctgcgaag tgatcttccg tcacaggtat
421 ttattcggcg caaagtgcgt cgggtgatgc tgccaactta ctgatttagt gtatgatggt
481 gtttttgagg tgctccagtg gcttctgttt ctatcagctg tccctcctgt tcagctactg
541 acggggtggt gcgtaacggc aaaagcaccg ccggacatca gcgctagcgg agtgtatact
601 ggcttactat gttggcactg atgagggtgt cagtgaagtg cttcatgtgg caggagaaaa
661 aaggctgcac cggtgcgtca gcagaatatg tgatacagga tatattccgc ttcctcgctc
721 actgactcgc tacgctcggt cgttcgactg cggcgagcgg aaatggctta cgaacggggc
781 ggagatttcc tggaagatgc caggaagata cttaacaggg aagtgagagg gccgcggcaa
841 agccgttttt ccataggctc cgcccccctg acaagcatca cgaaatctga cgctcaaatc
901 agtggtggcg aaacccgaca ggactataaa gataccaggc gtttccccct ggcggctccc
961 tcgtgcgctc tcctgttcct gcctttcggt ttaccggtgt cattccgctg ttatggccgc
1021 gtttgtctca ttccacgcct gacactcagt tccgggtagg cagttcgctc caagctggac
1081 tgtatgcacg aaccccccgt tcagtccgac cgctgcgcct tatccggtaa ctatcgtctt
1141 gagtccaacc cggaaagaca tgcaaaagca ccactggcag cagccactgg taattgattt
1201 agaggagtta gtcttgaagt catgcgccgg ttaaggctaa actgaaagga caagttttgg
1261 tgactgcgct cctccaagcc agttacctcg gttcaaagag ttggtagctc agagaacctt
1321 cgaaaaaccg ccctgcaagg cggttttttc gttttcagag caagagatta cgcgcagacc
1381 aaaacgatct caagaagatc atcttattaa tcagataaaa tatttctaga tttcagtgca
1441 atttatctct tcaaatgtag cacctgaagt cagccccata cgatataagt tgtaattctc
1501 atgtttgaca gcttatcatc gataagcttt aatgcggtag tttatcacag ttaaattgct
1561 aacgcagtca ggcaccgtgt atgaaatcta acaatgcgct catcgtcatc ctcggcaccg
1621 tcaccctgga tgctgtaggc ataggcttgg ttatgccggt actgccgggc ctcttgcggg
1681 attacgaaat catcctgtgg agcttagtag gtttagcaag atggcagcgc ctaaatgtag
1741 aatgataaaa ggattaagag attaatttcc ctaaaaatga taaaacaagc gttttgaaag
1801 cgcttgtttt tttggtttgc agtcagagta gaatagaagt atcaaaaaaa gcaccgactc
1861 ggtgccactt tttcaagttg ataacggact agccttattt taacttgcta tgctgttttg
1921 aatggttcca acaagattat tttataactt ttataacaaa taatcaagga gaaattcaaa
1981 gaaatttatc agccataaaa caatacttaa tactatagaa tgataacaaa ataaactact
2041 ttttaaaaga attttgtgtt ataatctatt tattattaag tattgggtaa tattttttga
2101 agagatattt tgaaaaagaa aaattaaagc atattaaact aatttcggag gtcattaaaa
2161 ctattattga aatcatcaaa ctcattatgg atttaattta aactttttat tttaggaggc
2221 aaaaatggat aagaaatact caataggctt agatatcggc acaaatagcg tcggatgggc
2281 ggtgatcact gatgaatata aggttccgtc taaaaagttc aaggttctgg gaaatacaga
2341 ccgccacagt atcaaaaaaa atcttatagg ggctctttta tttgacagtg gagagacagc
2401 ggaagcgact cgtctcaaac ggacagctcg tagaaggtat acacgtcgga agaatcgtat
2461 ttgttatcta caggagattt tttcaaatga gatggcgaaa gtagatgata gtttctttca
2521 tcgacttgaa gagtcttttt tggtggaaga agacaagaag catgaacgtc atcctatttt
2581 tggaaatata gtagatgaag ttgcttatca tgagaaatat ccaactatct atcatctgcg
2641 aaaaaaattg gtagattcta ctgataaagc ggatttgcgc ttaatctatt tggccttagc
2701 gcatatgatt aagtttcgtg gtcatttttt gattgaggga gatttaaatc ctgataatag
2761 tgatgtggac aaactattta tccagttggt acaaacctac aatcaattat ttgaagaaaa
2821 ccctattaac gcaagtggag tagatgctaa agcgattctt tctgcacgat tgagtaaatc
2881 aagacgatta gaaaatctca ttgctcagct ccccggtgag aagaaaaatg gcttatttgg
2941 gaatctcatt gctttgtcat tgggtttgac ccctaatttt aaatcaaatt ttgatttggc
3001 agaagatgct aaattacagc tttcaaaaga tacttacgat gatgatttag ataatttatt
3061 ggcgcaaatt ggagatcaat atgctgattt gtttttggca gctaagaatt tatcagatgc
3121 tattttactt tcagatatcc taagagtaaa tactgaaata actaaggctc ccctatcagc
3181 ttcaatgatt aaacgctacg atgaacatca tcaagacttg actcttttaa aagctttagt
3241 tcgacaacaa cttccagaaa agtataaaga aatctttttt gatcaatcaa aaaacggata
3301 tgcaggttat attgatgggg gagctagcca agaagaattt tataaattta tcaaaccaat
3361 tttagaaaaa atggatggta ctgaggaatt attggtgaaa ctaaatcgtg aagatttgct
3421 gcgcaagcaa cggacctttg acaacggctc tattccccat caaattcact tgggtgagct
3481 gcatgctatt ttgagaagac aagaagactt ttatccattt ttaaaagaca atcgtgagaa
3541 gattgaaaaa atcttgactt ttcgaattcc ttattatgtt ggtccattgg cgcgtggcaa
3601 tagtcgtttt gcatggatga ctcggaagtc tgaagaaaca attaccccat ggaattttga
3661 agaagttgtc gataaaggtg cttcagctca atcatttatt gaacgcatga caaactttga
3721 taaaaatctt ccaaatgaaa aagtactacc aaaacatagt ttgctttatg agtattttac
3781 ggtttataac gaattgacaa aggtcaaata tgttactgaa ggaatgcgaa aaccagcatt
3841 tctttcaggt gaacagaaga aagccattgt tgatttactc ttcaaaacaa atcgaaaagt
3901 aaccgttaag caattaaaag aagattattt caaaaaaata gaatgttttg atagtgttga
3961 aatttcagga gttgaagata gatttaatgc ttcattaggt acctaccatg atttgctaaa
4021 aattattaaa gataaagatt ttttggataa tgaagaaaat gaagatatct tagaggatat
4081 tgttttaaca ttgaccttat ttgaagatag ggagatgatt gaggaaagac ttaaaacata
4141 tgctcacctc tttgatgata aggtgatgaa acagcttaaa cgtcgccgtt atactggttg
4201 gggacgtttg tctcgaaaat tgattaatgg tattagggat aagcaatctg gcaaaacaat
4261 attagatttt ttgaaatcag atggttttgc caatcgcaat tttatgcagc tgatccatga
4321 tgatagtttg acatttaaag aagacattca aaaagcacaa gtgtctggac aaggcgatag
4381 tttacatgaa catattgcaa atttagctgg tagccctgct attaaaaaag gtattttaca
4441 gactgtaaaa gttgttgatg aattggtcaa agtaatgggg cggcataagc cagaaaatat
4501 cgttattgaa atggcacgtg aaaatcagac aactcaaaag ggccagaaaa attcgcgaga
4561 gcgtatgaaa cgaatcgaag aaggtatcaa agaattagga agtcagattc ttaaagagca
4621 tcctgttgaa aatactcaat tgcaaaatga aaagctctat ctctattatc tccaaaatgg
4681 aagagacatg tatgtggacc aagaattaga tattaatcgt ttaagtgatt atgatgtcga
4741 tcacattgtt ccacaaagtt tccttaaaga cgattcaata gacaataagg tcttaacgcg
4801 ttctgataaa aatcgtggta aatcggataa cgttccaagt gaagaagtag tcaaaaagat
4861 gaaaaactat tggagacaac ttctaaacgc caagttaatc actcaacgta agtttgataa
4921 tttaacgaaa gctgaacgtg gaggtttgag tgaacttgat aaagctggtt ttatcaaacg
4981 ccaattggtt gaaactcgcc aaatcactaa gcatgtggca caaattttgg atagtcgcat
5041 gaatactaaa tacgatgaaa atgataaact tattcgagag gttaaagtga ttaccttaaa
5101 atctaaatta gtttctgact tccgaaaaga tttccaattc tataaagtac gtgagattaa
5161 caattaccat catgcccatg atgcgtatct aaatgccgtc gttggaactg ctttgattaa
5221 gaaatatcca aaacttgaat cggagtttgt ctatggtgat tataaagttt atgatgttcg
5281 taaaatgatt gctaagtctg agcaagaaat aggcaaagca accgcaaaat atttctttta
5341 ctctaatatc atgaacttct tcaaaacaga aattacactt gcaaatggag agattcgcaa
5401 acgccctcta atcgaaacta atggggaaac tggagaaatt gtctgggata aagggcgaga
5461 ttttgccaca gtgcgcaaag tattgtccat gccccaagtc aatattgtca agaaaacaga
5521 agtacagaca ggcggattct ccaaggagtc aattttacca aaaagaaatt cggacaagct
5581 tattgctcgt aaaaaagact gggatccaaa aaaatatggt ggttttgata gtccaacggt
5641 agcttattca gtcctagtgg ttgctaaggt ggaaaaaggg aaatcgaaga agttaaaatc
5701 cgttaaagag ttactaggga tcacaattat ggaaagaagt tcctttgaaa aaaatccgat
5761 tgacttttta gaagctaaag gatataagga agttaaaaaa gacttaatca ttaaactacc
5821 taaatatagt ctttttgagt tagaaaacgg tcgtaaacgg atgctggcta gtgccggaga
5881 attacaaaaa ggaaatgagc tggctctgcc aagcaaatat gtgaattttt tatatttagc
5941 tagtcattat gaaaagttga agggtagtcc agaagataac gaacaaaaac aattgtttgt
6001 ggagcagcat aagcattatt tagatgagat tattgagcaa atcagtgaat tttctaagcg
6061 tgttatttta gcagatgcca atttagataa agttcttagt gcatataaca aacatagaga
6121 caaaccaata cgtgaacaag cagaaaatat tattcattta tttacgttga cgaatcttgg
6181 agctcccgct gcttttaaat attttgatac aacaattgat cgtaaacgat atacgtctac
6241 aaaagaagtt ttagatgcca ctcttatcca tcaatccatc actggtcttt atgaaacacg
6301 cattgatttg agtcagctag gaggtgactg aagtatattt tagatgaaga ttatttctta
6361 ataactaaaa atatggtata atactcttaa taaatgcagt aatacagggg cttttcaaga
6421 ctgaagtcta gctgagacaa atagtgcgat tacgaaattt tttagacaaa aatagtctac
6481 gaggttttag agctatgctg ttttgaatgg tcccaaaact gagaccagtc tcggaagctc
6541 aaaggtctcg ttttagagct atgctgtttt gaatggtccc aaaacttcag cacactgaga
6601 cttgttgagt tccatgtttt agagctatgc tgttttgaat ggactccatt caacattgcc
6661 gatgataact tgagaaagag ggttaatacc agcagtcgga taccttccta ttctttctgt
6721 taaagcgttt tcatgttata ataggcaaaa gaagagtagt gtgatcgtcc attccgacag
6781 catcgccagt cactatggcg tgctgctagc gctatatgcg ttgatgcaat ttctatgcgc
6841 acccgttctc ggagcactgt ccgaccgctt tggccgccgc ccagtcctgc tcgcttcgct
6901 acttggagcc actatcgact acgcgatcat ggcgaccaca cccgtcctgt ggatcctcta
6961 cgccggacgc atcgtggccg gcatcaccgg cgccacaggt gcggttgctg gcgcctatat
7021 cgccgacatc accgatgggg aagatcgggc tcgccacttc gggctcatga gcgcttgttt
7081 cggcgtgggt atggtggcag gccccgtggc cgggggactg ttgggcgcca tctccttgca
7141 tgcaccattc cttgcggcgg cggtgctcaa cggcctcaac ctactactgg gctgcttcct
7201 aatgcaggag tcgcataagg gagagcgtcg accgatgccc ttgagagcct tcaacccagt
7261 cagctccttc cggtgggcgc ggggcatgac tatcgtcgcc gcacttatga ctgtcttctt
7321 tatcatgcaa ctcgtaggac aggtgccggc agcgctctgg gtcattttcg gcgaggaccg
7381 ctttcgctgg agcgcgacga tgatcggcct gtcgcttgcg gtattcggaa tcttgcacgc
7441 cctcgctcaa gccttcgtca ctggtcccgc caccaaacgt ttcggcgaga agcaggccat
7501 tatcgccggc atggcggccg acgcgctggg ctacgtcttg ctggcgttcg cgacgcgagg
7561 ctggatggcc ttccccatta tgattcttct cgcttccggc ggcatcggga tgcccgcgtt
7621 gcaggccatg ctgtccaggc aggtagatga cgaccatcag ggacagcttc aaggatcgct
7681 cgcggctctt accagcctaa cttcgatcat tggaccgctg atcgtcacgg cgatttatgc
7741 cgcctcggcg agcacatgga acgggttggc atggattgta ggcgccgccc tataccttgt
7801 ctgcctcccc gcgttgcgtc gcggtgcatg gagccgggcc acctcgacct gaatggaagc
7861 cggcggcacc tcgctaacgg attcaccact ccaagaattg gagccaatca attcttgcgg
7921 agaactgtga atgcgcaaac caacccttgg cagaacatat ccatcgcgtc cgccatctcc
7981 agcagccgca cgcggcgcat ctcgggcagc gttgggtcct ggccacgggt gcgcatgatc
8041 gtgctcctgt cgttgaggac ccggctaggc tggcggggtt gccttactgg ttagcagaat
8101 gaatcaccga tacgcgagcg aacgtgaagc gactgctgct gcaaaacgtc tgcgacctga
8161 gcaacaacat gaatggtctt cggtttccgt gtttcgtaaa gtctggaaac gcggaagtcc
8221 cctacgtgct gctgaagttg cccgcaacag agagtggaac caaccggtga taccacgata
8281 ctatgactga gagtcaacgc catgagcggc ctcatttctt attctgagtt acaacagtcc
8341 gcaccgctgt ccggtagctc cttccggtgg gcgcggggca tgactatcgt cgccgcactt
8401 atgactgtct tctttatcat gcaactcgta ggacaggtgc cggcagcgcc caacagtccc
8461 ccggccacgg ggcctgccac catacccacg ccgaaacaag cgccctgcac cattatgttc
8521 cggatctgca tcgcaggatg ctgctggcta ccctgtggaa cacctacatc tgtattaacg
8581 aagcgctaac cgtttttatc aggctctggg aggcagaata aatgatcata tcgtcaatta
8641 ttacctccac ggggagagcc tgagcaaact ggcctcaggc atttgagaag cacacggtca
8701 cactgcttcc ggtagtcaat aaaccggtaa accagcaata gacataagcg gctatttaac
8761 gaccctgccc tgaaccgacg accgggtcga atttgctttc gaatttctgc cattcatccg
8821 cttattatca cttattcagg cgtagcacca ggcgtttaag ggcaccaata actgccttaa
8881 aaaaattacg ccccgccctg ccactcatcg cagtactgtt gtaattcatt aagcattctg
8941 ccgacatgga agccatcaca gacggcatga tgaacctgaa tcgccagcgg catcagcacc
9001 ttgtcgcctt gcgtataata tttgcccatg gtgaaaacgg gggcgaagaa gttgtccata
9061 ttggccacgt ttaaatcaaa actggtgaaa ctcacccagg gattggctga gacgaaaaac
9121 atattctcaa taaacccttt agggaaatag gccaggtttt caccgtaaca cgccacatct
9181 tgcgaatata tgtgtagaaa ctgccggaaa tcgtcgtggt attcactcca gagcgatgaa
9241 aacgtttcag tttgctcatg gaaaacggtg taacaagggt gaacactatc ccatatcacc
9301 agctcaccgt ctttcattgc catacg
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P0664/hCas9-D10A哺乳编辑质粒 |
| P0706/pBPK2139-SaCas9哺乳编辑质粒 |
| P1068/pBPK3079-U6-AsCpf1crRNA哺乳编辑质粒 |
| P0707/VVT1哺乳编辑质粒 |
| P0736/pMSP469-Cas9VQR哺乳编辑质粒 |
| P0737/eSpCas9(1.1)哺乳编辑质粒 |
| P0738/pX330A-1x3哺乳编辑质粒 |
| P0739/pX330A-1x2哺乳编辑质粒 |
| P0740/pX330S-2-PITCh哺乳编辑质粒 |
| P0741/pX330A-FBL-PITCh哺乳编辑质粒 |
| P0742/pCRIS-PITChv2-FBL哺乳编辑质粒 |
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
- 作者
- 内容
- 询问日期
文献和实验相关实验
mnidr 请问最早的质粒是在哪发现的？原始的野生型大肠杆菌是不是没有质粒？我做实验用试剂盒提质粒有的大肠杆菌就提不出。 多谢 freecell 1946年，莱德伯格(Lederburg)和塔特姆(Tatum)发现的F因子是最早发现的质粒，1952年，由Lederburg正式命名为质粒。 确切地讲，质粒是细菌内的共生遗传因子，它能在细菌中垂直遗传并赋予宿主细胞一些表型，例如对抗
摘要： 转化是将外源DNA分子通过物理或化学的方法导入基因工程细菌中的过程,是基因工程等研究领域的基本实验技术之一. 外源质粒 DNA 转化 大肠杆菌 1 实验简介 转化是将外源DNA分子通过物理或化学的方法导入基因工程 细菌 中的过程,是基因工程等研究领域的基本实验技术之一.现演示利用化学的方法(热击法)：使用
相关专题 DNA连接与转化 质粒 转化是将外源DNA分子 通过物理或化学的方法导入基因工程 细菌 中的过程,是基因工程 等研究领域的基本实验技术之一. 外源质粒 DNA转化 大肠杆菌 1 实验简介 转化是将外源DNA分子通过物理或化学的方法导入基因工程细菌中的过程,是基因工程等研究领域的基本实验技术之一.现演示利用化学的方法(热击法)：使用化学试剂(如CaCl2)制备的感受态细胞,通过热
pCas9大肠敲除质粒
￥100 - 1000
